一、快速胶体染料试纸条法检测弓形虫病IgG抗体的研究（论文文献综述）
薛杨继[1]（2021）在《刚地弓形虫LAMP-LFD检测方法的建立、初步应用及抗弓形虫SAG1纳米抗体的制备、分析》文中研究指明刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种专性细胞内寄生原虫,可导致人畜共患病弓形虫病,又称弓体病。弓形虫病呈世界性分布,据报道全球约三分之一的人口血清弓形虫抗体阳性。一项分析显示,我国普通人群弓形虫抗体阳性率为8.20%。普通人感染弓形虫多为自限性,少部分出现亚临床症状,此后长期呈隐匿性感染状态。但免疫抑制患者如肿瘤、艾滋等病人可导致不良预后。孕妇感染后可经胎盘传给婴儿导致先天性弓形虫病,严重者可导致流产、死胎。现我国孕妇优生优育产前TORCH五项检测中已包含弓形虫抗体检测。但弓形虫抗体检测无法准确的判断现状感染情况,为疾病的诊断与干预治疗带来不便。因此,开发具有诊断价值的弓形虫循环DNA和循环抗原（Circulating antigen,CAg）的检测方法显得尤为重要。本研究分别从弓形虫的循环DNA分子检测和循环抗原的免疫检测两部分进行探究。弓形虫的分子检测,主要以B1、529-RE（Repeat element）等多拷贝基因为靶点。其中529-RE在弓形虫基因组中有200-300拷贝数而被认为是最优的检测靶点。新型的环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）可在1小时内将数个拷贝扩增至109,而被认为是一种可替代PCR扩增技术的高效分子扩增检测技术。本研究采用环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）和侧流试纸条（Lateral-flow-dipstick）结合,设计成为LAMP-LFD一体化核酸扩增检测装置。LAMP-LFD装置将常规LAMP扩增产物与核酸探针杂交,使分子产物检测转化为胶体金免疫检测,同时具有良好的密闭性而有效避免气溶胶污染,探索一种更为简单、高效、特异的弓形虫分子检测方法。弓形虫的抗原检测,主要以免疫学方法筛选制备特异性抗体检测膜表面抗原等弓形虫中丰都较高的靶标。弓形虫膜表面抗原1（Surface antigen 1,SAG1）在弓形虫速殖子表面高表达,被认为是最有价值的检测靶标之一。本研究中,采用骆驼科动物血清中天然存在的单重链抗体（Heavy chain antibodies,HCAb）的重链可变区,即纳米抗体（Nanobody,Nb）,结合噬菌体展示技术,筛选并制备抗弓形虫SAG1纳米抗体,为弓形虫循环抗原检测方法的建立奠定基础。目的1.建立弓形虫LAMP-LFD分子检测方法,采用LAMP-LFD方法对浙江省五座城市流浪猫犬血液样本中弓形虫进行检测,统计浙江省五市流浪猫犬中弓形虫阳性率。2.原核表达弓形虫SAG1抗原,免疫骆驼,构建弓形虫SAG1纳米抗体文库,淘选获得高亲和力的弓形虫SAG1纳米抗体,并表达鉴定。方法1.结合LAMP和LFD方法,优化反应体系,设计LAMP-LFD分子检测装置,建立弓形虫LAMP-LFD分子检测方法,鉴定LAMP-LFD方法的特异性、灵敏度。2.利用建立的LAMP-LFD方法对浙江省五座城市流浪猫犬的318份血液样本中弓形虫循环DNA进行检测,统计分析浙江省流浪猫犬中弓形虫阳性率。3.构建pET-28a-Sag1载体,原核表达弓形虫SAG1抗原,纯化、复性、鉴定后免疫骆驼,利用巢式PCR技术扩增骆驼淋巴细胞中VHH序列,构建抗弓形虫SAG1纳米抗体文库。4.利用噬菌体展示技术,淘选抗弓形虫SAG1纳米抗体,并进行原核表达纯化,免疫杂交分析、鉴定。结果1.成功建立了LAMP-LFD方法检测弓形虫529-RE,通过LFD试纸条读取LAMP反应结果,可在1 h内最低检出1 fg弓形虫全基因组中的529-RE,且与猪隐孢子虫、利什曼原虫、间日疟原虫、溶组织内阿米巴、伊氏锥虫等寄生虫无交叉反应。建立的LAMP-LFD方法检测弓形虫529-RE序列的灵敏度是PCR是PCR方法的100倍。LAMP-LFD检测浙江省五座城市318例流浪猫犬血液样本中弓形虫,其中流浪猫血液样本105份,流浪犬血液样本213份,分别检出率为4.76%（5/105）、4.69%（10/213）。2.成功原核表达了弓形虫SAG1蛋白,并免疫骆驼,制备了3.2×108菌库库容的抗弓形虫SAG1纳米抗体文库。通过噬菌体展示技术,筛选得到8个阳性的Anti-SAG1-Nbs,Western Blot显示均能与重组的弓形虫SAG1抗原反应。其中一株Anti-SAG1-Nb-5能同时与重组的弓形虫r SAG1抗原、天然弓形虫抗原反应,测定其与重组r SAG1抗原之间的亲和常数为1.66×10-9 mol/L。结论1.成功构建了弓形虫循环DNA的LAMP-LFD的分子诊断方法,具有良好的特异性和较高的灵敏度。该检测装置具备良好的气密性和便携性,适用于弓形虫的简便、高效的分子检测。2.利用LAMP-LFD方法对浙江省五市流浪猫犬血液中弓形虫进行检测,弓形虫检出率高于常规PCR方法。3.成功制备了弓形虫SAG1纳米抗体文库,并筛选、表达出具有高亲和力的纳米抗体,为弓形虫的抗原检测方法的建立奠定了基础。
朱志伟[2]（2021）在《基于LAMP和RAA-LFD检测弓形虫方法的建立及应用》文中研究说明目的:了解芜湖地区新生儿和孕妇的弓形虫感染情况和特点。并基于环介导等温扩增技术（Loop mediated isothermal amplification,LAMP）和重组酶介导的等温扩增结合横向流动试纸条技术（Recombinase-Aid Amplification-Lateral flow dipstick,RAA-LFD）建立可快速检测弓形虫的方法,验证建立的LAMP和RAA-LFD方法的敏感性和特异性,旨在为临床弓形虫病的快速诊断提供一定的实验依据。方法:对芜湖地区新生儿和孕妇采用电化学发光法进行弓形虫感染的血清学调查。进一步根据弓形虫529 bp基因重复序列,分别设计并筛选出最佳LAMP引物和RAA-LFD引物和探针;优化反应体系和反应条件;以弓形虫529 bp基因阳性重组质粒标准品为模板梯度稀释后进行敏感性检测;以人血液、间日疟原虫、人蛔虫、旋毛虫、日本血吸虫、双线绦虫、猪带绦虫、大片吸虫和结肠内阿米巴原虫基因组DNA为模板进行特异性检测;最后用建立的LAMP和RAA-LFD方法进一步检测临床血液样本,比较其与电化学发光法（ECL）、荧光定量PCR（qPCR）法的检出率和一致性。结果:（1）芜湖地区新生儿弓形虫IgM抗体阳性率为0.06%（2/3371）,弓形虫IgG抗体阳性率为13.02%（439/3371）,不同性别新生儿TOX-IgG阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）;其中早产儿与健康对照者血清TOX-IgG阳性率比较差异有统计学意义（P<0.05）。孕妇弓形虫IgM抗体阳性率为0.14%（2/1443）,弓形虫IgG抗体阳性率为5.96%（86/1443）,不同年龄组中孕妇TOX-IgG阳性率差异具有统计学意义（P<0.05）。（2）针对弓形虫529 bp基因的LAMP检测方法,在最佳反应温度67℃条件下,30min内即可检测到弓形虫,建立的弓形虫质粒检测限为1.0×10-5ng/μL;并且与人血液、间日疟原虫、人蛔虫、旋毛虫、日本血吸虫、双线绦虫、猪带绦虫、大片吸虫和结肠内阿米巴原虫无交叉反应。（3）针对弓形虫529 bp基因建立的RAA-LFD方法,筛选出的最佳引物和探针组合在引物用量为240pmol/L、在39℃条件下、反应扩增时间30min时效果最佳,建立的弓形虫质粒检测限为1.0×10-5ng/μL;并且与人血液、间日疟原虫、人蛔虫、旋毛虫、日本血吸虫、双线绦虫、猪带绦虫、大片吸虫和结肠内阿米巴原虫无交叉反应。（4）ECL（IgM）、qPCR、LAMP和RAA-LFD四种方法检测临床样本的阳性率分别为1.12%、1.50%、1.50%、1.50%,qPCR、LAMP和RAA-LFD检出率一致;比较四种检测方法的一致性,发现ECL与qPCR、LAMP和RAA-LFD四种方法检测结果样本均阴性的符合率为85.77%（229/267）。结论:本次调查发现芜湖地区新生儿和孕妇存在一定的弓形虫感染,且早产儿与弓形虫感染有关;本研究建立的检测弓形虫LAMP和RAA-LFD方法简便、快速、敏感、特异,且与ECL、qPCR方法检测结果符合率较高,适合用于临床血液样本弓形虫的快速检测。
宋光明[3]（2020）在《磁性纳米颗粒探针-暗场显微镜法检测弓形虫、日本血吸虫卵的研究》文中进行了进一步梳理弓形虫（Toxoplasma gondii,Tgondii）作为一种常见的人畜共患寄生虫,能感染所有温血动物。孕妇妊娠期感染,会对胎儿造成严重损害,如胎儿畸形、流产或死胎,免疫力低下的病人感染后会出现淋巴结病或眼弓形虫病。日本血吸虫（Schistosoma japonicum,S.japonicum）是我国最着名的人畜共患寄生虫,可以感染所有哺乳动物,损害免疫系统、神经系统、消化系统,最终造成机体营养流失过多而死亡。自新中国成立后至今,日本血吸虫病患者达到1200余万之多,严重威胁到我国人民的公共卫生安全以及每年给我国畜牧业造成重大经济损失。目前,弓形虫、日本血吸虫检测方法主要分为病原学检测、免疫学检测、分子生物学检测。这些传统的检测方法,都存在诸多缺陷,如:灵敏度低,检测流程繁琐,费时费力,需要昂贵的实验仪器,无法满足基层工作者在现场快速检测。为此,本研究尝试使用磁性纳米颗粒探针-暗场显微镜法对弓形虫和日本血吸虫卵进行检测,实现检测流程简单快速,高灵敏,低要求。本研究首先将表面修饰protein A的磁性纳米颗粒与目标寄生虫的抗体进行孵育,制备成探针。然后将探针与样本溶液在室温下混合振荡30 min,再通过磁力架拉取探针与寄生虫形成的复合物,洗涤重悬后,在暗场显微镜下进行点样观察。最后通过灵敏度实验确定该方法的检测下限,通过动物实验确定该方法在实际临床检测上是否可行。实验结果表明,探针牢牢结合在虫体表面,在暗场下衍射出金黄色亮光,使得虫体轮廓肉眼清晰可见,弓形虫呈现出金黄色月牙状,日本血吸虫卵呈现出金黄色椭圆形。弓形虫检测限可达到10000个/mL,与PCR检测弓形虫的检测限相同。日本血吸虫卵检测限可达到1000个/mL。用该方法在阳性动物样本上均成功检测出目标病原体。总之,我们使用的磁性纳米颗粒探针-暗场显微镜法对弓形虫和日本血吸虫卵检测效果良好,且简单快速、灵敏度高、特异性强,适合用于基层检测。
寇金华,杨正涛,刘维建,高珺珊,李建华,杨举,张西臣,宫鹏涛[4]（2018）在《猪弓形虫感染免疫胶体金试纸条的制备与初步应用》文中提出制备1种检测猪弓形虫血清循环抗原的免疫胶体金试纸条。利用柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金溶液,标记抗弓形虫表面抗原SAG3（surface antigen 3,SAG3）单克隆抗体（Anti-A-SAG3-7）,用另1株抗弓形虫表面抗原SAG3单克隆抗体（Anti-A-SAG3-23）与羊抗小鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜（NC膜）上的检测线和质控线,制备并优化免疫胶体金试纸条检测条件。胶体金溶液的最适pH值为加入4μL 0.2 mol/L K2CO3时的pH值。Anti-A-SAG3-7的最适标记量为12μg。最佳NC膜为Millipore 135。T、C线抗体最佳包被质量浓度均为0.25g/L,T、C线抗体最佳包被体积均为8μL。试纸条的灵敏度达1∶160,与猪囊虫阳性血清无交叉反应。稳定性试验表明,该试纸条置于室温至少可保存1个月有效,置于4℃可保存3个月有效。对广东某地区、吉林某地区猪场的各94份猪待检血清进行检测,分别有17,10份为阳性血清,样品阳性率为18.08%,10.63%。本研究制备的胶体金试纸条具有操作简单,敏感特异等优点,适合临床基层单位对猪弓形虫病的早期诊断及流行病学调查。
邓汝芳[5]（2017）在《弓形虫病免疫学与分子生物学诊断方法研究进展》文中进行了进一步梳理弓形虫病是一种呈世界性分布且危害严重的人兽共患寄生虫病。免疫学与分子生物学诊断方法的逐步建立和完善为弓形虫病的有效诊断提供了重要依据。本文就染色试验、凝集试验、酶联免疫吸附试验、免疫胶体金技术、核酸探针、聚合酶链式反应、环介导等温扩增、基因芯片技术等研究和应用进行简要介绍。
黄甜[6]（2015）在《牛伊氏锥虫病胶体染料免疫层析诊断试纸条的研制及初步应用》文中研究表明伊氏锥虫病是由伊氏锥虫（Trypanosoma evnsi）寄生在家畜血液内而引起的一种原虫病,宿主范围很广,对宿主的危害很大,如有引起宿主死亡的急性经过,有致使宿主生育能力下降、身体条件普遍亏损、神经病变、免疫抑制、贫血和最终的死亡的慢性感染,这给畜牧业的发展带来严重影响。出现第一例人类感染此病的报道后,伊氏锥虫病不仅给畜牧业带来危害和经济损失,而且也给人类健康带来了隐患。目前,临床上常规诊断伊氏锥虫病的方法很多,如分血计离心技术（HCT）、卡片凝集试验（CATT）和ELISA等,但这些方法操作复杂、费时费力,还需要特殊的仪器设备,不适合用于现场诊断和大规模的临床检测。随着胶体金标记的发展,出现了免疫胶体金快速诊断试纸条的方法,弥补了这些缺陷。然而,胶体染料在免疫标记方面得到应用后,展现出了比胶体金更好的选择优势,如成本更低,更易获得,稳定性更好,保存期限更长等。本研究尝试应用胶体染料标记技术及免疫层析技术,建立了一种新的检测伊氏锥虫病抗原的胶体染料免疫层析试纸条法。用国产分散艳蓝2BLN染料制备胶体染料,在最适染料溶液环境下,来标记纯化过的抗伊氏锥虫OB6单抗,在NC膜的检测区（T线）和质控区（C线）分别包被抗伊氏锥虫的单抗TB7或OB6和羊抗鼠IgG二抗,经过多次试验测试及各方面条件优化,成功建立了伊氏锥虫病胶体染料免疫层析诊断试纸条的方法。经敏感性试验,该试纸条对伊氏锥虫VSG抗原的最低检出限1.05 μg/ml;与弓形虫抗原,巴贝斯虫抗原,衣原体抗原、大片吸虫ES抗原之间均无抗原交叉反应;用胶体染料试纸条、胶体金试纸条和夹心ELISA法对25份阳性血清和50份阴性血清进行检测,其准确率依次为88%、86.7%、96%,胶体染料试纸条与胶体金试纸条两者之间的符合率达98.5%,胶体染料试纸条与夹心ELISA法两者之间的符合率为91.7%。应用本研究研制的胶体染料试纸条,对来自广西百色和河池地区共344份牛血清进行初步检测,阳性率为11.63%,与胶体金试纸条和夹心ELISA的阳性符合率分别是90.70%和83.33%。由此表明建立的胶体染料试纸条法可靠、灵敏、特异,而且还简便、快速、稳定性很好、适用于大规模的临床检测。本方法的建立为牛伊氏锥虫病的诊断和防治提供了另一种低成本的、更稳定的、新的有效方法。
周洋[7]（2013）在《异尖线虫病免疫诊断方法的建立及Ⅲ期幼虫cDNA文库构建》文中认为异尖线虫病是一种因食用生的或未煮熟的含异尖线虫Ⅲ期幼虫的海鱼而引起的消化系统食源性寄生虫病。主要致病的虫种为简单异尖线虫（Anisakis simplex）和派氏异尖线虫（Anisakis pegreffii）。该病呈世界性分布,主要引起胃异尖线虫病、肠异尖线虫病和胃肠外异尖线虫病。我国对黄海、渤海、北海等海域及沿海城市的海鱼调查中均发现了异尖线虫。目前确诊异尖线虫病仍以纤维内窥镜检查发现虫体为依据,而对临床上恶心、呕吐、上腹部疼痛等不典型的异尖线虫病症状的确诊存在困难。虽然免疫学、分子生物学技术已应用于异尖线虫病的辅助诊断及鉴定,但仍缺乏有效的诊断试剂和快速诊断方法。因此,本研究欲以异尖线虫Ⅲ期幼虫为材料,通过提取异尖线虫Ⅲ期幼虫粗抗原建立ELISA法和Western Blot,以及制作异尖线虫Ⅲ期幼虫免疫层析试纸条,并构建异尖线虫Ⅲ期幼虫cDNA文库,以期获得高效、快速的免疫诊断方法及获得有价值的诊断抗原。本研究以东海海域带鱼为研究材料,人工剖检带鱼,在带鱼体腔、肠系膜、肝脏等处寻找异尖线虫Ⅲ期幼虫,并进行形态学观察及分子鉴定。在此之后对异尖线虫Ⅲ期幼虫,以匀浆冻融及超声法制备Ⅲ期幼虫可溶性抗原（soluble antigens of third-stage larvae of anisakis, SAA）,进行ELISA和Western Blot用于检测与其他寄生虫病人血清是否存在交叉反应。同时建立一种检测异尖线虫病的免疫层析试纸条,并对其进行测试。最后构建异尖线虫Ⅲ期幼虫cDNA文库,并对此文库进行评价。结果,共解剖购自东海海域的带鱼132条,收集异尖线虫幼虫1695条,平均每条带鱼体内都有10条以上的异尖线虫Ⅲ期幼虫,感染率为100%。虫体平均长度20-30mmm,头部有特征性的乳突、钻齿尾部有小棘,身体呈波浪形蠕动。经BLAST比对,与已提交到Genbank的派氏异尖线虫（JQ900763.1）的序列相似性达99%。以制备的异尖线虫Ⅲ期幼虫可溶性抗原（SAA）进行ELISA试验,检测异尖线虫感染鼠血清,敏感性100%,特异性100%。与肝吸虫病人和囊虫病人血清各有10%的交叉反应,与血吸虫病、旋毛虫病、蛔虫病、钩虫病、弓形虫病、舌形虫病等病人血清未见交叉反应。以SDS-PAGE技术对SAA抗原作进一步分析,获得两条分子量为38、55kDa的主蛋白带和分子量界于10～70kDa之间的10条次带。经Western blot分析,能被感染大鼠血清识别的条带中,Mr170、130、73、38、22、15kDa等条带反应较强。与血吸虫病、肝吸虫病、囊虫病、旋毛虫病、蛔虫病、钩虫病、弓形虫病、舌形虫病病人及正常人血清无交叉反应条带,而与肺吸虫、鞭虫病人血清分别在Mr70kDa和Mr93kDa处有交叉反应条带出现。以制备的异尖线虫Ⅲ期幼虫可溶性抗原（SAA）点膜,制备胶体金免疫层析试纸条。检测异尖线虫免疫兔血清3份,感染大鼠血清10份,均显示阳性,敏感性为100%,特异性为100%。共检测其他寄生虫病人血清161份,其中18份肝吸虫病人血清中有1份显示为阳性,同肝吸虫病人血清的交叉反应率5.6%（1/18）,与其它寄生虫病人血清未见交叉反应。采用SMART技术,即利用毫微克的RNA或mRNA获得高质量和全长的cDNA文库,可以保存全部mRNA5’末端的序列,且λ TriplEx2载体具有高低定量,重组蓝白斑检测,调节克隆插入片段的表达等优点。成功构建异尖线虫Ⅲ期幼虫的cDNA文库。噬菌体文库滴度为2.92×106pfu/ml。经蓝白斑筛选,重组率为95.7%。随机挑选29个噬菌斑进行PCR,看平均片段长度。结果显示插入率为97.9%,最大片段长度为2000bp,最小片段长度为400bp,平均片段长度为850bp。综上所述,本研究以异尖线虫Ⅲ期幼虫为研究对象,对其进行分子鉴定后,确认为简单异尖线虫姐妹种---派氏异尖线虫。建立的ELISA方法、Western Blot方法对于异尖线虫病有较好的免疫诊断效果。成功制作了一种检测异尖线虫病的胶体金免疫层析试纸条,此试纸条敏感性高,特异性好,交叉反应少,且制作简便,可做为异尖线虫病的快速检测试纸条。最后成功构建了异尖线虫Ⅲ期幼虫的全长cDNA文库,为后续进行基因功能研究,筛选免疫诊断重组抗原奠定了坚实的基础。
庄金秋,梅建国,沈志强[8]（2012）在《胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展》文中进行了进一步梳理胶体金免疫层析技术是将胶体金标记技术、免疫检测技术和蛋白层析技术相结合的以硝酸纤维膜为载体的快速固相膜免疫分析技术。该技术已成为当前兽医临床诊断动物疫病最简便、快速、敏感特异的免疫学检测技术之一,有巨大的发展潜力和广阔的应用前景,已成为多领域研究与应用的热点。本文就胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展作一简要概述。
庄金秋,梅建国,沈志强[9]（2012）在《胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展》文中研究指明胶体金免疫层析技术是将胶体金标记技术、免疫检测技术和蛋白层析技术相结合的以硝酸纤维膜为载体的快速固相膜免疫分析技术。该技术已成为当前兽医临床诊断动物疫病最简便、快速、敏感特异的免疫学检测技术之一,有巨大的发展潜力和广阔的应用前景,已成为多领域研究与应用的热点。本文就胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展作一简要概述。
郭朝刚[10]（2011）在《弓形虫病免疫诊断技术研究进展》文中研究表明弓形虫病的实验室诊断主要有病原学检查、免疫学检测和分子生物学方法,弓形虫病原学检查比较困难,阳性率不高。分子生物学方法特异性强,敏感性高,但技术难度大,
二、快速胶体染料试纸条法检测弓形虫病IgG抗体的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、快速胶体染料试纸条法检测弓形虫病IgG抗体的研究（论文提纲范文）
（1）刚地弓形虫LAMP-LFD检测方法的建立、初步应用及抗弓形虫SAG1纳米抗体的制备、分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分:刚地弓形虫LAMP-LFD检测方法的建立、初步应用 |
| 材料与方法 |
| 结果与分析 |
| 讨论与建议 |
| 第二部分:抗弓形虫SAG1 纳米抗体的制备、分析 |
| 材料与方法 |
| 结果与分析 |
| 讨论与建议 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述及参考文献 弓形虫病分子诊断方法的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附件1 攻读学位期间发表论文目录 |
| 附件2 攻读学位期间参与的项目及学术交流 |
（2）基于LAMP和RAA-LFD检测弓形虫方法的建立及应用（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 芜湖地区新生儿和孕妇弓形虫感染的血清学调查 |
| 1 研究目的 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 调查对象 |
| 2.2 调查方法 |
| 2.3 结果判定 |
| 2.4 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 新生儿血清弓形虫抗体检测结果 |
| 3.2 孕妇血清弓形虫抗体检测结果 |
| 4. 讨论 |
| 第二部分 弓形虫LAMP检测方法的建立 |
| 1 研究目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.2 标本来源 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 弓形虫529 bp基因重组阳性质粒克隆测序结果 |
| 3.2 LAMP反应引物筛选结果 |
| 3.3 LAMP反应温度筛选结果 |
| 3.4 LAMP反应敏感性检测 |
| 3.5 LAMP反应特异性检测 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 弓形虫RAA-LFD检测方法的建立 |
| 1 研究目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.2 标本来源 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 RAA反应引物筛选结果 |
| 3.2 RAA反应探针筛选结果 |
| 3.3 RAA-LFD反应引物用量优化结果 |
| 3.4 RAA-LFD反应扩增时间优化结果 |
| 3.5 RAA-LFD反应敏感性检测 |
| 3.6 RAA-LFD反应特异性检测 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 基于LAMP和RAA-LFD检测方法在弓形虫临床样本检测中的应用 |
| 1 研究目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器与试剂 |
| 2.2 标本采集 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 临床样本收集结果 |
| 3.2 ECL方法的临床样本检测结果 |
| 3.3 qPCR方法的临床样本检测结果 |
| 3.4 LAMP方法的临床样本检测结果 |
| 3.5 RAA-LFD方法的临床样本检测结果 |
| 3.6 四种方法检测结果的比较 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 环介导等温扩增技术寄生虫检测中的应用进展 |
| 参考文献 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 |
| 致谢 |
（3）磁性纳米颗粒探针-暗场显微镜法检测弓形虫、日本血吸虫卵的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 弓形虫概述 |
| 2 日本血吸虫概述 |
| 3 弓形虫、日本血吸虫的检测方法的研究进展 |
| 4 磁性纳米材料在生物学医学领域的应用 |
| 5 暗场显微镜 |
| 6 论文研究内容及意义 |
| 第二部分 研究内容 |
| 第一章 弓形虫的体外培养 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞系与虫株 |
| 1.2 主要试剂和耗材 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 HFF细胞培养 |
| 2.2 弓形虫的体外培养 |
| 2.3 弓形虫PCR检测 |
| 2.4 SEM观察弓形虫 |
| 3 结果 |
| 3.1 弓形虫体外培养 |
| 3.2 PCR结果 |
| 3.4 弓形虫SEM结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 磁性纳米颗粒探针的制备及表征 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 弓形虫MNP探针制备 |
| 2.2 SDS-PAGE验证探针的抗体结合效率 |
| 2.3 探针SEM表征 |
| 2.4 暗场下观察探针是否团聚 |
| 3 结果 |
| 3.1 探针SDS-PAGE结果 |
| 3.2 探针SEM表征 |
| 3.3 探针暗场结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 MNP-暗场显微镜法检测弓形虫 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 MNP探针捕获弓形虫暗场下观察 |
| 2.2 SEM观察验证探针的特异性 |
| 2.3 MNP-暗场显微镜法的检测下限 |
| 2.4 小鼠血液样本的检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 MNP探针捕获弓形虫效果 |
| 3.2 SEM观察验证探针的特异性结果 |
| 3.3 MNP-暗场显微镜法检测下限 |
| 3.4 小鼠血液样本检测结果 |
| 4 讨论 |
| 第四章 MNP-暗场显微镜法检测日本血吸虫卵 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 虫株和实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 腹水纯化 |
| 2.2 日本血吸虫卵MNP探针制备 |
| 2.3 SDS-PAGE验证探针 |
| 2.4 暗场下观察探针是否团聚 |
| 2.5 探针捕获日本血吸虫卵暗场显微镜下观察 |
| 2.6 MNP-暗场显微镜法检测下限 |
| 2.7 粪便样品检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 腹水纯化SDS-PAGE鉴定结果 |
| 3.2 探针SDS-PAGE结果 |
| 3.3 探针暗场下结果 |
| 3.4 探针捕获日本血吸虫卵暗场下效果 |
| 3.5 MNP-暗场显微镜法检测日本血吸虫卵下限 |
| 3.6 粪便样本检测结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及发明专利目录 |
| 致谢 |
（4）猪弓形虫感染免疫胶体金试纸条的制备与初步应用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 血清、单克隆抗体及主要试剂 |
| 1.2 玻璃器皿的处理 |
| 1.3 胶体金溶液的制备及鉴定 |
| 1.3.1 胶体金溶液的制备 |
| 1.3.2 胶体金溶液的鉴定 |
| 1.4 金标抗体的制备及鉴定 |
| 1.4.1 最佳标记pH值的确定 |
| 1.4.2 最佳抗体标记量的确定 |
| 1.4.3 金标抗体的制备及纯化 |
| 1.4.4 金标抗体的鉴定 |
| 1.5 胶体金试纸条的制备 |
| 1.5.1 金标垫的制备 |
| 1.5.2 样品垫的处理 |
| 1.5.3 测试条的组装及结果判定 |
| 1.6 试纸条最佳检测条件的确定 |
| 1.6.1 金标抗体稀释度的确定 |
| 1.6.2 NC膜的选择 |
| 1.6.3 T线包被条件的确定 |
| 1.6.4 C线包被条件的确定 |
| 1.7 试纸条的性能测试 |
| 1.7.1 敏感性试验 |
| 1.7.2 特异性试验 |
| 1.7.3 重复性试验 |
| 1.7.4 稳定性试验 |
| 1.8 临床样品检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 胶体金溶液及金标抗体的鉴定 |
| 2.2 胶体金溶液最佳pH值的确定 |
| 2.3 最佳抗体标记量的确定 |
| 2.4 金标抗体稀释度的确定 |
| 2.5 NC膜的选择 |
| 2.6 T线包被条件的确定 |
| 2.7 C线包被条件的确定 |
| 2.8 试纸条性能试验 |
| 2.8.1 敏感性试验 |
| 2.8.2 特异性试验 |
| 2.8.3 重复性试验 |
| 2.8.4 稳定性试验 |
| 2.9 待检样品检测结果 |
| 3 讨论 |
（5）弓形虫病免疫学与分子生物学诊断方法研究进展（论文提纲范文）
| 1 免疫学诊断方法 |
| 1.1 染色试验 |
| 1.2 凝集试验 |
| 1.3 酶联免疫吸附试验 |
| 1.4 免疫胶体金技术 |
| 2 分子生物学诊断方法 |
| 2.1 核酸分子杂交技术 |
| 2.2 聚合酶链式反应 |
| 2.3 环介导等温扩增技术 |
| 2.4 基因芯片 |
| 3 结语 |
（6）牛伊氏锥虫病胶体染料免疫层析诊断试纸条的研制及初步应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 综述 |
| 1.1 伊氏锥虫病 |
| 1.1.1 病原学 |
| 1.1.2 生活史 |
| 1.1.3 流行病学 |
| 1.1.4 致病作用 |
| 1.1.5 临床症状 |
| 1.1.6 伊氏锥虫病的诊断 |
| 1.2 胶体染料免疫层析技术研究进展 |
| 1.2.1 胶体染料 |
| 1.2.2 胶体染料试纸条层析原理 |
| 1.2.3 胶体染料免疫诊断技术的优劣 |
| 1.2.4 胶体染料免疫技术的临床应用 |
| 1.2.5 胶体染料免疫技术在诊断伊氏锥虫病上的应用 |
| 1.3 本研究的目的及意义 |
| 第二章 伊氏锥虫VSG抗原及抗伊氏锥虫单克隆抗体的制备 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 伊氏锥虫虫株 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 试剂配制方法 |
| 2.1.5 主要仪器设备 |
| 2.2 试验方法步骤 |
| 2.2.1 伊氏锥虫VSG抗原的制备 |
| 2.2.2 VSG抗原的SDS-PAGE电泳分析 |
| 2.2.3 VSG抗原的免疫胶体金试纸条鉴定 |
| 2.2.4 抗伊氏锥虫单抗的制备 |
| 2.2.5 单抗的质量鉴定 |
| 2.3 试验结果 |
| 2.3.1 VSG抗原及纯化后的单抗OB6、TB7的浓度 |
| 2.3.2 VSG抗原的鉴定 |
| 2.3.3 单抗亚型鉴定 |
| 2.3.4 单抗纯度鉴定 |
| 2.3.5 单抗效价测定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 伊氏锥虫VSG抗原的制备 |
| 2.4.2 细胞培养 |
| 2.4.3 单抗的纯化 |
| 第三章 伊氏锥虫病胶体染料免疫层析诊断试纸条的研制 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 试剂配制 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 试验方法步骤 |
| 3.2.1 玻璃器皿的处理 |
| 3.2.2 胶体染料的制备 |
| 3.2.3 胶体染料的光密度测定 |
| 3.2.4 胶体染料稳定性试验 |
| 3.2.5 胶体染料标记抗体的条件选择 |
| 3.2.6 胶体染料标记单抗的制备 |
| 3.2.7 染料标记单抗活性鉴定 |
| 3.2.8 胶体染料试纸条的制备 |
| 3.2.9 试纸条质量检测 |
| 3.2.10 试纸条检测效果的评价与初步应用 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.3.1 胶体染料的光密度测定 |
| 3.3.2 胶体染料稳定性试验 |
| 3.3.3 胶体染料标记抗体的条件优化 |
| 3.3.4 染料标记单抗活性的鉴定 |
| 3.3.5 胶体染料试纸条的制备 |
| 3.3.6 试纸条的质量检测 |
| 3.3.7 胶体染料试纸条与胶体金试纸条、夹心ELISA法三者准确率、阳性符合率的评估 |
| 3.3.8 胶体染料试纸条的初步应用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 胶体染料免疫层析诊断试纸条的研制 |
| 3.4.2 胶体染料的制备 |
| 3.4.3 胶体染料标记抗体 |
| 3.4.4 胶体染料标记抗体活性鉴定 |
| 3.4.5 试纸条材料的选择 |
| 3.4.6 标记用单抗和检测线单抗的选择 |
| 3.4.7 胶体染料检测液的稀释倍数和检测样品的用量确定 |
| 3.4.8 胶体染料试纸条的结构 |
| 3.4.9 胶体染料试纸条与胶体金试纸条、夹心ELISA法准确率的评估及原因分析 |
| 3.4.10 胶体染料免疫层析诊断试纸条的初步应用 |
| 3.4.11 胶体染料试纸条存在的缺陷 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（7）异尖线虫病免疫诊断方法的建立及Ⅲ期幼虫cDNA文库构建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 第一部分 异尖线虫Ⅲ期幼虫形态学观察及分子鉴定 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 异尖线虫Ⅲ期幼虫粗抗原制备、组分分析及诊断效果观察 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 异尖线虫病免疫层析检测试纸条的研制 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第四部分 异尖线虫Ⅲ期幼虫cDNA文库的构建及评价 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
（8）胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展（论文提纲范文）
| 1 胶体金免疫层析技术在动物细菌病诊断中的应用 |
| 2 胶体金免疫层析技术在动物病毒病诊断中的应用 |
| 2.1 犬猫病毒性疾病方面 |
| 2.2 家禽病毒性疾病方面 |
| 2.3 猪病毒性疾病方面 |
| 2.4 牛病毒性疾病方面 |
| 3 胶体金免疫层析技术在动物寄生虫病诊断中的应用 |
| 4 前景与展望 |
（10）弓形虫病免疫诊断技术研究进展（论文提纲范文）
| 1 抗体检测 |
| 1.1 染色试验 (DT) |
| 1.2 凝集试验 |
| 1.3 间接荧光抗体试验 (IFAT) |
| 1.4 酶联免疫吸附试验 (ELISA) |
| 1.5 免疫胶体金技术 |
| 2 循环抗原 (CAg) 的检测 |
| 3 展望 |
四、快速胶体染料试纸条法检测弓形虫病IgG抗体的研究（论文参考文献）
- [1]刚地弓形虫LAMP-LFD检测方法的建立、初步应用及抗弓形虫SAG1纳米抗体的制备、分析[D]. 薛杨继. 浙江省医学科学院, 2021(02)
- [2]基于LAMP和RAA-LFD检测弓形虫方法的建立及应用[D]. 朱志伟. 皖南医学院, 2021
- [3]磁性纳米颗粒探针-暗场显微镜法检测弓形虫、日本血吸虫卵的研究[D]. 宋光明. 扬州大学, 2020(04)
- [4]猪弓形虫感染免疫胶体金试纸条的制备与初步应用[J]. 寇金华,杨正涛,刘维建,高珺珊,李建华,杨举,张西臣,宫鹏涛. 中国兽医学报, 2018(01)
- [5]弓形虫病免疫学与分子生物学诊断方法研究进展[J]. 邓汝芳. 养殖与饲料, 2017(01)
- [6]牛伊氏锥虫病胶体染料免疫层析诊断试纸条的研制及初步应用[D]. 黄甜. 广西大学, 2015(01)
- [7]异尖线虫病免疫诊断方法的建立及Ⅲ期幼虫cDNA文库构建[D]. 周洋. 中国疾病预防控制中心, 2013(02)
- [8]胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展[J]. 庄金秋,梅建国,沈志强. 中国动物检疫, 2012(09)
- [9]胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展[A]. 庄金秋,梅建国,沈志强. 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集, 2012
- [10]弓形虫病免疫诊断技术研究进展[J]. 郭朝刚. 甘肃畜牧兽医, 2011(02)