一、牛磺酸对培养乳鼠心肌细胞缺氧坏死的保护作用（论文文献综述）
吴昱杰[1]（2021）在《复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠的影响及抗内质网应激作用研究》文中研究表明心力衰竭（Heart Failure）是多种病因造成的心脏结构或功能损伤,最终导致心室泵血功能下降的综合征,目前已成为全球性健康负担,且逐渐显示年轻化趋势。心衰早期,冠状动脉供血急剧性减少或中断,局部心肌缺血性坏死,存活心肌逐渐代偿性肥厚,引起心室重构。若血管堵塞持续时间过长,则心肌转变为不可逆损伤,诱发多种病理功能改变,继而使得心肌细胞中糖类和脂肪等物质代谢紊乱,心脏能量代谢途径改变,最终导致心功能下降,加重心力衰竭。心衰在中医界无明确定义,依据其证候特征和病因病机将其归为“胸痹”、“真心痛”、“心水”等范畴。气虚证被认为是慢性心衰的常见证型。基于中医辩证基础,“益气法”为治疗心血管疾病如心衰、心梗等行之有效的方法。复方人参补气颗粒是本课题组根据临床经验研发的具有专利保护的组方颗粒剂,其由人参为主药、黄芪为辅药所制备,前期临床研究已证实其对慢性心衰所致心气虚证具有显着疗效。基于此,深入研究本组方发挥作用的机理与途径,明确其作用靶标,对于临床用药、复方新药的研制有着良好的参考价值。近年来,众多研究证实过度内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）与心血管疾病的发生发展有着密切联系,被认为是治疗的潜在靶点。衰竭心脏中内质网形态变化也印证了过度ERS与心衰发病密切相关。ERS介导的分子伴侣蛋白Sigma-1受体（Sigma-1R）途径在心脏中的作用受到广泛重视,作用于线粒体相关内质网膜（mitoch ondria-associated endoplasmic reticulum membrane,MAM）上的特异性膜蛋白 Sigma-1 R在心肌ERS和线粒体功能之间有特殊的连接作用,多项研究揭示了 Sigma-1R下游效应与多种心肌病理损伤的关系,包括抗心肌肥大、抗心肌凋亡以及ERS过度所引起的心肌损伤,表现出良好的心脏血流动力学性能和心肌保护作用。本研究将采用在体大鼠心梗后心衰模型和大鼠H9c2心肌细胞系缺氧复氧损伤模型来研究复方人参补气颗粒及其有效成分对心肌细胞的保护作用,并结合脂质组学分析,从ERS角度探讨其对损伤心肌的保护作用及机制。实验的主要研究内容及方法如下:1.采用结扎左冠状动脉前降支方法复制SD大鼠心梗模型,随机分为假手术组,模型组,复方人参补气颗粒低剂量组（1.5 g/kg）,中剂量组（3.0 g/kg）,高剂量组（4.5 g/kg）,治疗性灌胃给药28天,末次给药后超声心动图观察大鼠心功能指标,采用氟代脱氧葡萄糖正电子断层显像（18F-FDG PET/CT）技术测定大鼠心肌葡萄糖摄取体积和摄取平均值,酶联免疫法检测血浆Ang Ⅱ活性。苏木素-伊红（Haematoxylin-Eosin,HE）染色法和马松三色法（Masson）观察大鼠心肌组织病理学改变并测定心肌容积胶原分数,荧光染色观察心肌细胞凋亡情况。采用透射电镜观察心肌形态及线粒体超微结构变化。2.基于复方人参补气颗粒抗心肌损伤作用,进一步观察其对心肌内质网应激水平的影响。采用免疫荧光染色测定心肌CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（C/EBP homol ogous protein,CHOP）、Sigma-1R蛋白表达水平,采用Western Blot方法测定心肌C HOP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-12）、Sigma-1R、Bc12-Associated X 蛋白（Bc12-Associated X,Bax）、B 淋巴细胞瘤-2 基因（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白表达水平,观察其对ERS及其介导的凋亡通路的调控作用,阐述其可能的作用机制。3.在初步确定复方人参补气颗粒抗心肌损伤作用与改善过度内质网应激相关的基础上,采用液相色谱法-质谱联用（Liquid chromatography-mass spectrometry,LC/MS）技术,通过脂质组学分析给药前后大鼠心肌内源性差异性代谢物的变化,考察药物对心肌脂代谢的影响,从脂代谢水平阐述其对内质网应激和心肌损伤的调控作用。4.根据中药复方特点和文献研究基础,选择人参总多糖和黄芪总多糖代表复方人参补气颗粒有效成分,进行细胞水平实验研究。观察两组分单用和联用对常氧状态下大鼠H9c2心肌细胞活力的影响。建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,观察两组分单用和联用对缺氧/复氧损伤的细胞活力影响。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率和Ca2+浓度变化。5.在两组分抗缺氧/复氧损伤的基础上,使用内质网应激激动剂衣霉素,进一步测定其对内质网应激水平的影响,采用免疫荧光检测心肌细胞CHOP、Sigma-1R蛋白表达水平,Western Blot 方法检测 CHOP、Caspase-12、Sigma-1R、Bax、Bcl-2 蛋白表达水平,观察人参总多糖和黄芪总多糖对内质网应激及其介导的凋亡通路影响,初步阐述其可能的作用机制。研究结果如下:1.动物实验显示,复方人参补气颗粒给药可提高心衰大鼠超声心动图LVEF、LVF S、SV、CO,显着降低 LVIDs、LVIDd、LVEVs、LVEVd,显着降低血浆 Ang Ⅱ水平。复方人参补气颗粒高剂量（4.5 g/kg）可显着增加存活心肌18F-FDG摄取体积。病理学可见假手术组心肌排列致密规则,复方人参补气颗粒各给药组心肌组织排列较规则,间质轻度肿胀,炎症浸润不明显,整体纤维化程度较低,与模型组比较,各给药组大鼠心肌CVF均显着下降。TUNEL染色显示,与模型组比较,各给药组心肌细胞凋亡率显着下降。透射电镜显示复方人参补气颗粒高剂量（4.5 g/kg）可以改善心肌细胞形态,减轻线粒体变性、肿胀程度,以及嵴结构的断裂。2.免疫荧光和Western Blot显示,复方人参补气颗粒高剂量（4.5 g/kg）可降低内质网应激相关CHOP、Caspase-12、Bax表达,显着上调Sigma-1R、Bcl-2表达,改善内质网应激及其介导的细胞凋亡。3.脂质组学共筛选出64种潜在差异代谢物,主要集中于甘油脂类、甘油磷脂类。复方人参补气颗粒高剂量（4.5 g/kg）可显着下调甘油三酯代谢物、上调磷脂酰胆碱代谢物水平,对胆固醇代谢和磷脂代谢通路有调控作用,提示其可改善由心肌过度ERS引起的脂代谢异常。4.细胞实验显示,与正常组比较,缺氧/复氧条件下,H9c2心肌细胞活性显着下降,细胞凋亡率显着升高,出现严重钙超载。与缺氧/复氧组比较,人参总多糖和黄芪总多糖联用组细胞活力显着上升,心肌细胞凋亡率显着下降,钙超载显着降低。5.与正常组比较,缺氧/复氧条件下,H9c2心肌细胞内质网应激相关CHOP、Cas pase-12、Bax表达显着增加,Sigma-1R、Bcl-2表达显着减少,提示有严重的内质网应激。人参总多糖和黄芪总多糖联用组CHOP、Caspase-12、Bax表达显着减少,Sigma-1 R、Bcl-2表达显着增多,提示内质网应激程度减轻。综上所述,本研究发现:1.复方人参补气颗粒可以改善心梗后心衰大鼠心功能和心室结构变化,抑制过度内质网应激、改善心肌细胞能量代谢障碍、抑制心肌纤维化等可能是其发挥心肌保护作用的重要机制。2.心梗后心衰的受损心肌存在CHOP-Sigma-1R反馈调节,进而引发下游多条促凋亡途径。复方人参补气颗粒可作用于CHOP-Sigma-1R环节,通过调控二者表达水平从而抑制心肌细胞凋亡,改善过度内质网应激,保护缺血心肌。3.复方人参补气颗粒对心肌脂代谢异常有一定调节作用,通过调控内质网应激从而调控脂质代谢可能是其心肌保护的途径。4.复方人参补气颗粒有效成分人参总多糖和黄芪总多糖联用有显着的抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤作用,其机制可能与抑制过度内质网应激及其介导细胞凋亡有关。
李丽杰[2]（2020）在《牛磺酸对低温环境下肉鸡心肌抗氧化作用影响的研究》文中研究说明腹水综合征（AS）是一种以患病鸡腹腔积液和心脏衰竭为特征的代谢性疾病,该病典型特征为鸡右心肥大,它是导致肉鸡死亡的一个主要原因,且该病的发生和低温环境之间有着密切的关系。长时间的低温会导致肉鸡氧化应激的发生,增加肉鸡心肌中活性氧的含量,氧化与抗氧化系统之间的动态失衡,最终使心肌损伤。Keap1/Nrf2信号通路在心肌抗氧化损伤中有着非常重要的作用。牛磺酸是心肌细胞中含量最丰富的游离氨基酸,具有提高细胞的抗氧化能力,调控Keap1/Nrf2信号通路的作用。目前有关Keap1/Nrf2信号通路是否参与肉鸡心肌肥大损伤尚无研究报道。因此,本试验通过环境低温诱导肉鸡右心肥大,在饮水中添加牛磺酸,体外通过异丙肾上腺素（ISO）诱导H9c2细胞肥大,探讨牛磺酸对肉鸡心肌肥大过程中Keap1/Nrf2信号通路的影响,为应用牛磺酸防治腹水综合征提供理论基础。肉鸡饲养试验将240只14日龄肉仔鸡随机分为三组,对照（C）组,低温（M）组、牛磺酸低温（T）组。在第35日龄时收集右心室肌组织。采用TBA法检测MDA含量、比色法检测GSH-Px活力、LDH活力、微板法检测SOD活力、可见光法检测CAT活力;荧光定量PCR法测定心肌抗氧化基因（PI3K、AKT、Hsp70、Keap1、Nrf2、HO-1、NQ O1、γ-gcs、GCLC、GSH-Px）m RNA表达水平的变化。（1）抗氧化酶测定结果:M组与C组相比较,M组中SOD、CAT、GSH-Px活性极显着下降（P<0.01）,T组与M组进行比较,T组中SOD、CAT、GSH-Px活性极显着升高（P<0.01）;M组与C组相比较,M组中MDA、LDH含量极显着升高（P<0.01）,T组与M组进行比较,T组中M DA、LDH含量极显着下降（P<0.01）。（2）牛磺酸对肉鸡心肌Keap1/Nrf2信号通路因子m RNA表达结果:M组与C组相比,M组Hsp70、PI3K、AKT m RNA极显着升高（P<0.01）,T组与M组相比,T组Hsp70、PI3K、AKT m RNA显着下降（P<0.05）;M组与C组相比,M组Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-gcs、GCLC、GSH-Px m RNA的表达水平下降（P<0.05）,T组与M组相比,T组Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-gcs、G CLC、GSH-Px m RNA表达水平显着上调（P<0.05）。细胞试验将H9c2细胞随机分为:对照组（C组）、对照牛磺酸组（CT组）、ISO组（M组）、ISO组+牛磺酸（MT组）。测定方法及指标同上。测定结果表明:（1）抗氧化酶测定:M组与C组相比较,M组中SOD、CAT、GSH-Px活性极显着下降（P<0.01）,T组与M组进行比较,T组中SOD、CAT、GSH-Px活性极显着升高（P<0.01）;M组与C组相比,M组中MDA、LDH含量极显着升高（P<0.01）,T组与M组进行比,T组中MDA、LDH含量极显着下降（P<0.01）。（2）牛磺酸对H9c2细胞Keap1/Nrf2信号通路因子m RNA表达结果:M组与C组相比,M组Hsp70、PI3K、AKT、HO-1、γ-gcs m RNA表达量极显着升高（P<0.01）,CT组与M组相比,CT组Hsp70、PI3K、AKT m RNA表达量显着下降（P<0.05）;M组与C组相比,M组Keap1、Nrf2、NQO1、GCLC、GSH-Px m RNA的表达水平下降（P<0.05）,CT组与M组相比,CT组Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-gcs、GCLC、GSH-Px m RNA表达水平显着上调（P<0.05）。1.牛磺酸处理后,心肌和H9c2细胞中抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT的活性升高,LDH、MDA含量降低,推测牛磺酸可以提高心肌和H9c2细胞抗氧化能力,维持心肌和H9c2细胞功能。2.牛磺酸处理后,负调控因子Hsp70、PI3K、AKT m RNA下调,Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-gcs、GCLC、GSH-Px m RNA上调。由此可推测,牛磺酸参与了Keap1/Nrf2通路调控,发挥抗氧化保护心肌作用。综上所述,牛磺酸可能通过上调Nrf2信号通路增强心肌抗氧化能力,从而对低温环境下肉鸡心肌起到保护作用。
王悦[3]（2018）在《缺氧诱导肉鸡心肌细胞凋亡中Calpains的作用及牛磺酸调控机理的研究》文中指出肉鸡心脏、血液循环系统对氧气的供应满足不了其快速增长的体重需求是肉鸡腹水综合征（AS）发生的主要因素,右心肥大继而衰竭是AS发生及导致肉鸡死亡的重要原因,相关研究表明心肌细胞凋亡在右心肥大继而衰竭中起着重要作用。本课题组前期研究表明,肉鸡饮水添加牛磺酸能有效减少腹水综合征的发病情况,且能降低心肌组织中钙蛋白酶（Calpains）的活性。目的:本试验通过缺氧处理原代肉鸡心肌细胞,采用牛磺酸（Tau）与PD150606（Calpains的一种特异性抑制剂）分别及共同处理的方式,比较探讨牛磺酸抗心肌细胞凋亡的作用是否通过影响Calpains的活性来实现。以期为肉鸡腹水综合症的防治提供理论依据。方法:分离培养12日龄鸡胚心肌细胞,采用细胞免疫化学方法进行纯度鉴定,MTS方法监测心肌细胞活力。待心肌细胞生长稳定进行分组处理:空白对照组（C）、Tau对照组（CT）、PD150606对照组（CP）、Tau加PD150606对照组（CTP）、缺氧模型组（M）、Tau模型组（MT）、PD150606模型组（MP）、Tau加PD150606模型组（MTP）。Tau及PD150606的药物添加浓度分别为10 mmol/L、10 umol/L,预处理时间分别为12 h、0.5 h,缺氧处理时间为12 h。AO/EB检测各组细胞凋亡情况;荧光探针法检测各组心肌细胞内Ca2+浓度;RT-PCR检测Calpain-1、Calpain-2、Caspase-9和Caspase-3的mRNA相对表达量;WB检测Calpain-1、Bcl-2、Cyt-C以及Caspase-9和Caspase-3蛋白相对表达量。试验结果如下:1)肉鸡胚胎心肌细胞的分离培养与鉴定:本试验中采用的心肌细胞分离方法,可稳定获得平均纯度95%、活力97%的肉鸡心肌细胞,试验周期5天内心肌细胞纯度稳定,能满足试验要求。2)Tau对缺氧肉鸡心肌细胞凋亡率的影响:单纯缺氧培养12 h极显着提高了心肌细胞的凋亡率（P<0.01）,Tau及PD150606预处理都能显着降低缺氧条件下心肌细胞的凋亡率（P<0.05）,两者共同作用效果更佳（P<0.01）。3)Tau对缺氧肉鸡心肌细胞抗氧化能力及细胞损伤的影响:缺氧培养能提高心肌细胞培养上清中以及细胞内的MDA含量（P>0.05,P<0.05）,Tau能减少MDA含量的上升。缺氧能使心肌细胞培养上清中SOD活力较对照组显着提高（P<0.05）,添加Tau则使上清及胞内SOD活力较M组显着提高（P<0.05,P>0.05）。PD150606对缺氧肉鸡心肌细胞MDA含量及SOD活力未产生显着影响,显着提高了正常培养的细胞内的MDA含量（P<0.05）。缺氧及Tau对心肌细胞LDH活力无显着影响,PD150606可使缺氧条件下的上清LDH活力稍提高（P>0.05）,可使细胞内LDH活力下降（P>0.05）。4)Tau对缺氧肉鸡心肌细胞凋亡相关基因mRNA相对表达量的影响:缺氧使肉鸡心肌细胞Calpain-1、Calpain-2、Caspase-9及Caspasse-3基因的mRNA表达极显着增高（P<0.01）。Tau可显着抑制缺氧肉鸡心肌细胞Calpain-1、Calpain-2（P>0.05,P<0.01）,极显着抑制Caspase-9及Caspasse-3基因的mRNA表达增高（P<0.01,P<0.01）。PD150606对Calpains基因的mRNA表达水平无影响,对Caspase-9的抑制能力极显着低于Tau（P<0.01）,同时显着增加了Caspase-3 mRNA表达水平（P<0.01）。5)Tau对缺氧肉鸡心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响:缺氧使Calpain-1的蛋白表达水平极显着升高（P<0.01）,Tau及PD150606均能显着抑制Calpain-1表达升高（P<0.05）,但两者共同作用无抑制效果（P>0.05）。缺氧使Bcl-2蛋白相对表达量极显着下降（P<0.01）,Tau及PD150606能极显着维持Bcl-2蛋白水平（P<0.01）。缺氧使心肌细胞Cyt-C蛋白极显着增加（P<0.01）,Tau能极显着降低缺氧情况下Cyt-C蛋白量（P<0.01）,PD150606能显着降低缺氧情况下Cyt-C蛋白量（P<0.05）。M组Caspase-9蛋白表达极显着高于其他7组（P<0.01）,Tau及PD150606都能极显着降低其蛋白表达水平（P<0.01）,Tau效果显着高于PD150606（P<0.05）。缺氧极显着降低了M组未剪切Caspase-3的蛋白表达量（P<0.01）,Tau及PD150606都能显着减少该降低情况（P<0.01,P<0.05）,两者共同作用效果最佳;推测缺氧造成Caspase-3蛋白活化,Tau及PD150606都能极显着减少活化的发生。综上所述,在肉鸡心肌细胞发生缺氧损伤时,预防性应用牛磺酸具有提高心肌细胞抗氧化的能力;并通过调控Calpains的表达显着抑制了Cyt-C介导的细胞凋亡通路中相关因子的基因和蛋白表达,有效抑制了心肌细胞凋亡的发生。因此可以推测:Calpains可通过Cyt-C途径促进缺氧肉鸡心肌细胞凋亡;牛磺酸可通过调控Calpains来实现对缺氧心肌细胞的保护功能,但不局限于该途径。以上研究结果为临床中应用牛磺酸防治肉鸡AS提供了理论依据。
陈严,吴柱国[4]（2010）在《牛磺酸对心肌保护作用的研究进展》文中研究指明牛磺酸作为一种内源性氨基酸可以防止各种病理因素造成的心肌细胞损伤。本文从细胞损伤发生的基本机制出发,综述了外源性给予中药成分牛磺酸对心肌保护作用的研究进展,旨为对牛磺酸在临床治疗心血管疾病的应用提供部分理论依据。
唐禾[5]（2008）在《NaCN中毒对缺氧大鼠心脏损伤作用及干预措施研究》文中研究说明氢氰酸（HCN）和氯化氰（CNCl）是外军重点装备的全身中毒性毒剂,因分子中都含有氰根,故又称之为氰类毒剂。它们的毒性大、吸收迅速、防护困难,是典型的速杀性战剂。除HCN和CNCl外,属于氰类的还有无机的氰化钠、氰化钾等,都是剧毒的化工原料,平时的工农业生产中也可能由于泄露而引起人畜中毒。有机氰和植物中存在的氰类化合物也能对机体产生毒害作用。因此,氰类毒物中毒的防治是军事预防医学的重要任务。氰化物中毒后迅速出现缺氧、窒息、惊厥等中毒症状,来势凶猛、发展迅速,可在数分钟至数十分钟内死于呼吸、循环衰竭。氰化物进入机体后能迅速离解出氰根离子（CN-）,能阻断细胞呼吸和氧化磷酸化,对细胞线粒体呼吸链末端氧化酶产生抑制作用,引起组织中毒性缺氧,进而细胞内生物氧化发生一系列变化,造成“内呼吸”障碍。一般将海拔高度大于3 000m的地区成为高原。低压低氧（习惯上称作高原缺氧）是高原地区的主要环境特征。部分人在这种环境下会出现明显的症状和体征。而超过这个高度时,其生理、生化和解剖等方面的改变就会变得越来越明显[1]。我国是一个高原地区面积广阔的国家,仅青藏高原的面积就达到250万平方公里。高原地区多与他国相邻,边境漫长,有重要的军事战略地位。当高原缺氧复合NaCN中毒时,缺氧和NaCN中毒这“内”、“外”两种缺氧因素同时作用机体,将对机体产生双重缺氧的联合打击。因此,对缺氧复合氰化物（NaCN）中毒的研究对我国的国防保障和未来的战争胜负都会产生极其重要的影响。急性缺氧对机体的血压（SP）、心率（HR）的影响已有相关报道。有多篇文献提出,急性低压缺氧大鼠心室收缩功能指标如左室收缩压（LVSP）,左室压力最大上升速率（+dP/dtmax）等均显着降低。心肌细胞缺氧不仅是严重创伤后心功能衰竭的重要原因,也是启动和诱发其它脏器损伤形成多脏器功能不全/衰竭的重要始动因素[2]。有研究发现,在高原缺氧条件下化学战剂毒性增强,对心功能损害效应加重,引起心率失常、心肌收缩力减弱等心脏功能异常变化[3]。目前,国内外对缺氧复合NaCN中毒所产生的联合效应对大鼠心脏结构和功能影响研究甚少,对药物预防救治效果亦未见有关评价方面的报道。心脏是对缺氧极为敏感的器官。有研究表明,单纯缺氧和单纯NaCN中毒均可明显导致心肌细胞凋亡（Apoptosis）,缺氧导致细胞死亡的主要方式是通过诱导细胞凋亡而产生的。在采用大鼠离体心肌细胞培养后、给予缺氧/复氧处理的实验研究中,发现了心肌细胞在持续较长时间的缺氧而再复氧时,细胞损伤现象严重,与曾经研究过的在体动物心肌细胞缺血/再灌注损伤情况一致。在缺氧/复氧损伤组中,流式细胞仪PI染色法的DNA分析直方图上,低于G1期的细胞数增多,明显高于其他各组,说明凋亡的细胞存在较多。透射电镜可见缺氧/复氧损伤组心肌细胞损伤严重,可有明显的凋亡前期、凋亡阶段或凋亡后期的改变,同时心肌细胞凋亡数目也明显增加,支持复氧（再灌注）损伤是心肌细胞凋亡的重要诱发因素。认为缺氧/复氧可加重心肌细胞损伤,伴着心肌细胞凋亡的增加;细胞内钙离子过多可能是触发心肌细胞凋亡的因素;超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）可减少自由基的生成、降低心肌细胞凋亡的发生和缺氧预处理具有抗心肌细胞损伤和减轻心肌细胞凋亡的作用,均有可能是通过降低细胞内钙离子浓度而起作用的[4-6]。Fliss[7]等在在体动物模型研究中也发现了细胞凋亡是心肌再灌注损伤的特征之一,再灌注损伤可加速不可逆转的细胞凋亡。Musat-Marcu等[8]在体外灌注大鼠心脏发现其早期即可发生心肌细胞凋亡,且在抑制凋亡后伴随着心功能的恢复,提示心肌细胞凋亡参与了心功能的衰减。细胞色素C（Cytochrome C, Cyt C）及细胞凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor, AIF）正常时分别位于线粒体内膜和线粒体膜间隙。缺血/再灌注（MI/R）时,PT孔受损而开放,Cyt C及AIF被释放入胞浆。Cyt C与胞浆中的凋亡激活因子-1（apoptosis- activating factor-1, Apaf-1）结合,依次激活半胱酸蛋白酶家族中的Caspase-9、Caspase-3而启动凋亡通路,活化的Caspase-3可以作用于胞质中的细胞骨架蛋白,或作用于细胞核中的DNA,引发细胞凋亡,这是线粒体caspase依赖性凋亡途径。而AIF经PT孔被释放入胞浆,其将易位入核,激活内源性核酸内切酶将染色体切割为180-200bp整数倍的DNA片断,同时加速Cyt C的释放,进一步促进细胞凋亡,这是线粒体caspase非依赖性凋亡途径。可见,线粒体caspase依赖性和caspase非依赖性这两条凋亡途径在心肌细胞凋亡中发挥重要作用。缺氧预适应（ hypoxic preconditioning, HPC）,并可将其界定为“预先短时间非致死性重复缺血/缺氧后,机体组织细胞获得对随后长时间致死性缺血/缺氧损伤的高度耐受性”。缺氧预处理对心肌细胞可以产生预适应现象,缺氧预适应迄今为止被认为是最强有力的一种心肌内源性保护措施[9,10]。人参皂苷（saponins of panax ginseng, SPG）能对抗氧自由基对心脏的损伤,保持心肌细胞膜的完整性,改善急性心肌缺血时心肌舒张功能,还能对抗心肌缺血所致心肌不可逆坏死,使SOD活性升高,心肌释放磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（phosphoenolpy- ruvate carboxykinase, PCK）减少。人参总皂苷（total saponins of Panax Ginseng, TSPG）对缺血再灌注损伤中的细胞坏死和细胞凋亡均有显着的保护作用[11-14]。人参皂苷尤其是Re可能具有阻滞K+通道的作用,可使离体豚鼠乳头状肌细胞动作电位时程和有效不应期均延长,人参皂苷抗心律失常的作用[15]。人参皂苷抗心肌缺血等作用研究表明,人参皂苷能对抗氧自由基对心脏的损伤,保持心肌细胞膜的完整性,改善急性心肌缺血时心肌舒张功能,还能对抗心肌缺血所致心肌不可逆坏死,使SOD活性升高,心肌释放PCK减少。侯明晓等利用体外培养的心肌细胞缺血再灌注损伤的模型的结果表明:TSPG对缺血再灌注损伤中的细胞坏死和细胞凋亡均有显着的保护作用[16]。Scott等研究发现,人参皂苷Rb1可抑制心肌细胞的收缩,有助于减少心肌的耗氧量[17]。自由基亦可损伤血管内皮细胞,引起动脉粥样硬化、高血压等心脑血管疾病。有实验表明,人参皂苷可降低过氧化物丙二醛的含量,从而减轻血管内皮细胞损伤。而牛磺酸（Taurine, Tau）能清除氧自由基、保护细胞膜、使心肌酶和肝酶释放减少、具有极强抗氧化能力。它也能调节细胞内钙的稳态,减少肢体缺血再灌注时钙离子内流,而且中性粒细胞呼吸爆发产生大量过氧化氢（hydrogen peroxide, H2O2）,与CL结合产生难以清除的强氧化剂-次氯酸,牛磺酸可与次氯酸结合,形成稳定的弱氧化剂-氯胺牛磺酸,从而除次氯酸对细胞的破坏作用。因此显示牛磺酸可纠正肢体缺血再灌注后远隔器官损伤[18]。长疗程应用牛磺酸在降低血压和逆转心肌肥厚的同时,也使高血压大鼠心肌细胞凋亡减少,并能降低大鼠心肌AngⅡ含量和ACE活性。因此,我们认为,长疗程牛磺酸治疗可抑制高血压大鼠心肌细胞凋亡和逆转心肌肥厚,上述作用可能与药物拮抗组织局部AngⅡ的生成有关。牛磺酸还具有抑制心肌细胞凋亡的作用,可能与其调控凋亡相关基因Fas、Bax和Bcl-2的蛋白表达有关。牛磺酸可以有效保护心肌细胞而避免发生心脏畸形,同时有降低血压[19,20]。血液供应和血氧含量是心脏功能正常的先决条件,因此,任何引起血液中氧含量降低或心肌供血不足的有害因素都可能导致心脏功能异常。那么,缺氧环境氰化物中毒对心脏功能将会产生何种影响?由此带来的心脏损伤其机制如何?线粒体caspase依赖性和caspase非依赖性这两条凋亡途径在缺氧环境氰化物中毒诱导大鼠心肌细胞凋亡中有何种作用?缺氧预适应、人参皂苷和牛磺酸等干预措施对大鼠缺氧环境氰化物中毒有无效果?这些问题迄今未见研究报道。本课题基于上述两种情况,在前期工作的基础上,采用实验动物研究和体外细胞培养研究相结合的方法,建立缺氧复合NaCN中毒的动物模型和NaCN染毒的细胞模型,通过观察模拟高原环境缺氧复合NaCN中毒对大鼠心脏的影响、检测SPG等干预措施对缺氧复合NaCN中毒大鼠心脏保护作用、观测心肌细胞NaCN染毒后细胞凋亡情况,以及定量分析上述情况下线粒体caspase依赖性和caspase非依赖性这两条凋亡途径中Cyt C、caspase-3和AIF等因子的表达,来探讨模拟缺氧条件下NaCN中毒后心功能改变的特点和心肌细胞凋亡的特性,为今后缺氧性NaCN中毒的预防救治措施的研究提供重要的理论基4础。最终为制定缺氧条件下复合NaCN中毒的预防和救治方案提供实验和理论依据。方法:1.检测有无干预措施情况下缺氧复合NaCN中毒后对大鼠心脏结构和功能影响,包括血流动力学、心电图、心肌酶谱、心肌病理切片光镜电镜观测等;2.建立体外SD乳鼠心肌细胞NaCN染毒模型,检测急性NaCN染毒后心肌细胞是否存在凋亡情况;3.定量分析有无干预措施情况下心肌细胞缺氧复合NaCN中毒后Cyt C、caspase-3和AIF表达,分析线粒体caspase依赖性和caspase非依赖性这两条凋亡途径在缺氧复合NaCN中毒引起心肌细胞凋亡中的特点;结果:一、人参皂苷等干预措施对缺氧和NaCN中毒大鼠心脏的保护作用1.平原实验组大鼠NaCN中毒后,血流动力学发生改变:HR、mLVSP、+dP/dtmax等指标均较中毒前出现显着下降（P<0.01）,T波振幅则出现显着上升（P<0.01）,30min后逐渐向正常值恢复。2.高原实验组大鼠NaCN中毒后,血流动力学改变比平原实验组更为明显:HR、mLVSP、+dP/dtmax等指标均较中毒前出现显着下降（P<0.01）,T波振幅则出现显着上升（P<0.01）,40min后逐渐向正常值恢复,但恢复程度和效果较平原实验组差。3.平原实验组大鼠NaCN中毒后,Cyt C活性显着降低（P<0.01）。中毒2h后,Cyt C活性有明显的恢复（P<0.01）。4.高原实验组大鼠在NaCN中毒后,Cyt C的活性显着低于平原实验组（P<0.01）;中毒2h后也有一定程度恢复,但与平原实验组比较恢复更慢（P<0.01）。5.平原和高原实验组大鼠NaCN中毒后均出现明显的心肌酶谱（AST、LDH、CK、CK-MB）变化,高原实验组大鼠的心肌酶谱改变比平原实验组大鼠更显着（P<0.01）,并且恢复缓慢。其中,LDH变化最为显着。6.平原实验组大鼠中毒后心肌组织损伤逐渐加重,至2h后最为严重,间质有腔隙形成,出现纤维退变,横纹不清,弥漫性充血、水肿变性,少数心肌有断裂,横纹消失;中毒6h时有明显的恢复。7.高原实验组大鼠心肌组织中毒前即见充血、水肿变性、局灶性炎症细胞等变化。NaCN中毒后心肌损伤加重,出现严重水肿变性,弥漫性细胞肿胀,胞质模糊,并有水肿囊出现,细胞变性,间质血管充血。中毒6h时,高原实验组大鼠心肌组织损伤并无明显的恢复。8.平原实验组大鼠中毒2h后出现线粒体轻微水肿,灶性溶解,内质网扩张,线粒体部分嵴和膜融合或消失等现象。9.高原对照组大鼠超微结构也出现轻微损伤,心肌间质有轻微水肿,线粒体略有肿胀;高原NaCN中毒组大鼠线粒体则肿胀明显,有小量的嵴和膜融合或消失,心肌间质水肿,肌节排列稍紊乱,核旁水肿处线粒体大部分嵴和膜融合或消失,粗面内质网有脱颗粒现象;损伤程度明显重于平原实验组大鼠。10. HPC和SPG、Tau灌胃干预后,对NaCN中毒和高原缺氧复合NaCN中毒引起的大鼠血流动力学改变有明显的干预作用,HR、mLVSP、+dP/dtmax、T波振幅等指标均较未干预组变化程度小,恢复效果更明显,且有统计学意义。11. HPC干预后的大鼠NaCN中毒后Cyt C活性也出现显着降低（P<0.01）,至2h时有所恢复,效果好于高原缺氧复合NaCN中毒大鼠（P<0.05）。二、NaCN对SD乳鼠原代心肌细胞的凋亡作用1.建立了NaCN染毒SD乳鼠心肌细胞模型;2.测定出SD乳鼠心肌细胞NaCN染毒的IC50值:正常条件下IC50值为87.85μmol·L-1。3.以IC50剂量的NaCN染毒后,SD乳鼠心肌细胞出现凋亡。凋亡细胞的细胞核由于染色质浓集而呈现亮蓝色,呈分叶、碎片状等。三、caspase依赖/非依赖性途径在大鼠心脏损伤中的作用研究1.大鼠缺氧复合/或NaCN中毒30min后,心肌组织胞浆Cyt C、caspase-3蛋白表达和mRNA表达均上调;2.大鼠缺氧复合/或NaCN中毒30min后,心肌组织胞浆AIF蛋白表达上调,而AIF mRNA表达对NaCN染毒诱导却并不敏感;3. Tau、SPG干预对抑制大鼠缺氧复合/或NaCN中毒30min后心肌组织胞浆Cyt C、caspase-3和AIF蛋白表达以及Cyt C、caspase-3 mRNA表达上调有明显作用,对AIF mRNA表达无明显作用。结论:1.缺氧复合NaCN中毒大鼠血流动力学HR、mLVSP、+dP/dtmax等指标均显着下降,T波振幅显着增高。相对于单纯的缺氧和单纯的NaCN中毒,两种因素同时作用所引起的心脏功能损伤,特别是心脏的收缩能力的损伤更加明显;2.缺氧复合NaCN中毒大鼠的血液生化指标,如心肌酶谱（AST、LDH、CK、CK-MB）的变化也更为明显,Cyt C活性下降也更为显着。表明两种因素作用下大鼠的心脏生化代谢变化很大,加重心脏功能的紊乱;3.病理检测结果表明,缺氧复合NaCN中毒后大鼠心肌组织的结构损伤更为严重,超微结构的病理改变更加明显,特别是NaCN中毒的靶细胞器-线粒体的损伤,这可能是引起心肌细胞凋亡的最主要原因;4. HPC、SPG和Tau等干预措施,对缺氧复合NaCN中毒大鼠心脏功能的恢复和维持Cyt C的活性均有一定的效果。可考虑将HPC、SPG和Tau等列入缺氧复合NaCN中毒防护措施的筛选;5.通过建立的体外SD乳鼠心肌细胞NaCN染毒模型,发现经IC50剂量NaCN染毒SD乳鼠原代心肌细胞凋亡。提示细胞凋亡可能在缺氧复合NaCN中毒心脏损伤中发挥作用;6.大鼠缺氧复合/或NaCN中毒30min后心肌组织胞浆Cyt C、caspase-3蛋白表达和mRNA表达上调,线粒体caspase依赖途径导致的心肌细胞凋亡十分明显,寻找阻止线粒体caspase依赖途径心肌细胞凋亡的措施可能会对缺氧复合NaCN中毒的预防和治疗带来一定的效果;7. Tau、SPG干预,对抑制大鼠缺氧和/或NaCN中毒心肌组织胞浆Cyt C、caspase-3和AIF蛋白表达以及Cyt C、caspase-3 mRNA表达上调有明显作用,提示Tau、SPG可作为预防线粒体途径引起心肌细胞凋亡的筛选措施;8.大鼠NaCN中毒30min后,心肌组织胞浆AIF蛋白表达虽然出现上调,但AIF mRNA表达变化却并不明显;AIF mRNA表达对缺氧的敏感程度强于对NaCN中毒,提示NaCN中毒后线粒体非caspase依赖途径引起心肌细胞凋亡的机制并不同于caspase依赖途径,缺氧、NaCN中毒引起心肌细胞凋亡可能存在不同的机制,值得深入研究。
张晓丹,渠永清,刘琳[6]（2008）在《牛磺酸对心肌细胞的保护作用研究现状》文中研究指明
唐武[7]（2008）在《章鱼下脚料中牛磺酸的提取及其生理功能研究》文中研究指明牛磺酸是人体必需的一种氨基酸,它以游离的形式存在动物机体中,在牡蛎、章鱼、蛤蛎等海洋生物中含量尤为丰富。牛磺酸作为一种重要的生物活性物质,其生理作用主要表现为（1）促进大脑发育;（2）增强视力;（3）调节神经传导;（4）促进吸收、消化脂肪,参与胆汁酸盐的代谢;（5）维持正常的心脏、肝脏、内分泌系统的功能等,已被广泛应用于食品添加剂、医药及洗涤剂等行业。近年来随着对牛磺酸生理作用认识的深入,对其需求日益增加。牛磺酸的来源主要依靠化学合成,但其存在原料（溶剂）毒性大和环境污染严重等问题,且合成牛磺酸的生物活性远不如天然牛磺酸。因此,寻找安全的牛磺酸资源十分重要,从海洋生物中提取天然牛磺酸成为倍受关注和研究的热点。本文对章鱼下脚料中牛磺酸的提取进行了系统的研究。结果表明,牛磺酸的最佳提取条件为:新鲜下脚料匀浆后加4倍水在100℃下提取1.5h。采用等电点沉淀分离法去除提取液中的可溶性蛋白质。最优分离纯化条件为:pH 5.0,以6ml/min流速1次上柱,用80℃去离子水以9ml/min洗脱,收集电导率下降到稳定的那部分洗脱液。最佳结晶条件为:洗脱液浓缩到原体积的3%后用3倍体积无水乙醇在4℃下结晶0.5h,重结晶脱色后可得到高纯度牛磺酸产品。此外对牛磺酸进行了抗力竭性疲劳、以及对心肌细胞缺氧时凋亡影响及其机理的研究。结果如下:（1）饮水中牛磺酸的添加量为740～750mg/L时,对小鼠具有最好的抗力竭性疲劳效果,同时在此浓度下力竭运动小鼠体内的MDA浓度水平最低,具有最佳的抗氧化效果,与抗力竭性疲劳有着很好的协同作用。（2）牛磺酸可以显着提高体外原代培养心肌细胞的缺氧时的SOD活性,降低细胞培养环境中的MDA浓度,减少缺氧时心肌细胞凋亡。表明牛磺酸能有效提高体外培养心肌细胞缺氧时的抗氧化能力,拮抗缺氧时心肌细胞凋亡。根据实验结果分析,牛磺酸的外周抗氧化作用,在一定程度上促进其抗力竭性疲劳和拮抗细胞凋亡能力的提高。
黄骥[8]（2005）在《模拟缺血预处理对原代培养乳鼠窦房结细胞Cx及ICl,swell表达的影响》文中研究说明背景和目的病态窦房结综合征是一种严重危害人类健康的常见心血管病。明确其发病机理并找出有效的预防和治疗措施一直是心血管领域最重要的课题之一。在我们先前的研究中发现,模拟缺血/再灌注（I/R）能引起在体或离体窦房结细胞出现结构和功能的紊乱,导致心律或频率的异常。在几乎所有动物细胞上都发现缺血预处理（IP）是最强的内源性保护机制,它可以减轻I/R引起的各种心肌损伤。但IP信号转导非常复杂,目前这方面知之不多,而窦房结细胞中的IP研究更少。最近研究显示缝隙连接蛋白（Cx）可能是预处理保护作用的终末效应子之一。大量的研究显示肿胀激活氯电流（ICl,swell）在心肌细胞生理或病理过程中参与细胞电活动和细胞容积调节,在I/R时细胞肿胀激活该电流,该电流在心肌细胞电-机械反馈中起调节作用。本研究利用原代培养乳鼠窦房结细胞研究模拟IP对细胞的保护作用;研究Cx在预处理时的改变及可能机理;研究在培养窦房结细胞中是否存在ICl,swell及其特点,以及模拟IP对其的影响,希望能为将来窦房结细胞缺血性损伤的保护提供新的思路。方法1.通过MTT比色和PI染色检测细胞存活率比较不同模拟预处理模型。2.利用激光共聚焦显微镜和免疫细胞化学检测窦房结细胞Cx的表达。3.用全细胞膜片钳记录给予不同干预的乳鼠窦房结细胞的ICl,swell。结果1.成功建立了原代培养乳鼠窦房结细胞模拟IP模型。通过研究不同时间组合的模拟IP方案,在IP诱导启动过程中起决定作用的应该是预缺血的总时程,在培养乳鼠窦房结细胞中IP作用的预缺血时程为5min-30min,而15min的累计预缺血时间获得了最显着的保护效果,故筛选出5min模拟缺血+5min模拟再灌注,反复三次,后再行3h模拟缺血+4h模拟再灌注的模拟IP方案对培养乳鼠窦房结细胞的保护作用最强。2.通过药物干预研究,证实了PKC及线粒体KATP通道的激活介导了模拟IP对乳鼠窦房结细胞的保护作用。氯通道阻断剂对原代培养培养窦房结细胞的IRI具有一定的保护作用,提示IP可能通过氯通道发挥保护作用。3.用免疫荧光检测方法发现乳鼠窦房结细胞中有Cx45、Cx43和Cx40免疫荧光
张萌[9]（2005）在《丹酚酸B/三七总皂苷配伍对心肌梗死大鼠的影响及抑制心肌细胞凋亡的分子机制研究》文中研究指明目的 丹参、三七是复方丹参方的主要组成,以往研究表明其抗心肌梗死存在最佳配比范围。在前期工作的基础上,本研究探讨丹参的主要水溶性成分丹酚酸B（Sal B）与三七的主要成分三七总皂苷（PNS）单用和配伍对实验性大鼠心肌梗死及心脏基因表达谱的影响,对心肌梗死后心肌细胞凋亡的抑制作用及分子机制,为中药组分配伍研究模式提供科学依据。 方法 结扎冠脉左前降支复制大鼠心肌梗死模型,假手术组作对照,连续灌胃给药7天。 1.称量左心室、左心室梗死区心肌组织重量,计算心肌梗死范围;放射免疫法测定血浆Ang Ⅱ释放水平: 2.用生理记录仪检测血流动力学指标变化; 3.用彩色超声心动仪观察心脏左室结构和功能变化; 4.采用Affymetrix基因芯片观察大鼠心脏梗死边缘区基因表达谱变化; 5.采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI法检测大鼠心脏梗死边缘区心肌细胞凋亡情况; 6.应用实时荧光定量RT-PCR技术检测与心肌细胞凋亡及调控通路相关基因表达情况。 结果 1.与模型组相比,Sal B、PNS以及各配伍组可以不同程度地降低心肌梗死范围,有降低血浆Ang Ⅱ释放水平的趋势,配伍高剂量组有优于其它中药组的趋势。 2.Sal B、PNS以及各配伍组均可以不同程度地降低心电图ST段波幅、血清LDH释放水平、左室舒张内压（LVDP）,升高左室内压最大上升和下降速率（+dp/dtmax、-dp/dtmax）,配伍组对上述指标的作用有优于单独用药组的趋势。 3.Sal B、PNS以及各配伍组可以不同程度地降低左室收缩末期内径（LVDs）、左室收缩末期后壁厚度（LVPWs）、左室收缩末期容积（LVESV）,升高左室射血
郭明[10]（2005）在《活血益气中药对血管紧张素Ⅱ诱导培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响》文中指出细胞凋亡是指细胞由基因控制的主动性死亡过程。某些致病因子可以使细胞凋亡的基因调控失常,致使细胞凋亡减弱或增强,从而破坏了机体细胞的自稳态,最终表现为疾病的发生。心肌细胞凋亡是引起心血管系统疾病的重要原因之一。高血压病长期慢性压力超负荷会引起心脏结构和功能的适应性改变（心脏重塑）,心脏结构的改变主要为左室肥厚（LVH）,越来越多的研究显示高血压病 LVH 存在心肌细胞凋亡和相关基因表达异常,且不同类型的 LVH 的不同发展阶段其基因表达和细胞凋亡的方式均有所不同。 近年来,人们在药物对细胞凋亡影响领域一直在进行各种探索,并取得了一定成绩。中药是传统医学重要组成部分,有关其对细胞凋亡的影响引起国内外学者的广泛关注,进行了大量研究工作。中医理论认为,人体内的阴阳平衡是以阴阳依存互根为基础的,高血压左室肥厚的形成是高血压患者机体内阴阳气血不断寻求平衡过程中的适应性反应,表现为心脏的增生性损伤,类似于中医之“积”,也伴随着心肌细胞的凋亡,其病理基础在于血瘀,气虚和肝肾阴虚,尤以血瘀为主。川芎活血行气,散风止痛;丹参活血祛瘀,清热凉血,两者均为临床常用活血药。黄芪补气固表,利尿脱毒,排脓,敛疮生肌,为历代临床常用的益气药。临床上大量证据表明这三种药物对 LVH 有明确的治疗作用,实验研究表明它们对缺血再灌注等原因诱导的心肌细胞凋亡有抑制作用,而关于其对血管紧张素 II（AngⅡ）诱导的体外培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响研究较少。中医传统传统理论有“上工治未病”的思想,强调了疾病预防和早期治疗的重要性。高血压左室肥厚是患者血压长时间保持在一个较高水平形成的不良后果,故在治疗上预防尤为重要。 实验选用出生 1-3 天的 Wistar 大鼠进行心肌细胞培养。在其中加入 AngⅡ,提取 DNA 进行琼脂糖凝胶电泳（DNA ladder）,以 AnnexinV-PI 双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,建立了 AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的模型。在此基础上,选用活血益气中药观察其对 AngⅡ诱导培养乳鼠心肌凋亡的影响。选用药物中,活血药川芎采用其有效成分盐酸川芎嗪（标准品,中国医学科学院药物研究所）,丹参采用静脉注射剂型丹参粉针剂（哈药集团中药二厂）;益气药黄芪采用静脉注射剂型黄芪注射液（黑龙江圣泰制药有限公司）。将三种药物分别与AngⅡ同时、或在 AngⅡ作用 2 日后加入细胞,共同培养 4 日,以 AngⅡ受体 1拮抗剂氯沙坦（Losartan）作为阳性对照药,AnnexinV-PI 双染流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果发现 AngⅡ组电泳可见凋亡特异性的云梯状（ladder）电泳带,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率 AngⅡ组较对照组从（8.98±1.49）%增加至（23.96±4.16）%,有显着性差异（p<0.01）。盐酸川芎嗪早期用药组可将凋亡率恢复至（9.83±2.27）%,晚期用药组恢复至（14.06±1.28）%;丹参粉针剂
二、牛磺酸对培养乳鼠心肌细胞缺氧坏死的保护作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、牛磺酸对培养乳鼠心肌细胞缺氧坏死的保护作用（论文提纲范文）
（1）复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠的影响及抗内质网应激作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词 |
| 文献综述 |
| 综述一 益气活血中药改善慢性心衰心气虚证作用机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 内质网应激与心血管疾病 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 1 复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠药效学作用和机制研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 动物 |
| 1.1.2 试验药物 |
| 1.1.3 试剂 |
| 1.1.4 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 SD大鼠心梗模型制备 |
| 1.2.2 实验分组及给药方法 |
| 1.2.3 一般状态观察 |
| 1.2.4 超声心动图检测 |
| 1.2.5 18F-FDG正电子发射断层心肌代谢显像 |
| 1.2.6 大鼠心肌病理组织检测 |
| 1.2.7 大鼠心肌容积胶原分数测定 |
| 1.2.8 大鼠心肌TUNEL荧光染色 |
| 1.2.9 大鼠心肌免疫荧光化学染色 |
| 1.2.10 透射电镜检测 |
| 1.2.11 血浆AngⅡ检测 |
| 1.2.12 大鼠心肌组织蛋白提取 |
| 1.2.13 BCA法蛋白定量 |
| 1.2.14 Western Blot上样蛋白制备 |
| 1.2.15 Western blot检测大鼠心肌蛋白表达 |
| 1.2.16 统计学方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 一般状态观察 |
| 1.3.2 复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠心脏功能和心室结构的影响 |
| 1.3.3 复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠心肌葡萄糖代谢的影响 |
| 1.3.4 复方人参补气颗粒对大鼠心肌病理组织形态的影响 |
| 1.3.5 复方人参补气颗粒对大鼠心肌细胞凋亡的影响 |
| 1.3.6 复方人参补气颗粒对大鼠左室心肌线粒体超微结构的影响 |
| 1.3.7 复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠血管紧张素Ⅱ水平的影响 |
| 1.3.8 免疫荧光观察复方人参补气颗粒对大鼠心肌CHOP、Sigma-1R表达的影响 |
| 1.3.9 Western Blot观察复方人参补气颗粒对大鼠缺血心肌CHOP、Caspase-12、Sigma-1R、Bax、Bcl-2表达的影响 |
| 1.4 小结 |
| 参考文献 |
| 2 基于LC/MS的大鼠心肌组织脂代谢组学分析 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 动物 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 药物 |
| 2.1.4 仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 药物配制及实验分组 |
| 2.2.2 样本前处理 |
| 2.2.3 UHPLC-MS分析 |
| 2.2.4 生物信息学分析 |
| 2.2.5 技术路线图 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 心肌脂质图谱质量控制及定性定量结果 |
| 2.3.2 心肌脂代谢组学初步分析 |
| 2.3.3 差异标志物筛选 |
| 2.3.4 相关性分析 |
| 2.3.5 差异性代谢物通路富集分析 |
| 2.4 小结 |
| 参考文献 |
| 3 复方人参补气颗粒有效成分抗H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤作用研究 |
| 3.1 复方人参补气颗粒有效成分对H9c2心肌细胞的毒性作用考察 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.3 结果 |
| 3.1.4 小结 |
| 3.2 复方人参补气颗粒有效成分对缺氧/复氧条件下H9c2心肌细活力考察 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.2.3 结果 |
| 3.2.4 小结 |
| 3.3 基于ERS途径的复方人参补气颗粒有效成分抗H/R诱导的心肌细胞损伤机制研究 |
| 3.3.1 材料 |
| 3.3.2 方法 |
| 3.3.3 结果 |
| 3.3.4 小结 |
| 参考文献 |
| 讨论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）牛磺酸对低温环境下肉鸡心肌抗氧化作用影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstarct |
| 1 前言 |
| 1.1 腹水综合症 |
| 1.2 心肌肥大 |
| 1.2.1 肉鸡心肌肥大的发生及其机制 |
| 1.2.2 心肌肥大的预防 |
| 1.2.3 ISO与心肌肥大的关系 |
| 1.3 .牛磺酸 |
| 1.3.1 牛磺酸的理化性质 |
| 1.3.2 牛磺酸与心肌肥大 |
| 1.4 本研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 动物日粮 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 |
| 2.1.4 主要试验仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 动物饲养试验 |
| 2.2.2 H9c2细胞培养试验 |
| 2.3 数据的统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 牛磺酸对肉鸡心肌抗氧化能力及Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 3.1.1 牛磺酸对肉鸡心肌抗氧化酶能力作用的影响 |
| 3.1.2 牛磺酸对肉鸡心肌Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 3.2 牛磺酸对H9c2 细胞抗氧化能力及Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 3.2.1 牛磺酸对 H9c2 细胞抗氧化酶能力的影响 |
| 3.2.2 牛磺酸对H9c2 细胞Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 牛磺酸对肉鸡心肌及H9c2细胞中抗氧化能力的影响 |
| 4.1.1 牛磺酸对肉鸡心肌抗氧化能力的影响 |
| 4.1.2 牛磺酸对H9c2细胞抗氧化能力的影响 |
| 4.2 牛磺酸对肉鸡心肌及H9c2 细胞Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 4.2.1 牛磺酸对肉鸡心肌Keap1/Nrf2 信号通路m RNA表达的影响 |
| 4.2.2 牛磺酸对H9c2 细胞Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）缺氧诱导肉鸡心肌细胞凋亡中Calpains的作用及牛磺酸调控机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 心肌细胞凋亡与肉鸡腹水综合症的关系 |
| 1.2 心肌细胞凋亡通路与凋亡调控 |
| 1.2.1 心肌细胞的凋亡通路 |
| 1.2.2 心肌细胞凋亡的调控 |
| 1.2.3 Calpain与细胞凋亡 |
| 1.3 缺氧与心肌细胞凋亡 |
| 1.4 牛磺酸对心脏的保护作用 |
| 1.5 心肌细胞的分离培养 |
| 1.6 研究目的与主要意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验主要试剂 |
| 2.1.3 试验主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 肉鸡胚胎心肌细胞的分离培养 |
| 2.2.2 肉鸡心肌细胞的鉴定 |
| 2.2.3 肉鸡心肌细胞及成纤维细胞生长曲线的测定 |
| 2.2.4 肉鸡心肌细胞缺氧模型的建立及最终分组处理 |
| 2.2.5 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞损伤指标及抗氧化指标检测 |
| 2.2.6 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞内Ga2+浓度的影响 |
| 2.2.7 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞凋亡相关基因的检测 |
| 2.2.8 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞凋亡相关蛋白的检测 |
| 2.3 数据统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 肉鸡胚胎心肌细胞分离培养与鉴定结果 |
| 3.2 MTS检测心肌细胞与成纤维细胞活力曲线 |
| 3.3 不同添加物浓度对心肌细胞活力的影响 |
| 3.3.1 不同浓度Tau对心肌细胞活力的影响 |
| 3.3.2 不同浓度PD150606对心肌细胞活力的影响 |
| 3.4 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞凋亡情况的影响 |
| 3.5 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞损伤指标及抗氧化指标的影响 |
| 3.5.1 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞上清中损伤及抗氧化指标的影响 |
| 3.5.2 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞内损伤指标及抗氧化指标的影响 |
| 3.6 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞内钙离子浓度的影响 |
| 3.7 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞凋亡相关基因表达量的影响 |
| 3.8 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞凋亡相关蛋白表达量的影响 |
| 3.8.1 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞Calpain-1蛋白表达量的影响 |
| 3.8.2 Tau对缺氧鸡心肌细胞Bcl-2蛋白表达量的影响 |
| 3.8.3 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞Cyt-C蛋白表达量的影响 |
| 3.8.4 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞Caspase-9蛋白表达量的影响 |
| 3.8.5 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞Caspase-3蛋白表达量的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 肉鸡胚胎心肌细胞的分离培养与鉴定 |
| 4.2 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞凋亡率及钙离子浓度的影响 |
| 4.3 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞抗氧化能力的影响 |
| 4.4 Tau对缺氧肉鸡心肌细胞凋亡相关基因mRNA、蛋白表达的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位论文期间发表文章 |
（4）牛磺酸对心肌保护作用的研究进展（论文提纲范文）
| 1 膜稳定作用 |
| 2 改善缺血缺氧心肌细胞功能 |
| 3 抑制心肌细胞凋亡 |
| 3.1 凋亡诱发、凋亡信号转导阶段 |
| 3.2 凋亡相关基因激活及细胞凋亡的执行阶段 |
| 4 牛磺酸通过降低外周血管阻力减少心脏做功 |
| 4.1 减少体内的盐浓度和利尿 |
| 4.2 调节外周血管收缩 |
| 4.3 拮抗血管紧张素Ⅱ |
| 5 免疫调节作用 |
| 6 结语 |
（5）NaCN中毒对缺氧大鼠心脏损伤作用及干预措施研究（论文提纲范文）
| 英文缩写一览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 NaCN 中毒对缺氧大鼠心脏损伤作用及干预措施研究. |
| 前言 |
| 第一部分 人参皂苷等干预措施对缺氧和NaCN 中毒大鼠心脏的保护作用 |
| 第一节 缺氧和NaCN 中毒对大鼠心脏功能的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 小结 |
| 第二节 人参皂苷等干预措施对缺氧和NaCN 中毒对大鼠心脏功能的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 第二部分 NaCN 对SD 乳鼠原代心肌细胞的凋亡作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 第三部分 caspase 依赖/非依赖性途径在大鼠心脏损伤中的作用研究. |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 缺氧对心功能的影响 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 线粒体与细胞凋亡 |
| 参考文献 |
| 博士在读期间发表的论文和课题基金资助 |
| 英文论着 |
（6）牛磺酸对心肌细胞的保护作用研究现状（论文提纲范文）
| 1 保护缺血缺氧心肌 |
| 2 调节心肌细胞钙稳态 |
| 3 减少心肌细胞凋亡 |
| 4 抗心力衰竭 |
| 5 结语 |
（7）章鱼下脚料中牛磺酸的提取及其生理功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语 |
| 1 前言 |
| 1.1 牛磺酸简介 |
| 1.2 牛磺酸的分布 |
| 1.3 牛磺酸的体内代谢 |
| 1.4 牛磺酸的生理功能 |
| 1.4.1 促进营养物质的代谢 |
| 1.4.2 抗氧化、抗衰老作用 |
| 1.4.3 对脑发育的影响及益智、强化记忆作用 |
| 1.4.4 对心血管疾病的作用 |
| 1.4.5 其他生理功能 |
| 1.5 牛磺酸的生产及其在食品、药品中的应用 |
| 1.5.1 牛磺酸的生产现状 |
| 1.5.2 在食品领域的应用 |
| 1.5.3 在医药领域的应用 |
| 1.6 天然产物中牛磺酸提取研究进展 |
| 1.7 本课题的研究意义、内容及研究前景 |
| 1.7.1 课题的研究意义 |
| 1.7.2 课题的研究内容 |
| 1.7.3 课题的研究前景 |
| 2 章鱼下脚料中牛磺酸提取工艺的研究 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 牛磺酸的提取 |
| 2.2.2 牛磺酸的分离纯化 |
| 2.2.3 牛磺酸的结晶 |
| 2.2.4 分析方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 章鱼下脚料成分分析结果 |
| 2.3.2 牛磺酸标准曲线的绘制 |
| 2.3.3 牛磺酸提取工艺的确定 |
| 2.3.3.1 不同因素对提取率的影响 |
| 2.3.3.2 牛磺酸提取的正交实验结果 |
| 2.3.4 提取液中蛋白质去除条件的选择 |
| 2.3.5 牛磺酸过柱条件的优化 |
| 2.3.5.1 不同因素对离子交换树脂吸附效果的影响 |
| 2.3.5.2 牛磺酸上柱吸附条件的优选 |
| 2.3.5.3 牛磺酸洗脱条件的探讨 |
| 2.3.6 产品纯化结晶条件的选择 |
| 2.3.7 产品的纯度鉴定 |
| 2.4 结论 |
| 3 牛磺酸的抗力竭性疲劳研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 原料 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 力竭小鼠模型的建立 |
| 3.2.2 牛磺酸的抗小鼠力竭性疲劳的研究 |
| 3.2.3 血浆超氧化物歧化酶（SOD）活力的检测 |
| 3.2.4 小鼠肝组织 MDA 含量的检测 |
| 3.2.5 实验数据处理 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 抗力竭性疲劳效果 |
| 3.3.2 小鼠力竭运动后血浆 SOD 活性的变化 |
| 3.3.3 小鼠力竭运动后肝脏 MDA 浓度 |
| 3.4 牛磺酸抗力竭性疲劳效果及机理探讨 |
| 3.5 结论 |
| 4 牛磺酸对心肌细胞缺氧时凋亡的影响 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 原料 |
| 4.1.2 试剂 |
| 4.1.3 仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 乳鼠心肌细胞培养 |
| 4.2.2 体外培养心肌细胞缺氧模型的建立 |
| 4.2.3 牛磺酸对缺氧心肌细胞生长状态的影响 |
| 4.2.4 心肌细胞缺氧培养后 SOD 活性的测定 |
| 4.2.5 心肌缺氧培养后培养基中 MDA 浓度的检测 |
| 4.2.6 Hoechst/PI 双荧光染色检测心肌细胞凋亡 |
| 4.2.7 数据处理 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 乳鼠心肌细胞培养方法的确立 |
| 4.3.2 体外心肌细胞缺氧培养后 SOD 活性检测 |
| 4.3.3 体外心肌细胞缺氧培养后 MDA 浓度检测 |
| 4.3.4 心肌细胞缺氧培养24 小时后凋亡检测结果 |
| 4.4 牛磺酸对心肌细胞缺氧培养时凋亡的影响及讨论 |
| 4.5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附图 |
（8）模拟缺血预处理对原代培养乳鼠窦房结细胞Cx及ICl,swell表达的影响（论文提纲范文）
| 英文缩写词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 模拟缺血预处理对原代培养乳鼠窦房结细胞Cx 及I_(Cl,swell) 表达的影响 |
| 前言 |
| 第一部分 模拟缺血预处理对原代培养乳鼠窦房结细胞的保护作用及药物干预研究 |
| 前言 |
| 第一阶段模拟缺血预处理对原代培养乳鼠窦房结细胞细胞保护作用研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二阶段原代培养乳鼠窦房结细胞模拟缺血预处理时的药物干预研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 模拟缺血预处理对原代培养乳鼠窦房结细胞Cx 表达的影响及药物干预研究 |
| 前言 |
| 第一阶段原代培养乳鼠窦房结细胞Cx 的表达 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二阶段模拟缺血预处理对乳鼠窦房结细胞Cx 表达的影响及药物干预 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 图片 |
| 第三部分 原代培养乳鼠窦房结细胞I_(Cl,swell)的特点及模拟缺血预处理对其产生的影响 |
| 前言 |
| 第一阶段 原代培养乳鼠窦房结细胞I_(Cl,swell)的特点 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二阶段 模拟缺血预处理对原代培养乳鼠窦房结细胞I_(Cl,swell)的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 文献综述一 心脏缝隙连接与心肌缺血预处理的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 心脏肿胀激活氯通道的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
（9）丹酚酸B/三七总皂苷配伍对心肌梗死大鼠的影响及抑制心肌细胞凋亡的分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文词汇缩写表 |
| 前言 |
| 综述1 心肌梗死后心肌细胞凋亡及其调控机制 |
| 综述2 中药抑制心肌梗死/缺血后心肌细胞凋亡的研究概况 |
| 研究内容一 Sal B/PNS配伍对心肌梗死大鼠心脏功能的影响 |
| 实验1 Sal B/PNS配伍对心肌梗死大鼠心肌梗死范围的影响 |
| 实验2 Sal B/PNS配伍对心肌梗死大鼠血流动力学的影响 |
| 实验3 Sal B/PNS配伍对心肌梗死大鼠左室结构和功能的影响 |
| 研究内容二 Sal B/PNS配伍对心肌梗死大鼠心脏基因表达谱的影响 |
| 研究内容三 Sal B/PNS配伍抑制心肌梗死后心肌细胞凋亡的作用及分子机制研究 |
| 实验1 Sal B/PNS配伍对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响 |
| 实验2 Sal B/PNS配伍对心肌梗死后心肌细胞凋亡调控通路的影响 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附录 |
（10）活血益气中药对血管紧张素Ⅱ诱导培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 目录 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 心肌细胞凋亡的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医对细胞凋亡的研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 血管紧张素Ⅱ对培养乳鼠心肌细胞凋亡的诱导作用 |
| 实验二 活血中药对血管紧张素II 诱导培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响 |
| 实验三 益气中药对血管紧张素II 诱导培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附图1 |
| 附图2 |
四、牛磺酸对培养乳鼠心肌细胞缺氧坏死的保护作用（论文参考文献）
- [1]复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠的影响及抗内质网应激作用研究[D]. 吴昱杰. 北京中医药大学, 2021(08)
- [2]牛磺酸对低温环境下肉鸡心肌抗氧化作用影响的研究[D]. 李丽杰. 沈阳农业大学, 2020(04)
- [3]缺氧诱导肉鸡心肌细胞凋亡中Calpains的作用及牛磺酸调控机理的研究[D]. 王悦. 沈阳农业大学, 2018(04)
- [4]牛磺酸对心肌保护作用的研究进展[J]. 陈严,吴柱国. 广东医学院学报, 2010(05)
- [5]NaCN中毒对缺氧大鼠心脏损伤作用及干预措施研究[D]. 唐禾. 第三军医大学, 2008(05)
- [6]牛磺酸对心肌细胞的保护作用研究现状[J]. 张晓丹,渠永清,刘琳. 上海医药, 2008(07)
- [7]章鱼下脚料中牛磺酸的提取及其生理功能研究[D]. 唐武. 汕头大学, 2008(08)
- [8]模拟缺血预处理对原代培养乳鼠窦房结细胞Cx及ICl,swell表达的影响[D]. 黄骥. 第三军医大学, 2005(11)
- [9]丹酚酸B/三七总皂苷配伍对心肌梗死大鼠的影响及抑制心肌细胞凋亡的分子机制研究[D]. 张萌. 天津中医学院, 2005(07)
- [10]活血益气中药对血管紧张素Ⅱ诱导培养乳鼠心肌细胞凋亡的影响[D]. 郭明. 北京中医药大学, 2005(04)