一、浙江产中华眼镜蛇(Naja naja atra)毒核糖核酸酶的研究（论文文献综述）
蒋凯,严发展,丁秦超,陈鑫珉,梁文星,丁滨[1]（2018）在《水解蛇蜕的几种方法及水解产物的生物活性研究》文中研究指明目的比较几种蛇蜕水解方法的水解效率,并以Ha Ca T细胞评价水解产物的生物活性。方法利用乙酸、Na OH、氧化还原两步法在不同温度和时间条件下水解蛇蜕;利用茚三酮法、考马斯亮蓝法检测水解产物中氨基酸及多肽的含量;用HPLC测定提水解产物分子量;利用Ha Ca T评价水解产物的生物活性。结果酸水解的最适条件为80℃、2.5mol/L乙酸反应6h;碱水解的最适条件为80℃、0.625mol/L Na OH反应6h;氧化还原水解法最适试剂浓度分别为6%过硫酸氢钾、4mol/L尿素、1.25%亚硫酸氢钠;通过上述方法获得的胶原蛋白多肽分子量约为1k Da。该多肽能够促进细胞体外增殖。
张迎征[2]（2016）在《野生与人工养殖的中华眼镜蛇（Naja Atra）毒液的比较研究》文中指出近年来,中华眼镜蛇的食用和药用等价值逐渐被重视,但由于多种因素导致野生中华眼镜蛇数量减少,因此,为达到满足市场需求和保护野生动物等目的,目前普遍采用人工饲料喂养和无冬眠快速养殖等技术大量养殖中华眼镜蛇。但是,已有报道指出野生与养殖毒蛇的毒液间存在一定差异,而目前为止,暂未见对其具体差异进行系统性比较分析的相关报道。蛇毒主要由几十种蛋白质（酶）或多肽构成的混合物（或“弹药库”）,这些蛋白或多肽是由毒腺细胞里的毒素基因转录翻译表达出的,已有研究表明编码这些毒素的基因是经过亿万年的加速进化被募集到毒腺细胞里产生的,进而造成毒素蛋白的差异性。因此,本研究从毒液组成、成分活性、毒理学研究、毒素基因的转录组水平、不同喂养的食物等方面对野生和人工养殖的中华眼镜蛇毒液进行了比较分析,为人工养殖中华眼镜蛇的蛇毒生产及其咬伤治疗所用的抗蛇毒血清生产提供理论支持或指导。本研究通过系统性研究与分析,得到以下结果:（1）SDS-PAGE比较结果:变性SDS-PAGE显示,野生比养殖的眼镜蛇毒液多一条蛋白带（95 kD）,且在55 kD处的蛋白含量较高;非变性SDS-PAGE显示,野生比养殖眼镜蛇毒液在170 kD处的含量高;RP-HPLC显示,野生比养殖眼镜蛇毒液在20min、50min处的出峰面积大。（2）酶活性比较结果:卵磷脂平板法进行PLA2活性测定,结果显示:上样量为30μg的野生的与养殖的眼镜蛇毒液水解卵磷脂后的透明圈平均直径分别为16.45 mm、18.38 mm;透明质酸平板法进行透明质酸酶活性测定,结果显示:上样量为30μg的野生的与养殖的中华眼镜蛇毒液水解透明质酸后的透明圈平均直径分别为12.81 mm、11.57 mm;亮氨酸为底物,测得上样量为10μg的野生的与养殖的中华眼镜蛇毒液L-AAO酶活性分别为0.341、0.397（用490 nm处吸光值表示活性大小）;PNPP为底物,测得上样量为30μg野生的与养殖的中华眼镜蛇毒液的碱性磷酸单酯酶活性分别为0.199、0.184（405 nm处的吸光值表示活性大小）;碘化乙酰胆碱为底物,测得30μg的野生的与养殖的中华眼镜蛇毒液的乙酰胆碱酯酶活性分别为0.297、0.413（用405 nm处的吸光值表示活性大小）;Azo-casein为底物,测得30μg的野生的与养殖的眼镜蛇毒液的蛋白水解酶活性吸光值分别为0.104、0.106（630 nm处的吸光值表示活性大小）,二者活性无显着差异;AMP为底物,测得20μg的野生的与养殖的眼镜蛇毒液的5’-核苷酸酶活性,酶活力大小分别为82.17 U、75.83 U。（3）毒理活性比较结果:经小鼠足趾皮下注射8μg的野生的与养殖的中华眼镜蛇毒液后的足趾胀胀厚度分别为3.6 mm、3.86 mm;经小鼠尾静脉注射8μg的野生的与养殖的中华眼镜蛇毒液后镇痛时间分别延长至7.5 s、6.86 s;经小鼠腹腔注射野生的与养殖的眼镜蛇毒液引起LD50的量无明显差异,分别为0.79μg/g、0.81μg/g,但野生眼镜蛇毒液的致死速度比养殖的中华眼镜蛇毒液的快。（4）转录组分析结果显示人工养殖的中华眼镜蛇毒腺中5’-NT、L-AAO、蛋白水解酶、乙酰胆碱酯酶的表达量相对于野生的呈上调趋势;PLA2、3-FTX的表达量相对于野生的呈下调趋势。（5）养殖组中华眼镜蛇的食物不同,导致其生长速度存在一定差异:食用活小鼠的中华眼镜蛇其生长速度较慢,喂养人工饲料的蛇则生长速度较快。而非还原SDS-PAGE显示:食用活体小鼠的成蛇,其毒液蛋白比喂养人工饲料的成蛇的毒液蛋白多一条蛋白带（90 kD）;而食用活体小鼠的幼蛇,其毒液的大分子蛋白含量比食用人工饲料的幼蛇的高;喂食小鼠四个月后:喂食小鼠的养殖眼镜蛇毒液中的PLA2活性、蛋白水解酶活性比喂食人工饲料的高,喂食人工饲料的养殖眼镜蛇毒液中的透明质酸酶活性比喂食小鼠的高。
郭文韬[3]（2013）在《大鲵遗传多样性及皮肤附属物特性研究》文中研究表明大鲵作为中国特有濒临灭绝的二级保护动物,国家已经建立16个专业大鲵保护区及一些自然保护区（大鲵列为保护名录）,对大鲵的适生环境和人工繁殖技术开展研究,逐步建立起大鲵人工繁育体系,有效地保护该物种。目前大鲵保护存在一些不足：（1）大鲵种质资源混乱,近亲繁殖,导致大鲵种质的退化,不利于物种的长期生存,有必要对人工养殖大鲵的亲本进行遗传多样性及亲缘关系分析,辨别其混乱的亲本,提供合理的保护策略。（2）缺乏可持续保护方法,大鲵皮肤附属物分泌物和蜕皮是大鲵自然生理特征,可以多次产生,属于可以利用的可再生物质,对这部分加以研究,利用好这部分物质,更适合大鲵资源的长远保护。本课题以大鲵皮肤附属物分泌物和蜕皮为研究对象,建立了非伤害取样技术提取基因组DNA,筛选SSR标记位点,分析了大鲵亲本的遗传多样性和亲缘关系,为制定大鲵长远保护策略提供依据。对其组成及理化性质进行分析,并结合动物模型评价其具体功效,为充分合理利用大鲵皮肤附属物提供支持：（1）大鲵亲本的遗传多样性分析：建立了非损伤大鲵样本组织替代技术,从大鲵分泌物和蜕皮中提取大鲵基因组DNA。通过扩增线粒体12S序列证实该方法获得的DNA可以用于遗传结构分析。从这种组织样本获得的基因组DNA扩增出34个微卫星序列,其中10个微卫星序列具有良好的多态性,用于大鲵资源遗传多样性分析。张家界大鲵核心保护区人工养殖大鲵亲本具有丰富的遗传多样性,聚类分析属于4个种群。（2）分泌物的理化性质及活性分析：为高度含水的凝胶样物质,主要成分为蛋白质。仅溶于5%（V/V）醋酸溶液和蛋白酶溶液,具有很强的粘性,其平均分子量为3.61×106。分泌物可溶组分含有蛋白水解酶活性和磷脂酶A2活性。没有明显抗菌活性,仅在早期有微弱抑制微生物生长的活性。具有抗氧化特性,对DPPH和ABTS清除效果显着,在0.6mg/ml其清除活性达到了90.83%和93.12%,热变性制备的多肽在0.05mg/ml对ABTS的清除活性达到了70.90%。（3）大鲵分泌物的毒性及抗肿瘤活性：大鲵皮肤分泌物可溶组分对小鼠有致死活性,LD50（腹腔）值为32.95mg/kg,其活性组分为热不稳定蛋白质。解剖死亡个体发现肺部组织发生明显变化,有充血现象,抽搐可能会导致小鼠死亡。大鲵分泌物对小鼠产生一些局部影响,可诱导小鼠显着的疼痛活动,促进血管通透性增加,导致持续性肿胀,没有引起明显的出血活性,可使肌肉组织肿胀坏死。体内抑制腹水瘤细胞的生长,减少腹水瘤细胞的数量,延长存活期,分泌物水溶物能明显改善小鼠血液指标,对肝脏结构没有带来明显损伤。体外对肿瘤细胞和正常细胞均有抑制生长活性,其抑制活性对不同的细胞存在差异,抑制活性机制不是促使肿瘤细胞的凋亡。（4）大鲵蜕皮的组成及治疗烧烫伤的活性：大鲵蜕皮含有丰富的氨基酸、矿物元素和8种脂肪酸。大鲵蜕皮大剂量软膏可明显提高创面愈合率,缩短创面愈合时间,加速创面愈合,抑制促炎因子活性可能是发挥作用的机制之一。
张秉怡[4]（2010）在《白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶分离纯化及理化性质研究》文中研究表明白眉蝮蛇（Agkistrodon blomhoffii Ussurensis）属于蝰蛇科蝮蛇亚科,是我国剧毒蛇类之一,在国内广泛分布河北、甘肃、上海、辽宁、台湾等省市,在国外朝鲜半岛也有分布。白眉蝮蛇毒已作为生产溶血栓药物“蛇毒溶栓酶”的主要原料,但蛇毒中其他活性组分的分离纯化、生物学特性及其经济价值还未得到全面深入研究。5’-核苷酸酶（5’-nucleotidase）是催化核苷酸分子中的磷酸键水解的一种特异性水解磷酸酶。5’-核苷酸酶能特异地水解5’-核苷酸酶和5’-脱氧核苷酸酶连接戊糖的5’-磷酸,生成对应的核苷或脱氧核苷和无机磷酸。5’-核苷酸酶是一种常规分子生物学酶试剂,因其活性的变化与很多疾病密切相关,还可以用作许多疾病的诊断对照试剂,比如：肝胆疾病、冠心病、肺癌、消化道肿瘤、甲亢、骨病、喉癌等。5’-核苷酸酶广泛分布于细菌、植物细胞和蛇毒毒液中。1951年Hepple首次从蛇毒中分离纯化出5’-核苷酸酶。至今为止已发现二十八种蛇毒5’-核苷酸酶,但尚未有白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶相关研究报道。建立白眉蝮蛇毒5’-核苷酸酶的分离纯化方法,并对其理化性质进行研究,将为白眉蝮蛇毒的深入开发、积累5’-核苷酸酶基础数据等方面都具有重要意义。本论文采用离子交换DEAE Sephadex A-25柱层析、凝胶过滤SephadexG-75柱层析,从白眉蝮蛇蛇毒分离纯化得到了一个5’-核苷酸酶。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis, SDS-PAGE）鉴定了其纯度并计算了其分子量,测定了其比活、最适pH、温度等理化性质,考察了常见金属离子对其活性的影响,还观察了简单糖对其活性的保护作用以及其对ADP诱导的血小板聚集过程的影响。经SDS-PAGE此5’-核苷酸酶分子量为70kDa,用高碘酸硝酸银阿利辛蓝染色法鉴定白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶为糖蛋白。白眉蝮蛇蛇毒5，-核苷酸酶的最适温度为55℃,最适pH为pH 9.0。以AMP为底物测得纯化所得酶蛋白的5，-核苷酸酶活力为562.44U。从目前的实验结果看来,此5’-核苷酸酶对热稳定酶,耐碱性环境。Cu2+、Fe3+浓度范围为（0.05 mmol/L.0.3mmol/L）能抑制白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶活性,Fe3+强烈抑制白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶活性。Mg2+、Ca2+、K+浓度范围为（0.05 mmol/L.0.3mmol/L）均能促进白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶活性,其中Ca2+促进效果更好。低溶度（0.05 mmol/L.0.25mmol/L）β-巯基乙醇对白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶活性有一定促进作用。低浓度（0.05mmol/L.0.25mmol/L）EDTA对白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶活性有促进作用,而0.3 mmol/L EDTA对白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶有明显抑制作用。可能是因为低溶度EDTA能作为金属螯合剂先与抑制白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶的金属离子结合比如Cu2+、Fe3+,随着EDTA溶度增加与促进白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶金属离子结合比如Mg2+、、Ca2+、K+等。导致白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶活性降低。本文还研究了单糖和双糖对酶蛋白的保护作用,实验中采用了葡萄糖、果糖、海藻糖、蔗糖四种。经测定,葡萄糖、果糖、海藻糖对白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶均具有一定的保护作用。糖对白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶保护作用从未有发现,具体机制尚待研究。白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶对血小板聚集有诱导作用,促进ADP诱导的血小板聚集。白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶可以作为血小板聚集的诱导剂。值得注意的是,这一实验现象与目前文献报道其他蛇毒5’-核苷酸酶活性相反。其机制还待进一步深入探讨。
陈思[5]（2010）在《蛇毒的分离、纯化及其抗肿瘤活性研究》文中研究表明蛇类在世界范围内分布广泛,种类繁多,在中国大陆已发现200多种蛇种及54种亚种。因此,对蛇毒中富含的生物活性成份研究与开发一直是基础医学和制药工业关注的重要研究领域。近年来,研究者分离纯化出一些蛇毒中的酶类及神经毒素等活性物质,其生物活性也得到了应用。但蛇毒中的多种蛋白成分及其生物活性功能仍不为人类所了解。与国际研究水平相比,国内至今只对其中少数几种粗毒或部份纯化的蛋白组分进行了抗肿瘤作用研究,绝大部分蛇毒抗肿瘤成分都没有被发掘出来。本论文以我国华南地区广西常见的眼镜蛇毒为分离样品源,进行了蛇毒蛋白的纯化、分离,检测其抗肿瘤活性,对眼镜蛇毒各组分进行跟踪筛选与评价,旨在为发现具有临床应用价值的抗肿瘤作用活性物质打下理论基础。首先,选取眼镜蛇、蝮蛇、金环蛇和蟒蛇为原料,检测四种蛇毒对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用,确定这四种蛇毒的抗癌活性作用依次减弱；利用MTT法检测眼镜蛇毒和蝮蛇毒的半数抑制浓度（IC50）分别为5.12和22.50μg／mL,而蟒蛇毒和金环蛇毒的IC50均大于100μg／mL。选择抗肿瘤活性作用最为明显的眼镜蛇毒做进一步研究。利用FOCUSTM-Mammalian Proteome试剂盒结合真空浓缩离心系统处理,得到蛇毒粗纯蛋白样品。眼镜蛇毒粗纯蛋白对人肝癌HepG2细胞的半数抑制浓度（IC50）为1.07μg／mL。眼镜蛇毒和蛇毒粗纯蛋白对人肝正常HL-7702细胞有一定的细胞毒性,并对比肿瘤细胞的IC50值,确定蛇毒粗纯蛋白选择性更强。为研究蛇毒粗纯蛋白抑制肿瘤细胞增殖的时效和量效关系,本实验绘制蛇毒粗纯蛋白处理后HepG2细胞的生长曲线,结果显示其可浓度和时间依赖性的抑制肿瘤细胞增殖。采用吖啶橙染色进行形态学观察,发现细胞形态呈时间和浓度依赖性变化,低浓度蛇毒粗纯蛋白处理组细胞圆缩、贴壁能力下降,密布黄绿色芽孢状突起；各组细胞核或细胞质内可见致密的黄绿色荧光,甚至可见浓染的黄绿色碎片,呈现细胞凋亡形态学变化；在高浓度处理组有一定的坏死细胞出现,细胞膜破裂,呈弥散状。以Tris-HCl缓冲液（20mM, pH8.0）为洗脱体系,用0-0.5M NaCl的Tris-Hcl溶液进行线性梯度洗脱,洗脱流速为0.5 mL/min,建立眼镜蛇毒粗纯蛋白的离子交换层析分离方法,紫外检测波长280nm,共得到四个吸收峰,其中一、二两个洗脱峰是蛇毒粗纯蛋白的主要成分。进一步采用高效液相比较分析各洗脱峰下所对应馏分的蛋白洗脱模式。各馏分的液相分析选用反相柱（Lichrospher C18,150×4.6 mm,5μm i. d.）,上样量20μL,流动相为A （0.1%v/v TFA,98%v/vACN）,流动相B （0.1%v/v TFA,2%v/v ACN）,按14.7%-88.2% ACN（15-90%流动相A）比例进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,紫外全波长扫描。第一洗脱峰,馏分9-12,含有多种蛋白成分,其中两类疏水性、紫外吸收特性各异的蛋白混合物含量较高,而另外三个吸收峰分别存在单一蛋白,它们的疏水性及光谱特性均有所不同。以牛血清白蛋白为标准,采用BCA法检测各馏分总蛋白含量,结果与离子交换柱洗脱曲线一致。根据分析结果,选取四大洗脱峰中的代表性馏分,进一步追踪筛选其活性,并通过SDS-PAGE法定性鉴定对应馏分的蛋白分子量大小。结果显示相比眼镜蛇毒粗纯蛋白,各馏分对人肝癌HepG2细胞的半数抑制浓度（IC50）较大。其中第一洗脱峰抗癌活性最强,它对应的是两类疏水性各异的蛋白混合物,在反相色谱平缓洗脱条件下仍然难以分开,蛋白分子量分布于<14-30KDa。本实验应用溶液酶解,2D-LC, QStar Elite MS/MS技术鉴定相应馏分的蛋白成分,结构鉴定、数据处理工作仍在进行当中。
李卉[6]（2008）在《中华眼镜蛇（Naja naja atra）毒神经生长因子对PC12细胞阿片受体表达的影响》文中指出目的:大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系（PC12）被广泛用于NGF的活性测定,同时用NGF处理PC12细胞后,PC12细胞分化成的交感神经元样细胞,在形态、生理、生化及功能方面接近于神经元,能形成神经突起和突触样连接,并且比较容易在体外稳定培养,是在分子水平上研究神经元分化较为理想的模型。但NGF促PC12细胞分化的具体机制还不清楚。有研究表明小鼠神经生长因子诱导PC12细胞分化时,内源性阿片受体有变化。提示我们NGF促PC12细胞分化的机制可能与阿片受体有关。因此,本文主要研究中华眼镜蛇毒神经生长因子（nNGF）对PC12细胞形态的影响及nNGF对PC12细胞阿片受体基因和蛋白质表达的影响,为进一步研究nNGF促PC12细胞分化机制提供一定的实验依据,同时也为nNGF的更广泛的研究奠定实验基础。方法:（1）显微镜观察50 ng/ml nNGF对体外培养的PC12细胞形态的影响。（2）用RT-PCR方法半定量地考察25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml nNGF对PC12细胞δ、κ阿片受体mRNA表达的影响的剂量效应;检测50 ng/ml nNGF处理后,设置5个不同时相点,观察PC12细胞δ、κ阿片受体mRNA表达与50 ng/ml nNGF的时间依赖关系;检测吗啡、纳络酮对nNGF作用的影响。（3）用Western blot方法检测25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml nNGF对PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响的剂量效应;检测50 ng/ml nNGF处理后,设置5个不同时相点,观察PC12细胞κ阿片受体蛋白质表达与50 ng/ml nNGF的时间依赖关系;检测吗啡、纳络酮对nNGF作用的影响。主要结果与结论:（1）PC12细胞对nNGF很敏感,nNGF能促进PC12细胞高度分化,长出神经样纤维,形态类似于神经元。（2） nNGF处理后PC12细胞δ、κ阿片受体mRNA的表达都具有一定的剂量效应。随着nNGF使用剂量的增加,PC12细胞κ阿片受体mRNA水平的表达会降低,其中50 ng/ml剂量组对PC12细胞κ阿片受体mRNA表达水平的影响最显着,此剂量时κ阿片受体mRNA的表达水平最低;而PC12细胞δ阿片受体mRNA水平的表达则随剂量的增加而升高。（3） 50 ng/ml nNGF处理PC12细胞后,在1 d到10 d中,PC12细胞κ阿片受体和δ阿片受体mRNA水平的表达总体上相反,κ阿片受体mRNA水平的表达呈下调趋势;而δ阿片受体mRNA水平的表达呈上调趋势。（4） nNGF增强δ阿片受体mRNA的表达,该效应能被纳络酮逆转,而纳络酮的这个抑制作用又可以被吗啡逆转;nNGF降低κ阿片受体mRNA水平的表达,且能被吗啡、纳络酮分别逆转。（5） nNGF处理后PC12细胞κ阿片受体蛋白质和mRNA的表达趋势总体上一致。随着nNGF使用剂量的增加,PC12细胞κ阿片受体蛋白质水平的表达会降低,50 ng/ml剂量组对PC12细胞κ阿片受体蛋白质水平的影响最显着,蛋白质水平的表达最低。（6） 50 ng/ml nNGF处理PC12细胞后,在1 d到10 d中,PC12细胞κ阿片受体蛋白质的表达随时间的增加呈现降低的趋势,一直下调。（7） nNGF降低κ阿片受体蛋白质水平的表达,且能被吗啡、纳络酮分别逆转。（8） nNGF对阿片受体的表达有影响,阿片系统可能参与了nNGF促PC12细胞分化的过程。
叶勇[7]（2003）在《江浙蝮蛇毒镇痛C4组分提取纯化及其对内阿片肽调控机理研究》文中研究指明本论文的研究源于中药戒毒制剂冰茶栓，它是导师王泽时教授经过多年研制的，以江浙蝮蛇毒为君药的中药复方制剂，能显着控制以疼痛为主的戒断症状。探索江浙蝮蛇毒在戒毒镇痛中所起的作用，对于阐明冰茶栓的作用机理具有十分重要的意义。但江浙蝮蛇毒是一种复杂蛋白，其中每一种蛋白均有不同的药理作用，因此需要从中分离出一种具有良好戒毒镇痛效果的蛋白质，明确其性质，才能进行相关的机理研究。本论文基于此目的，分离筛选出一种江浙蝮蛇毒碱性蛋白质，揭示了它的理化性质、作用途径及对中枢神经递质的调控机理，从而为江浙蝮蛇毒的新药开发奠定了理论基础。 第一部分 冰茶栓靶基因及靶药物的筛选研究 通过冰茶栓药物靶作用的研究，发现冰茶栓能显着控制海洛因依赖猴的戒断症状，同时通过猴大脑中枢纹状体组织的基因芯片研究，找到其有显着性差异表达的基因。用剂量递增法形成海洛因依赖性猴，并进行等级评分，判定猴对海洛因的依赖程度。当形成依赖后，撤药期间，取正常组、阴性组和冰茶栓治疗组猴，从心脏直接注入空气处死，立即取下大脑纹状体，液氮保存。通过总RNA抽提，预杂交和探针标记，将对照组和实验组分别标记Cy3和Cy5荧光，通过荧光信号强度和比值，判断差异表达基因。 戒断评分结果显示：冰茶栓治疗组的分值与阴性对照组有显着差异，但与阳性可乐定组无差异，海洛因依赖猴大脑纹状体基因表达在戒断期和冰茶栓治疗期出现了二个显着性差异基因，分别为前脑啡肽原（Preproenkephalin）和白细胞抗原（HLA-SB（DP）alpha）基因。当猴形成海洛因依赖后，其前脑啡肤原基因表达下调，而经冰茶栓治疗后，其前脑啡肤原基因表达上调，白细胞抗原基因表达下调。提示冰茶栓一方面促进了前脑啡肤原基因的表达，另一方面抑制了白细胞抗原基因的表达，然后达到控制戒断症状的疗效。用均匀设计方法对冰茶栓进行拆方研究，结果提示:江浙蝮蛇毒是冰茶栓中起镇痛作用的靶药物。 第二部分江浙蝮蛇毒组分的分离纯化和镇痛C4组分的筛选及其理化性质研究 探索冰茶栓的主要镇痛活性物质一一江浙蝮蛇毒中可能存在着相关蛋白。采用AKTA一ExPlorer100蛋白质纯化平台，对江浙蝮蛇毒各蛋白质组分进行了提取、分离和纯化，结合镇痛药效和毒性实验筛选最佳镇痛组分;并采用SDS一PAGE、等电聚焦、HPLC等方法获得分子量、等电点和纯度，用紫外光谱及氨基酸序列等进一步明确其理化性质。 分离实验中用阳离子交换柱、阴离子交换柱、分子筛和不同型号的分离介质，对江浙蝮蛇毒的分离效果进行了考察。采用正交设计L，（3’）考察了缓冲液pH、流速、盐浓度等分离参数对分离效果的影响;并用SCoLlting进行方法学考察。确定了先后以离子交换，两种型号分子筛的三步法，最终可获得蛋白质分离纯度为97.5%以上的纯品。 江浙蝮蛇毒经分离纯化，分离出14个蛋白组分，其中酸性组分5个，碱性组分5个，中性组分4个。进行分子筛纯化时，小流速洗脱分离效果最佳。 对分离出的各蛋白组分以小鼠热板法和醋酸扭体法进行E氏，和L氏，的测定。发现一种碱性蛋白质具有较强的镇痛作用和较低毒性，腹腔给药的LD。。为13.33mg/Kg，ED。，为0.63mg/Kg，该组分静脉注射30分钟起效，镇痛强度在5小时达高峰，并持续10小时以上，具有较好的应用价值。编号为C4（为阳离子交换柱分离的4号峰）。 C4组分测定分子量为16.6KD，等电点为8.8，在波长214.16n:和302.Osnm处有最大吸收，在273.09nrn处有最小吸收。H尸LC测定其纯度为92%，具有热不稳定性。该蛋白质N端的前10个氨基酸序列为:H一L一L一Q一F一R一K一M一I一K，经同源性比较，发现它与磷脂酶A2有同源性，但其分子量、HPLC保留时间、热不稳定性均不同于磷脂酶A2。 经大鼠催促戒断试验、大鼠自然戒断试验和C4组分的耐受性试验均表明，C4组分在长期用药过程中不产生身体耐受性和依赖性。 第三部分江浙蝮蛇毒镇痛C4组分的中枢作用研究 江浙蝮蛇毒镇痛C4组分具有镇痛作用，但它是否是中枢镇痛作用?其作用的部位又在哪里?是对其作进一步研究必须回答的问题。因此本实验研究了药物作用之靶区，及其C4组分对大脑中枢镇痛作用之靶点。 通过纳络酮、利血平、阿托品药物对江浙蝮蛇毒C4组分镇痛作用影响的实验，结果表明:阿托品对江浙蝮蛇毒C4组分的镇痛作用无影响，它不作用于乙酞胆碱受体;利血平对C4组分具有提高痛闲的作用;纳络酮对C4组分的镇痛作用具有部分拮抗效应，说明该组分与阿片受体有一定相关性。小鼠侧脑室给药1/400ED5。即表现良好的镇痛效果，说明C4组分具有中枢性作用。脊髓化鼠模型及大鼠足踢定压刺激法试验也表明C4组分是通过中枢起效的。在停药24小时取吗啡依赖大鼠的各脑区组织，测定发现大脑尾状核、壳核、丘脑、红核、苍白球和中脑导水管灰质等组织的亮氨酸脑啡肤含量明显下降，多数脑区的日内啡肤和P物质含量也有所下降。给予C4组分后，多数脑区的亮氨酸脑啡肤含量增加，尤其以尾状核、丘
阮叶萍[8]（2003）在《江浙蝮蛇毒镇痛组分药理学及其机理研究》文中研究说明江浙蝮蛇毒镇痛组分药理学及其机理研究 目的 江浙蝮蛇毒中分离纯化筛选出镇痛组分，并对其进行毒理学、各种疼痛刺激试验及其机理的探讨。 方法 ①江浙蝮蛇毒经过单一柱很难将其组分分离纯化。利用其电荷性及分子量的差异性，采用三步分离法，即先用离子交换柱初分离，再用二种型号分子筛继续分离纯化。将分离的各组分，进行小鼠镇痛实验，以确定最佳镇痛组分，并对其作理化性质的分析。②对筛选出的镇痛组分进行急性毒性、身体依赖性、耐受性实验来评价其安全性。③不同剂量蛇毒组分采用肌肉注射给药方法，评价该药物对热刺激、化学刺激、机械刺激所致疼痛的镇痛作用。④通过阿托品实验、利血平实验、纳络酮实验观察其镇痛作用途径；小鼠侧脑室给药实验、大鼠足跖定压刺激实验及大鼠脊髓化实验区分其作用于中枢或外周；同时通过蛇毒组分对不同脑区内源性阿片肽的分布情况，探讨其中枢作用的部位。 结果 ①最后分离出单一色谱峰，纯度为97.5％。分子筛的分离效果，主要取决于组分的分子量差异。在分离中，其主要影响因子为洗脱液的流速。实验表明，0.5ml／min流速为对于本分离柱最合适的流速，利用三步分离法可将江浙蝮蛇毒中主要组分分离纯化。阳离子交换后再经分子筛分离后的4号主峰有明显的镇痛作用，可基本确定为江浙蝮蛇毒镇痛组分，编号为C4（为阳离子交换柱分离的4号峰）。其分子量为16.6Kda，等电点为pIS.8，属碱性组分。②镇痛c4组分肌肉注射的LD50为13.6mg/kg，相当于临床用量的35倍，提示C4组分在一定剂量范围内是安全有效的;通过身体依赖性实验也证明了该组分本身无阿片样依赖性特征。并且在连续用药7天后均无耐受性现象，提示该药物无耐受性。③镇痛C4组分对热刺激、化学刺激、机械刺激所致疼痛均有一定程度的抑制作用，C4组分三个剂量组的痛闭提高率均明显高于生理盐水组，有显着性差异（p<0.05）。c4组分镇痛作用达到高峰的时间是在给药后6Omin前后，与阳性对照药颅痛定相比，蛇毒组分起效慢但持续时间久。④通过实验表明C4组分镇痛不作用于乙酞胆碱受体，利血平对C4组分具有提高痛闭的作用，纳络酮对C4组分的镇痛作用具有部分拮抗效应。C4组分镇痛作用是通过调节中枢起效，丘脑、尾状核、红核为C4组分可能作用的主要中枢部位。 结论镇痛c4组分分离纯化方法明确，重现性强，毒性小，无身体依赖性;有良好的镇痛作用，且镇痛作用主要通过中枢起效，值得进一步深入开发和研究。
张恭勤[9]（1981）在《浙江产中华眼镜蛇（Naja naja atra）毒核糖核酸酶的研究》文中指出本文报道了关于浙江产眼镜蛇（Naja naja atra）毒RNase（简称RNaseZ.）的分离提纯和性质的研究。经亲和层析去胆碱酯酶的蛇毒溶液,通过SP-Sephadex C-25柱层析和Sephadex G-75凝胶过滤,可得到一种高纯度的RNaseZ.制剂,其比活提高了67倍,总活力回收为21％。RNaseZ.最适pH为11左右,Mg2+与K+为其激活剂,Ca2+,Zn2+,Cu2+,Mn2+及EDTA均为抑制剂,巯基乙醇则对其无作用。RNase Z.能迅速降解CPV dsRNA,酵母tRNA,poly（A）,poly（C）,poly（I）,poly（U）及poly（I）.poly（C）,但不能降解DNA。RNaseZ.降解酵母tRNA的主要产物为4～8核苷酸,降解[5’—32P)pCpUpCpGpUpCpCpA后所得到的标记产物为[5’-32P)pCpU。因此,RNase Z.为一种能作用于ssRNA和dsRNA并产生具5’-磷酸单酯结构的寡核苷酸的内切核糖核酸酶。
二、浙江产中华眼镜蛇(Naja naja atra)毒核糖核酸酶的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、浙江产中华眼镜蛇(Naja naja atra)毒核糖核酸酶的研究（论文提纲范文）
（1）水解蛇蜕的几种方法及水解产物的生物活性研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 蛇蜕氨基酸组成的对比分析。 |
| 1.2.2 蛇蜕水解。 |
| 1.2.3 氨基酸和蛋白质含量的测定。 |
| 1.2.4 HPLC分析水解产物。 |
| 1.2.5 细胞活性实验。 |
| 2 结果 |
| 2.1 蛇蜕中常见氨基酸组成 |
| 2.2 酸解、碱解效率比对实验 |
| 2.3 氧化还原水解效率对比实验 |
| 2.4 水解产物分子量 |
| 2.5 蛇蜕水解产物对细胞增殖的影响 |
| 3 结束语 |
（2）野生与人工养殖的中华眼镜蛇（Naja Atra）毒液的比较研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 研究目的与意义 |
| 1.2 本研究的主要内容 |
| 1.2.1 野生与人工养殖的中华眼镜蛇的毒液组成及其生物活性比较研究 |
| 1.2.2 野生与人工养殖的中华眼镜蛇的毒腺细胞的转录组比较研究 |
| 1.2.3 不同食物对人工养殖的中华眼镜蛇及其毒液的影响研究 |
| 1.3 本研究技术路线 |
| 2 野生与人工养殖的中华眼镜蛇的毒液组成及其生物活性比较研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要仪器与设备 |
| 2.1.2 材料与试剂 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 |
| 2.1.4 方法与步骤 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 3 野生与人工养殖的中华眼镜蛇的毒腺细胞的转录组比较研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要仪器与设备 |
| 3.1.2 材料与试剂 |
| 3.1.3 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 4 不同食物对人工养殖的中华眼镜蛇及其毒液的影响研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要仪器与设备 |
| 4.1.2 主要材料与试剂 |
| 4.1.3 方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 不同食物对中华眼镜蛇体重的影响 |
| 4.2.2 SDS-PAGE的初步分离鉴定 |
| 4.2.3 酶活性测定结果 |
| 4.3 讨论 |
| 5 全文小结 |
| 6 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（3）大鲵遗传多样性及皮肤附属物特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 大鲵简介 |
| 1.2 大鲵形态特征 |
| 1.3 大鲵生活习性 |
| 1.4 大鲵生物学研究进展 |
| 1.5 大鲵资源现状 |
| 1.6 分子标记在物种遗传多样性中的应用 |
| 1.7 两栖动物皮肤附属物研究进展 |
| 1.8 本文研究内容目的和意义 |
| 2 大鲵遗传多样性的评价 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 大鲵皮肤分泌物组成及理化特性 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 大鲵皮肤分泌物水溶物的毒性 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 大鲵蜕皮的组成及治疗烧伤功效作用研究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 6 总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 本文创新点 |
| 6.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读学位期间发表论文及申请专利 |
| 附录 大鲵皮肤分泌物蜕皮和肝脏12S rRNA基因核苷酸序列比对 |
（4）白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶分离纯化及理化性质研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 蛇的简介 |
| 1.1.1 蛇的分类 |
| 1.1.2 区别有毒和无毒蛇 |
| 1.1.3 蛇伤诊断与急救 |
| 1.1.4 蛇的用途 |
| 1.2 蛇毒 |
| 1.2.1 蛇毒蛋白 |
| 1.2.2 蛇毒的采集与加工 |
| 1.2.3 蛇毒蛋白在我国药学方面的应用 |
| 1.3 白眉蝮蛇 |
| 1.3.1 白眉蝮蛇简介 |
| 1.3.2 白眉蝮蛇蛇毒蛋白理化性质 |
| 1.3.3 白眉蝮蛇蛇毒酶的应用 |
| 1.4 5 ’-核苷酸酶 |
| 1.4.1 5 ’-核苷酸酶简介 |
| 1.4.2 蛇毒5’-核苷酸酶的理化性质 |
| 1.4.3 5 ’-核苷酸酶在医药的应用 |
| 第二章 引言 |
| 2.1 5 ’-核苷酸酶研究的目的和意义 |
| 2.2 研究的主要内容 |
| 2.2.1 5 ’-核苷酸酶的分离纯化 |
| 2.2.2 5 ’-核苷酸酶理化性质研究 |
| 2.2.3 糖对酶的保护 |
| 2.2.4 5’-核苷酸酶抑制血小板聚集机制的研究 |
| 2.3 本研究的技术路线 |
| 第三章 白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶分离纯化 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 粗毒的处理 |
| 3.3.2 DEAE-Sephadex A-25离子交换色谱分离 |
| 3.3.3 Sephadex G-75分子筛色谱分离 |
| 3.3.4 5 ’-核苷酸酶活测定 |
| 3.3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 白眉蝮蛇5’-核苷酸酶活性方法可行性测定 |
| 3.4.2 DEAE-Sephadex A-25离子交换色谱分离 |
| 3.4.3 SDS-PAGE测A-25 5’-核苷酸酶 |
| 3.4.4 Sephadex G-75分子筛色谱分离 |
| 3.4.5 SDS-PAGE测G-75 5’-核苷酸酶 |
| 3.4.6 5 ’-核苷酸酶纯度鉴定 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶理化性质 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂 |
| 4.2.3 其他试剂 |
| 4.2.4 主要仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶分子量的确定 |
| 4.3.2 糖蛋白的鉴定 |
| 4.3.3 温度对酶活的影响 |
| 4.3.4 pH对酶活的影响 |
| 4.3.5 金属离子对酶活的影响 |
| 4.3.6 抑制剂对酶活的影响 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶分子量 |
| 4.4.2 白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶糖蛋白鉴定 |
| 4.4.3 温度对酶活性的影响 |
| 4.4.4 pH对酶活的影响 |
| 4.4.5 常见金属离子对酶活的影响 |
| 4.4.6 抑制剂对酶活的影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 糖对白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶的保护作用 |
| 5.1 前言 |
| 5.1.1 果糖的生物功能 |
| 5.1.2 葡聚糖的生物功能 |
| 5.1.3 壳寡糖的生物功能 |
| 5.1.4 海藻糖的生物功能 |
| 5.1.5 其他多糖的生物功能 |
| 5.2 材料与仪器 |
| 5.2.1 材料 |
| 5.2.2 主要仪器 |
| 5.2.3 糖溶液配置 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 实验结果与讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶对血小板聚集的影响 |
| 6.1 前言 |
| 6.1.1 血小板聚集 |
| 6.1.2 蛇毒对血小板聚集与聚集抑制活性 |
| 6.2 材料与仪器 |
| 6.2.1 材料 |
| 6.2.2 主要仪器 |
| 6.2.3 所需试剂 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 血小板样品制备 |
| 6.3.2 酶对血小板聚集活性检测 |
| 6.3.3 不同剂量的酶对血小板聚集活性促进率检测 |
| 6.4 实验结果与讨论 |
| 6.5 本章小结 |
| 总结与讨论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A 在读期间发布的论文 |
（5）蛇毒的分离、纯化及其抗肿瘤活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 蛇毒简介 |
| 1.2 蛇毒的化学成分 |
| 1.2.1 蛇毒中的酶类 |
| 1.2.2 蛇毒中的毒素及其活性因子 |
| 1.3 蛇毒抗肿瘤作用研究 |
| 1.4 蛇毒蛋白研究进展 |
| 1.4.1 蛋白的分离分析 |
| 1.4.2 高灵敏度分析技术-生物质谱 |
| 1.4.3 生物信息学查询 |
| 1.4.4 蛇毒蛋白研究 |
| 1.5 本课题的选题背景、研究意义及研究内容 |
| 1.5.1 选题背景 |
| 1.5.2 研究意义 |
| 1.5.3 研究内容及思路 |
| 第2章 四种蛇毒抗肿瘤活性的初筛研究 |
| 2.1 材料、试剂及仪器 |
| 2.1.1 试验试剂 |
| 2.1.2 试验仪器 |
| 2.1.3 试验原料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 肿瘤细胞株的培养 |
| 2.2.2 浓度范围的筛选 |
| 2.2.4 药品的配制 |
| 2.2.5 蛇毒初筛 |
| 2.2.6 眼镜蛇毒对肿瘤细胞增殖的抑制率及IC |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 四种蛇毒对HepG_2细胞抗肿瘤作用的筛选 |
| 2.3.2 眼镜蛇毒对HepG_2细胞的抑制作用 |
| 2.3.3 本章小结 |
| 第3章 眼镜蛇毒与粗纯蛋白的比较研究 |
| 3.1 材料、试剂及仪器 |
| 3.1.1 试验试剂 |
| 3.1.2 试验仪器 |
| 3.1.3 试验原料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 肿瘤细胞株的培养 |
| 3.2.2 眼镜蛇毒粗纯蛋白的制备 |
| 3.2.3 SDS-PAGE电泳 |
| 3.2.4 药品的配制 |
| 3.2.5 眼镜蛇毒粗纯蛋白对肿瘤细胞增殖的抑制率及IC_(50) |
| 3.2.6 眼镜蛇毒及粗纯蛋白对正常细胞的毒性研究 |
| 3.2.7 眼镜蛇毒粗纯蛋白对HepG_2细胞生长的影响 |
| 3.2.8 荧光染色形态学观察 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 蛇毒粗纯蛋白的制备与电泳分析 |
| 3.3.2 眼镜蛇毒粗纯蛋白对肿瘤细胞增殖的抑制作用 |
| 3.3.3 眼镜蛇毒及粗纯蛋白对正常细胞的毒性研究 |
| 3.3.4 眼镜蛇毒粗纯蛋白对HepG_2细胞生长的影响 |
| 3.3.5 荧光染色形态学观察 |
| 3.3.6 本章小结 |
| 第4章 眼镜蛇毒粗纯蛋白的分离及各馏分抗肿瘤活性研究 |
| 4.1 材料、试剂及仪器 |
| 4.1.1 试验试剂 |
| 4.1.2 试验仪器 |
| 4.1.3 试验原料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 DEAE-Sephacel离子交换柱层析 |
| 4.2.2 高效液相色谱分析 |
| 4.2.3 眼镜蛇毒粗纯蛋白各馏分的蛋白浓度测定 |
| 4.2.4 眼镜蛇毒粗纯蛋白各馏分抗肿瘤活性研究 |
| 4.2.5 SDS-PAGE电泳 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 离子交换柱层析分离 |
| 4.3.2 液相色谱分析 |
| 4.3.3 眼镜蛇毒粗纯蛋白各馏分的蛋白浓度 |
| 4.3.4 各馏分液相色谱和总蛋白浓度结果的综合比较 |
| 4.3.5 眼镜蛇毒粗纯蛋白各馏分抗肿瘤活性研究 |
| 4.3.6 SDS-PAGE电泳 |
| 4.3.7 后续结构鉴定 |
| 4.3.8 本章小结 |
| 第5章 结论 |
| 5.1 结论 |
| 参考文献 |
| 附录一 常用试剂及配制 |
| 附录二 中英文名词术语对照表 |
| 附录三 研究生期间所发表的论文 |
| 致谢 |
（6）中华眼镜蛇（Naja naja atra）毒神经生长因子对PC12细胞阿片受体表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写一览表 |
| 1 前言 |
| 2 中华眼镜蛇毒神经生长因子（nNGF）对PC12 细胞形态的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 3 中华眼镜蛇毒神经生长因子对 PC12 细胞阿片受体(δ,κ) mRNA 表达的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 4 中华眼镜蛇毒神经生长因子（nNGF）对PC12 细胞κ阿片受体蛋白质表达的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 5 全文总结 |
| 6 文献综述 眼镜蛇毒神经生长因子的研究进展 |
| 参考文献 |
| 作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录、科研情况 |
| 致谢 |
（7）江浙蝮蛇毒镇痛C4组分提取纯化及其对内阿片肽调控机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 冰茶栓靶基因及靶药物的筛选研究 |
| 一、 冰茶栓差异表达基因的筛选研究 |
| (一) 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| (二) 结果 |
| 1 冰茶栓治疗后戒断症状评分 |
| 2 总RNA抽提及纯化结果 |
| 3 基因芯片的扫描结果 |
| 4 差异表达基因筛选结果 |
| 5 空白组猴与海洛因依赖猴戒断时基因表达差异 |
| 6 冰茶栓治疗后与海洛因依赖猴戒断时基因表达差异 |
| (三) 分析与讨论 |
| 1 冰茶栓对海洛因依赖猴的治疗作用 |
| 2 受体与相关基因芯片的作用 |
| 3 内源性阿片肽与吗啡依赖内在基因差异 |
| 4 冰茶栓治疗对基因表达的影响 |
| 二、 均匀设计对靶药物的确定 |
| (一) 实验材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| (二) 结果 |
| 1 不同组方的镇痛时效关系 |
| 2 配方优化 |
| (三) 分析与讨论 |
| 三、 小结 |
| 四、 参考文献 |
| 第二部分 江浙蝮蛇毒组分的分离纯化和镇痛C4组分的筛选及其理化性质研究 |
| 一、 江浙蝮蛇毒的分离纯化 |
| (一) 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| (二) 结果 |
| 1 不同分离介质分离效果比较 |
| 2 江浙蝮蛇毒主峰纯化条件筛选 |
| (三) 分析与讨论 |
| 1 江浙蝮蛇毒组分复杂性与可分离性 |
| 2 分离参数的优化及相对性 |
| 二、 C4组分的筛选及理化性质研究 |
| (一) 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| (二) 结果 |
| 1 江浙蝮蛇毒各组分的镇痛效果 |
| 2 镇痛组分的理化性质 |
| 3 镇痛组分的耐受性和依赖性 |
| (三) 分析与讨论 |
| 1 镇痛组分的确定 |
| 2 C4组分与磷脂酶的性质比较 |
| 三、 小结 |
| 四、 参考文献 |
| 第三部分 江浙蝮蛇毒镇痛C4组分的中枢作用研究 |
| 一、 材料和方法 |
| (一) 材料 |
| 1 动物 |
| 2 江浙蝮蛇毒C4组分 |
| 3 药品 |
| 4 仪器 |
| (二) 方法 |
| 1 阿托品实验 |
| 2 利血平实验 |
| 3 纳络酮实验 |
| 4 侧脑室给药实验 |
| 5 脊髓化鼠模型 |
| 6 大鼠足跖定压刺激法 |
| 7 不同脑区药物作用实验 |
| 二、 结果 |
| (一) 阿托品对C4组分镇痛效果的影响 |
| (二) 利血平对C4组分镇痛效果的影响 |
| (三) 纳络酮对C4组分镇痛效果的影响 |
| (四) 侧脑室给药C4组分的镇痛效果 |
| (五) 大鼠脊髓化鼠实验结果 |
| (六) 大鼠足跖定压刺激法实验结果 |
| (七) 不同脑区内源性阿片肽的分布 |
| 三、 分析与讨论 |
| (一) C4组分与药物相互作用对神经递质的影响 |
| (二) 江浙蝮蛇毒C4组分的中枢作用 |
| (三) 江浙蝮蛇毒C4组分的中枢作用部位 |
| 四、 小结 |
| 五、 参考文献 |
| 第四部分 应用微透析技术探索江浙蝮蛇毒镇痛C4组分对中枢内阿片肽的调控机理 |
| 一、 材料与方法 |
| (一) 材料 |
| 1 动物造模所需材料 |
| 2 血液采集所需材料 |
| 3 微透析实验所需材料 |
| 4 测定所需材料 |
| (二) 方法 |
| 1 动物造模 |
| 2 分组 |
| 3 麻醉 |
| 4 探针定位 |
| 5 透析液收集 |
| 6 给药方法 |
| 7 取血 |
| 8 测定 |
| 二、 结果 |
| (一) 吗啡造模大鼠体重变化 |
| (二) 透析膜回收率 |
| (三) 吗啡依赖大鼠脑组织间液神经肽的改变 |
| (四) 江浙蝮蛇毒C4组分对组织间液神经肽的影响 |
| (五) 单次给药与多次给药的比较 |
| (六) 脑透析液在不同时间神经肽的动态变化 |
| (七) 血浆放免测定的标准曲线 |
| (八) 血液中内阿片肽的含量变化 |
| 三、 分析与讨论 |
| (一) 吗啡依赖对内阿片肽的影响 |
| (二) 江浙蝮蛇毒C4组分对内阿片肽的作用 |
| (三) 江浙蝮蛇毒C4组分对外周血的内阿片肽的作用 |
| 四、 小结 |
| 五、 参考文献 |
| 全文讨论 |
| (一) 论证了中医药理论对阿片成瘾认识的科学性 |
| (二) 江浙蝮蛇毒中靶成分的确定 |
| (三) C4组分主要通过对脑啡肽调控发挥镇痛作用 |
| 全文小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 论着 |
| 附: |
| 文献综述(一) |
| 文献综述(二) |
（8）江浙蝮蛇毒镇痛组分药理学及其机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 一、 前言 |
| 二、 江浙蝮蛇毒镇痛组分的分离纯化及理化性质研究 |
| (一) 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| (二) 结果 |
| 1 不同介质分离效果比较 |
| 2 江浙蝮蛇毒主峰的纯化 |
| 3 镇痛组分的确定 |
| 4 镇痛组分的理化性质 |
| (三) 讨论 |
| (四) 结论 |
| (五) 参考文献 |
| 三、 蛇毒组分毒理学试验 |
| (一) 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| (二) 结果 |
| 1 蛇毒组分肌肉注射给药的急性毒性试验结果 |
| 2 蛇毒组分的身体依赖性试验结果 |
| 3 蛇毒组分镇痛耐受性试验结果 |
| (三) 讨论 |
| (四) 结论 |
| (五) 参考文献 |
| 四、 蛇毒组分镇痛药效实验观察 |
| (一) 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| (二) 结果 |
| 1 时间-效应关系 |
| 2 剂量-效应关系 |
| 3 蛇毒组分对小鼠热刺激痛阈值的影响 |
| 4 蛇毒组分对化学刺激痛阈值的影响 |
| 5 蛇毒组分对机械刺激痛阈值的影响 |
| 6 蛇毒组分对大鼠热刺激痛阈值的影响 |
| (三) 讨论 |
| (四) 结论 |
| (五) 参考文献 |
| 五、 蛇毒组分镇痛的机理研究 |
| (一) 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| (二) 结果 |
| 1 阿托品对蛇毒组分镇痛效果的影响 |
| 2 利血平对蛇毒组分镇痛效果的影响 |
| 3 纳络酮对蛇毒组分镇痛效果的影响 |
| 4 小鼠侧脑室给药结果 |
| 5 大鼠脊髓化结果 |
| 6 大鼠足跖定压刺激法结果 |
| 7 蛇毒组分对不同脑区内源性阿片肽的分布影响 |
| (三) 讨论 |
| (四) 结论 |
| (五) 参考文献 |
| 六、 全文讨论 |
| 七、 全文结论 |
| 致谢 |
| 附: 文献综述 |
四、浙江产中华眼镜蛇(Naja naja atra)毒核糖核酸酶的研究（论文参考文献）
- [1]水解蛇蜕的几种方法及水解产物的生物活性研究[J]. 蒋凯,严发展,丁秦超,陈鑫珉,梁文星,丁滨. 科技创新与应用, 2018(29)
- [2]野生与人工养殖的中华眼镜蛇（Naja Atra）毒液的比较研究[D]. 张迎征. 重庆师范大学, 2016(10)
- [3]大鲵遗传多样性及皮肤附属物特性研究[D]. 郭文韬. 华中科技大学, 2013(02)
- [4]白眉蝮蛇蛇毒5’-核苷酸酶分离纯化及理化性质研究[D]. 张秉怡. 昆明理工大学, 2010(03)
- [5]蛇毒的分离、纯化及其抗肿瘤活性研究[D]. 陈思. 浙江工商大学, 2010(11)
- [6]中华眼镜蛇（Naja naja atra）毒神经生长因子对PC12细胞阿片受体表达的影响[D]. 李卉. 重庆师范大学, 2008(01)
- [7]江浙蝮蛇毒镇痛C4组分提取纯化及其对内阿片肽调控机理研究[D]. 叶勇. 浙江中医学院, 2003(03)
- [8]江浙蝮蛇毒镇痛组分药理学及其机理研究[D]. 阮叶萍. 浙江中医学院, 2003(03)
- [9]浙江产中华眼镜蛇（Naja naja atra）毒核糖核酸酶的研究[J]. 张恭勤. 动物学研究, 1981(S1)