一、哺乳动物卵巢中的细胞凋亡及其调节（论文文献综述）
李桂明[1]（2020）在《热应激影响蛋鸡等级前卵泡发育的机理研究》文中认为在热带和温带地区,环境温度经常超过30℃,家禽易遭受热应激造成巨大的经济损失,蛋鸡在产蛋期（约300天）受到热应激损失更大。尽管已证实热应激影响蛋鸡产蛋率,但热应激影响蛋鸡卵泡发育影响的机制尚未完全清楚。卵泡发育缓慢甚至闭锁,可能与引起细胞凋亡的通路相关,而激活Fas L/Fas和TNF-α信号通路均可引起各种组织的细胞凋亡;但蛋鸡遭受热应激时,是否会通过激活这两个系统诱导卵泡细胞凋亡从而降低产蛋率尚无报道。所以,研究Fas L/Fas和TNF-α系统在热应激影响蛋鸡卵泡发育中的作用机理,对缓解蛋鸡热应激提高蛋鸡生产性能具有重要理论意义。本研究首先建立蛋鸡热应激模型,在模型基础上检测分析了热应激5天后对蛋鸡卵泡发育、蛋鸡卵泡颗粒凋亡、Fas和TNF-α系统激活、诱导氧化损伤、应激相关激素分泌等方面的影响,并进行了解除热应激后蛋鸡生产性能与卵泡恢复情况的研究,为临床解除热应激的影响提供理论依据。主要试验结果如下:（1）蛋鸡热应激模型的建立。选用32周龄海兰褐蛋鸡,通过产蛋率、死亡率、促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、皮质酮（Cort）等指标确定热应激的模式、温度与时间。首先进行了热应激模式与温度的筛选确定在35-37℃温度下连续热应激,试验鸡各项指标符合模型建立的要求;随后在此条件下热应激7天（S1-S7）,检测和分析发现,S5天试验鸡的各项指标基本稳定;因此,确定热应激模型条件为:35-37℃连续热应激5天。（2）热应激对蛋鸡卵泡发育的影响。依据蛋鸡热应激模型结果,检测热应激对蛋鸡卵泡发育的影响。各级卵泡数量统计发现,热应激组大白卵泡（LWF）和小黄卵泡（SYF）数量与对照组差异不显着（P>0.05）,但大黄卵泡（LYF）和等级卵泡（Hie）数量显着减少（P<0.05）。从热应激第3天到恢复期第6天,应激组母鸡的产蛋率显着低于对照组（P<0.05）;从恢复期第7天开始产蛋率逐步恢复到对照组水平。结合本研究的分类标准推测:S3-5、R1-3、R4-6时间段产蛋率的显着下降是由于发生了等级卵泡、LYF、SYF的应激损伤。（3）热应激对蛋鸡卵泡颗粒凋亡的影响。细胞凋亡是引起卵泡发育受阻的重要作用机理之一,因此通过TUNEL、流式细胞术等方法检测蛋鸡卵泡颗粒凋亡情况,同时开展相关凋亡蛋白与基因检测。研究发现,热应激组蛋鸡SYF和LYF卵泡颗粒细胞的凋亡率显着高于对照组（P<0.05）;应激组SYF和LYF卵泡颗粒细胞Caspase-3蛋白水平显着升高（P<0.05）;应激组SYF和LYF卵泡颗粒细胞Bcl-2基因表达及Bcl-2/Bax比值显着低于对照组（P<0.05）;综上,说明热应激显着诱导了蛋鸡卵泡颗粒细胞的凋亡。（4）热应激导致蛋鸡卵泡颗粒细胞凋亡通路研究。依据网络药理学方法初步探索Hsps蛋白家族参与调节细胞凋亡的相关机理;检测蛋鸡卵泡颗粒细胞中凋亡相关系统Fas和TNF-α的蛋白水平变化,探究热应激导致蛋鸡卵泡颗粒细胞凋亡的机理。结果显示:CDK1等10个Hsps家族蛋白参与了蛋鸡细胞凋亡,但尚需进一步验证;热应激组蛋鸡SYF和LYF卵泡颗粒细胞中Fas L、TNF-α和TNFR1蛋白表达量显着升高（P<0.05）,SYF和LYF卵泡液中Fas L和TNF-α的浓度显着升高（P<0.05）,说明热应激激活了蛋鸡卵泡中的Fas和TNF-α系统。（5）热应激诱导氧化损伤的研究。热应激通常首先导致氧化应激,所以本研究进行了蛋鸡血清和卵泡中SOD、MDA等氧化指标的检测。结果显示,热应激组蛋鸡血液TAS水平较对照组有所降低,但差异不显着;热应激组血液、小黄和大黄卵泡中SOD水平较对照组均显着降低（P<0.05）;MDA水平在血液、小黄、大黄卵泡中均显着升高（P<0.05）;说明热应激导致了机体氧化应激。（6）热应激对应激相关激素分泌的影响。为分析热应激对应激相关激素的影响,检测了蛋鸡卵泡中雌二醇（E2）和孕酮（P4）激素含量,以及血清与卵泡中CRH和皮质酮含量。结果显示,热应激组蛋鸡SYF和LYF中E2的浓度均显着低于对照组（P<0.05）;LYF中P4浓度显着高于对照组（P<0.05）,但SYF中P4较对照组差异不显着（P>0.05）;热应激组LYF中的E2/P4比值显着低于对照组（P<0.05）,这与哺乳动物闭锁卵泡中的E2/P4比值显着下降一致。热应激组血清、小黄和大黄卵泡CRH较对照组均显着升高（P<0.05）;皮质酮水平也显着升高（P<0.05）。（7）解除热应激对蛋鸡生产性能与卵泡发育影响的研究。为分析解除热应激后蛋鸡生产性能与卵泡发育的恢复情况,检测了蛋鸡各级卵泡数量、蛋品质和皮质酮分泌量。结果显示,应激组LWF和SYF数量较对照组差异不显着,LYF与等级卵泡在R7天即恢复到对照组水平;蛋重和蛋壳强度在R5天基本恢复但不稳定,到R11天后恢复到对照组水平;皮质酮检测发现,R7天已恢复到正常水平但有波动,R12天时恢复到了正常水平;在R7和R12天对小黄卵泡进行切片HE染色,未发现S5天时出现的水肿和空泡变性。可见,解除热应激7天后卵泡发育与生产性能基本恢复。综上所述,热应激导致了蛋鸡血液和卵泡中CRH与皮质酮的升高,继而发生卵泡氧化应激,激活了Fas/Fas L和TNFα/TNFR1信号通路,降低了E2/P4比值导致卵泡颗粒细胞凋亡,从而导致卵泡发育受阻或闭锁,产蛋率降低。
曾毅仁[2]（2020）在《三（2-羧基乙基）膦盐酸盐处理对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育能力的影响研究》文中指出卵母细胞体外成熟（IVM）是决定体外胚胎发育的关键过程。体外高氧培养环境造成的氧化应激是影响卵母细胞体外成熟质量的重要因素。活性氧的增加会使脂质、蛋白质、DNA受到损伤,最终可能导致卵母细胞质量和后续胚胎发育能力降低。本实验探究了抗氧化剂三（2-羧基乙基）膦盐酸盐（TCEP-HCL）对猪卵母细胞体外成熟和受精胚胎体外发育能力的影响。我们在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加了三个浓度TCEP-HCL（50,100和200μM）进行处理。结果发现与未添加组相比,100μM TCEP-HCL处理显着增加了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）、受精卵分裂率（P<0.05）、囊胚形成率（P<0.05）、囊胚总细胞数（P<0.05）;200μM TCEP-HCL对卵母细胞的成熟以及后续胚胎的发育没有影响（P>0.05）。TCEP-HCL处理影响了卵母细胞的受精情况,和未处理组相比,100μM TCEP-HCL处理显着降低了猪卵母细胞的多精入卵率（P<0.05）,并显着提高了单精入卵率（P<0.05）。为了探究TCEP-HCL对猪卵母细胞体外受精和胚胎发育能力改善的潜在机制,我们检测了MⅡ期卵母细胞和体外受精囊胚中的抗氧化和细胞凋亡相关指标。结果发现,TCEP-HCL处理显着降低了卵母细胞内活性氧（ROS）水平（P<0.05）,100μM TCEP-HCL处理提高了卵母细胞内氧化应激相关基因SOD2的表达。同时,和其他实验组相比,100μM TCEP-HCL处理显着增加了卵母细胞内谷胱甘肽（GSH）的含量（P<0.05）;显着提高了卵母细胞中线粒体的含量（P<0.05）;显着降低了IVM后卵母细胞凋亡率（P<0.05）,显着增加细胞凋亡抑制基因BCL2的表达（P<0.05）。TCEP-HCL处理降低了囊胚细胞凋亡,特别是在100μM和200μM TCEP-HCL处理组中表现最为明显（P<0.05）。以上研究结果表明,适宜的TCEP-HCL处理降低了猪卵母细胞体外成熟过程中的氧化应激水平,提高了体外受精胚胎的质量和发育能力。
何翃闳[3]（2020）在《低氧浓度对牦牛卵母细胞和附植前胚胎发育的影响及其作用机制的研究》文中提出牦牛对于低氧高寒环境具有较强的适应性,但其体外卵母细胞成熟率和胚胎发育能力较为低下,这严重影响了其体外受精、体细胞克隆等繁殖技术的发展。体外培养系统的气相环境对卵母细胞和早期胚胎的发育起着至关的重要作用,而氧气是体外培养系统气相环境的重要组成部分。然而,目前在国内外尚未见关于低氧浓度对牦牛卵母细胞和附植前胚胎发育影响的报道。本研究旨在探讨不同氧浓度对牦牛卵母细胞成熟和体外受精胚胎发育能力的影响,以及其作用机制的研究,为进一步优化牦牛体外胚胎生产系统提供理论依据。本研究进行了以下试验并取得了一定成果:1.通过观察在不同氧气浓度组（20%、10%、5%和1%O2）成熟的卵丘-卵母细胞复合体（Cumulus-oocyte complexes,COCs）的扩张和第一极体的排出情况,统计不同氧气浓度组牦牛卵母细胞孤雌激活（parthenogenetic activation,PA）后胚胎的卵裂率和囊胚率判断卵母细胞的发育能力,采用实时荧光定量（Quantitative Real-Time PCR,q RT-PCR）和蛋白免疫印迹分析（Western blotting）检测不同氧气浓度下牦牛卵母细胞葡萄糖转运、发育和代谢相关基因和蛋白的表达。结果显示,当氧气浓度为5%时,COCs扩散最好,卵母细胞的成熟率显着高于其他组（p<0.05）,而孤雌激活胚胎的卵裂率显着高于20%O2浓度组和1%O2浓度组（P<0.05）,囊胚率显着高于其他组（P<0.05）;不同氧气浓度组间与卵母细胞发育、抗氧化和代谢能力相关基因及其蛋白的表达有显着差异。结果表明,牦牛卵母细胞体外成熟过程中,5%的氧气浓度可以促进牦牛卵母细胞的成熟,并可显着提高后续孤雌激活胚胎的发育能力。2.通过免疫组织化学法检测HIF-1α和VEGF蛋白在牦牛卵巢中的定位,并采用q RT-PCR、Western blotting、免疫荧光染色法和TUNEL试剂盒分别检测HIF-1α、VEGF、Bax和Bcl-2在不同氧气浓度组COCs（20%、10%、5%和1%O2）中的表达情况以及不同氧气浓度组COCs中的细胞凋亡率。结果显示,HIF-1α蛋白主要定位在卵巢的卵泡颗粒层、卵泡膜、透明带、放射冠和卵巢生殖上皮层中,而VEGF蛋白主要定位在卵巢的卵泡颗粒层和卵泡膜中,在COCs中,其表达主要位于卵母细胞中,在卵丘细胞中表达较弱;随着氧气浓度的降低,HIF-1α和VEGF的表达均呈现先升高后降低的趋势,在5%氧气浓度下达到最高,显着高于其他组（P?0.05）;在5%氧气浓度下促凋亡因子Bax的表达水平均显着低于其他组（P<0.05）,而抗凋亡因子Bcl-2的表达水平均显着高于其他组（P<0.05）,其细胞凋亡率显着低于其他组（P?0.05）。结果表明,牦牛卵母细胞体外成熟过程中,5%氧气浓度可能通过HIF-1α介导VEGF的表达抑制了COCs的细胞凋亡,促进了卵母细胞的发育。3.将5%氧气浓度组中成熟的COCs分别在不同氧气浓度（20%、10%、5%和1%O2）下进行体外受精,观察不同氧气浓度对体外受精胚胎的卵裂率、囊胚率、囊胚孵化率和总细胞数来判断低氧浓度对胚胎发育能力的影响;此外,我们采用q RT-PCR、免疫荧光染色法和TUNEL试剂盒分别检测了胚胎发育相关基因的表达和细胞凋亡率。结果显示,在5%O2浓度组中,胚胎的卵裂率显着低于20%O2浓度组和10%O2浓度组（P<0.05）,显着高于1%O2浓度组（P<0.05）,而囊胚率、囊胚中的细胞总数、内细胞团细胞数、滋养层细胞数、ICM/TE的比例以及细胞凋亡率均显着高于其他组（P<0.05）;在5%O2浓度下,囊胚中CDX2、POU5F1、SOX2和NANOG基因的m RNA转录水平显着高于其他组（P<0.05）,促凋亡基因Bax的转录水平显着降低（P<0.05）,而抗凋亡因子Bcl-2的转录水平显着升高（P<0.05）。结果表明,在牦牛体外受精胚胎发育过程中,5%的氧气浓度降低了胚胎的卵裂率,但显着提高了胚胎的囊胚率,增强了附植前牦牛胚胎的发育能力并抑制了其细胞凋亡。4.通过q RT-PCR和免疫荧光染色法检测p38 MAPK与HIF-1α在常氧浓度（20%O2）和低氧浓度（5%O2）下体外受精胚胎不同阶段发育中的表达和定位。结果显示,在常氧浓度和低氧气浓度下,随着体外受精胚胎的发育,HIF-1α和p38 MAPK的表达呈先升高后降低的趋势,在8细胞中均达到最高（P<0.05）,而在囊胚期均为最低（P<0.05）;HIF-1α在各阶段胚胎中的表达差异均显着（P<0.05）,而p38 MAPK在2细胞到8细胞阶段表达差异不显着（P>0.05）,但在桑椹胚和囊胚阶段中表达差异显着（P<0.05）;在常氧浓度下,在2细胞到囊胚阶段,HIF-1α蛋白主要表达于胚胎的细胞质中,在囊胚中的表达非常弱,而p38MAPK蛋白表达于胚胎的细胞质和细胞核中,在细胞质中表达更为明显;在低氧浓度下,在2细胞到桑椹胚阶段,HIF-1α蛋白主要表达于胚胎的细胞质中,在囊胚阶段,HIF-1α蛋白在细胞质和细胞核中均有表达,而且在细胞核中表达明显,而p38 MAPK蛋白主要表达于胚胎的细胞质和细胞核中,在2细胞到桑椹胚阶段,细胞质中表达更为明显,而在囊胚阶段,细胞核中表达更为明显。结果表明5%氧气浓度下HIF-1α蛋白在囊胚中转入细胞核表达,推测5%氧气浓度可能通过p38 MAPK基因调控HIF-1α基因的表达,提高了囊胚率,进一步改善了附植前胚胎的发育。本研究表明5%的氧气浓度有利于牦牛卵母细胞的体外成熟,增强了牦牛附植前体外受精胚胎的发育能力,为进一步探讨牦牛卵母细胞体外成熟环境及建立牦牛体外胚胎生产系统提供了理论依据。
马睿[4]（2020）在《EGF与IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响》文中研究表明细胞自噬和胞吞是细胞进行正常生命活动所必须的生理程序,其活性受到诸多因素的影响。生长因子作为哺乳动物体内的重要调节因子,可通过多种作用方式参与动物的卵泡发育、卵母细胞成熟及早期胚胎发育,但其对哺乳动物生殖相关细胞自噬及胞吞程序调控的相关研究目前仍十分少见。牦牛（Bos grunniens）作为高原地区重要经济畜种,其季节性发情、繁殖力低下的特征是牧区经济发展困难的主要原因之一,卵丘细胞紧紧围绕卵母细胞生长,它自身的自噬和胞吞活动对卵泡发育及卵母细胞成熟具有重要作用。本研究选取牦牛卵丘细胞为研究对象,探究表皮生长因子（Epidermal gr owth factor,EGF）和胰岛素样生长因子-1（Insulin-like growth factor,IGF-1）对其自噬和胞吞活动的影响。使用浓度为0（对照组）、50、100、150、200 ng/mL的EGF和适宜浓度（10μmol/L）表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）抑制剂Gefitinib以及浓度为0（对照组）、50、100、150、200 ng/mL的IGF-1作用于牦牛卵丘细胞,提取细胞总RNA和总蛋白。利用qRT-PCR及Western-blot等技术分别测定各浓度下自噬相关基因5（Autophagy related gene 5,Atg5）、Bcl-2同源结构域蛋白（Bcl-2homologous domain protein,Beclin1）、微管相关蛋白轻链3（Microtubule-associated protein light chain 3,LC3）以及胞吞相关蛋白小窝蛋白1（Caveolin1,Cav1）、小窝蛋白2（Caveolin2,Cav2）的相对表达量,并结合免疫荧光技术对5种蛋白在细胞的表达定位进行比较分析。结果如下:1)成功体外培养牦牛卵丘细胞,经鉴定,自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、LC3及胞吞相关蛋白Cav1、Cav2在牦牛卵丘细胞均有表达,且主要分布在胞质中。2)经不同浓度EGF处理的牦牛卵丘细胞,自噬基因Atg5表达量较对照组（0 ng/mL）下降,且Atg5蛋白和Atg5-Atg12复合物表达量与EGF浓度负相关,各处理组表达量均显着低于对照组（0 ng/mL）（P<0.05）,自噬基因Beclin1、LC3及蛋白Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达先下降后回升,均在100 ng/mL处达到最低（P<0.05）;Cav1、Cav2 mRNA与蛋白的相对表达均与EGF浓度正相关,在200 ng/mL处最高（P<0.05）。3)抑制EGFR后,LC3 mRNA和蛋白相对表达量均显着增高（P<0.05）,其他自噬基因及蛋白表达无显着变化（P>0.05）;Cav1、Cav2 mRNA和蛋白相对表达量均显着升高（P<0.05）。4)经不同浓度IGF-1处理的牦牛卵丘细胞,自噬相关基因Atg5、Beclin1、LC3及蛋白Atg5、Atg5-Atg12、Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量均先下降而后上升,在100 ng/mL处理组均达到最低,与其他处理组差异显着（P<0.05）;Cav1和Cav2 mRNA和蛋白相对表达量均与IGF-1呈浓度依赖,随IGF-1浓度增大,表达量先下降后回升。综上,体外培养牦牛卵丘细胞时添加EGF和IGF-1均可影响自噬及胞吞相关基因和蛋白的表达,且作用效果与EGF和IGF-1浓度相关;两种生长因子均可抑制牦牛卵丘细胞自噬,100 ng/mL为最佳作用浓度;胞吞相关小窝蛋白Cav1、Cav2表达量与EGF和IGF-1浓度呈现一定的正相关关系,两种生长因子均在作用浓度为150 ng/mL时对Cav1、Cav2表达均有很好的促进作用。EGF和IGF-1参与牦牛卵丘细胞自噬及胞吞的生物学功能调控,以上研究结果为进一步研究生长因子参与动物生殖相关细胞自噬与胞吞作用,及其对卵母细胞成熟和胚胎发育的作用机制提供理论依据。
尹雅倩[5]（2020）在《针刺对卵巢储备功能减退模型大鼠HPO轴及FSH-cAMP信号通路的影响》文中研究表明背景卵巢储备功能减退（diminished ovarian reserve,DOR）是指卵巢内卵母细胞数目的减少和（或）质量下降,可导致生育力下降,同时伴有抗苗勒管激素（anti-Mullerian hormone,AMH）水平降低、窦卵泡计数（antral follicle count,AFC）减少及促卵泡激素（follicle-stimulating hormone,FSH）水平升高。随着社会发展,女性面临的生活压力和工作压力逐渐加重,DOR发病率逐年上升,由此导致的不孕严重影响女性生殖健康和生活质量,给其家庭带来沉重的精神及经济负担。FSH是下丘脑-垂体-卵巢（Hypothalamic-pituitary-ovarian,HPO）轴的主要激素之一,可促进颗粒细胞的增殖分化,影响卵泡的发育、成熟及排卵,影响雌激素的合成。FSH与其特异性受体（FSHR）的结合是其发挥生物学效应的基础。FSH与FSHR结合,可进一步激活环磷酸腺苷（Cyclic adenosine monophosphate,cAMP）/蛋白激酶 A（Protein kinase A,PKA）信号转导通路下游信号分子的级联放大,从而影响颗粒细胞增殖分化和卵巢性激素的合成。P450芳香化酶（P450arom）是颗粒细胞中的限速酶,P450arom催化作用使雄激素变为雌激素参与卵泡募集。临床试验显示,针刺可以降低血清FSH水平,提高血清雌二醇（Estradiol,E2）水平,通过调整异常的性激素水平而起到改善卵巢储备功能的作用。动物实验也表明,针刺可调整HPO轴的紊乱状态,一定程度上使分泌过多的下丘脑促性腺激素释放激素（Gonadotropin-releasing hormone,GnRH）水平恢复正常。FSH-cAMP信号通路对卵泡发育和卵巢功能十分关键,但基于该信号通路的针刺方面的研究较少。本实验从HPO轴整体调控及卵巢局部FSH-cAMP信号通路两个层面初步探索针刺治疗DOR的作用机制。目的探索针刺对DOR模型大鼠HPO轴及FSH-cAMP信号通路的影响。方法实验一:DOR动物模型的建立及验证20 只清洁级（Specific Pathogen Free,SPF）级雌性 Sprague Dawley（SD）大鼠,其中,3月龄大鼠10只,9月龄退役种鼠10只。3月龄大鼠作为对照（Control）组,9月龄退役种鼠作为DOR模型组。常规观察大鼠每日的阴道涂片以确定动情周期,选择处于动情间期的大鼠取材。ELISA法检测血清性激素（FSH、LH、E2、AMH、抑制素B（INH-B））水平、冰冻切片HE染色方法确定左侧卵巢窦卵泡计数。实验二:针刺对DOR大鼠HPO轴及FSH-cAMP信号通路的影响40只清洁级（Specific Pathogen Free,SPF）级雌性SD大鼠,其中,3月龄大鼠10只,9月龄退役种鼠30只。3月龄大鼠作为对照组（Control组）,9月龄退役种鼠依据动情间期眼眶血FSH水平,区组随机分为三组:DOR模型组（DOR组）、束缚组（DOR+res组）、针刺组（DOR+acu组）。Control组及DOR组不予干预,DOR+res抓取后放置高台作为束缚固定,DOR+acu组针刺后放置高台,取穴为百会、关元、次髎穴,隔日一次,每次针刺20分钟,共针刺10次。常规观察大鼠每日的阴道涂片以确定动情周期。实验干预结束后选择处于动情间期的大鼠取材。ELISA法检测血清性激素（FSH、LH、E2、AMH、抑制素B（INH-B））水平、下丘脑GnRH含量、垂体FSH和LH含量及卵巢组织cAMP含量。Western Blot法检测卵巢组织FSHR蛋白的相对含量。实时荧光PCR法检测卵巢组织的FSHR mRNA及P450 mRNA相对含量。冰冻切片HE染色方法确定左侧卵巢的形态学改变及窦卵泡计数。结果实验一:DOR动物模型的建立及验证1.动情周期与Control组相比,DOR组大鼠动情周期紊乱率显着升高,差异有统计学意义（P<0.05）。2.血清激素水平与Control组相比,DOR组大鼠的血清FSH水平明显升高,E2、AMH水平明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。血清LH、INH-B未见统计学差异（P>0.05）。3.窦卵泡计数与Control组相比,DOR组大鼠的窦卵泡数量明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。实验二:针刺对DOR大鼠HPO轴及FSH-cAMP信号通路的影响1.针刺对DOR大鼠HPO轴的影响（1）下丘脑组织GnRH含量:与control组相比,DOR组大鼠下丘脑组织中GnRH水平显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）。与DOR组相比,DOR+res组和DOR+acu组的GnRH水平显着降低,差异有显着统计学意义（P<0.01）。与DOR+res组相比,DOR+acu组的GnRH水平显着降低,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）垂体组织FSH和LH含量:四组大鼠垂体组织FSH及LH含量的组间两两比较均未见统计学差异（P>0.05）。（3）针刺对DOR大鼠卵巢储备功能的影响:①动情周期紊乱率:与control组相比,DOR组大鼠动情周期紊乱率明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）。与DOR组相比,DOR+res组动情周期紊乱率呈升高趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;DOR+acu组动情周期紊乱率呈降低趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。与DOR+res组相比,DOR+acu组动情周期紊乱率显着降低,差异有统计学意义（P<0.05）。②卵巢组织形态学改变:Control组大鼠卵巢切面皮质较连续,卵泡中颗粒细胞排列紧密,髓质较致密,血管形态完好。DOR组大鼠的卵巢切面皮质不连续,卵泡中颗粒细胞排列紊乱,髓质较稀疏,血管形态不完整。DOR+res组卵巢切面皮质连续性较差,颗粒细胞层连续性欠佳,髓质松散,血管分布较少。DOR+acu组卵巢切面皮质较连续,卵巢颗粒细胞层有增多趋势,髓质结构较稀松散,血管分布较少。③窦卵泡计数:与control组相比,DOR组窦卵泡计数显着减少,差异有统计学意义（P<0.05）。DOR组、DOR+res组和DOR+acu组三组之间窦卵泡数未见显着差异（P>0.05）。④血清性激素水平:与control组相比,DOR组大鼠血清FSH和LH水平显着升高,AMH和E2水平显着降低,差异有统计学意义（P<0.05）,但INH-B水平未见显着差异（P>0.05）。与DOR组相比,DOR+res组血清5种激素水平均未见显着差异（P>0.05）。与DOR组相比,DOR+acu组血清FSH水平显着降低,E2和AMH水平显着升高,差异有统计学意义（P<0.05）,其余2种激素水平未见显着差异（P>0.05）。与DOR+res组相比,DOR+acu组血清5种激素水平均未见显着差异（P>0.05）。2.针刺对DOR大鼠FSH-cAMP信号通路的影响:（1）卵巢组织FSHR相对表达量:与control组相比,DOR组大鼠卵巢组织FSHR蛋白相对表达量显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）。与DOR组相比,DOR+res组大鼠卵巢组织FSHR蛋白相对表达量未见显着差异（P>0.05）。与DOR和DOR+res组相比,DOR+acu组大鼠卵巢组织FSHR蛋白相对表达量均显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）。（2）卵巢组织FSHR mRNA及P450 mRNA相对表达量:①FSHR mRNA相对表达量改变:与Control组相比,DOR组大鼠卵巢组织FSHR mRNA相对表达量显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）。与DOR组相比,DOR+res组大鼠卵巢组织FSHR mRNA相对表达量未见显着差异（P>0.05）。与DOR组相比,DOR+acu组大鼠卵巢组织FSHR mRNA相对表达量显着升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与DOR+res组相比,DOR+acu组大鼠卵巢组织FSHR mRNA相对表达量未见显着差异（P>0.05）。②P450 mRNA相对表达量改变:与Control组相比,DOR组大鼠卵巢组织P450 mRNA相对表达量显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）。与DOR组相比,DOR+res组和DOR+acu组大鼠卵巢组织P450 mRNA相对表达量均显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）。与DOR+res组相比,DOR+acu组大鼠卵巢组织P450 mRNA相对表达量未见显着差异（P>0.05）。（3）卵巢组织cAMP含量:与Control组相比,DOR组大鼠卵巢组织的cAMP含量显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）。与DOR组相比,DOR+res组大鼠卵巢组织的cAMP含量均未见显着差异（P>0.05）。与DOR组及DOR+res组相比,DOR+acu组卵巢组织的cAMP含量显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）。结论1.与三月龄雌性大鼠相比,九月龄SD大鼠雌性退役种鼠的卵巢储备功能明显减退,可作为DOR动物模型。2.针刺可降低DOR大鼠下丘脑组织GnRH含量。3.针刺可通过调整紊乱的动情周期及异常的性激素水平一定程度上改善DOR大鼠的卵巢储备功能。4.卵巢颗粒细胞FSH-cAMP信号转导通路可能参与针刺对DOR大鼠卵巢储备功能的调控,该部分结果还需进一步验证。
解颖颖[6]（2020）在《HMGB1/TLR2对奶牛卵巢颗粒细胞排卵相关基因的影响及姜黄素对其干预作用》文中研究指明卵巢疾病是导致奶牛繁殖障碍的重要原因之一。深入探讨奶牛卵巢生理功能和发病学机制,可为奶牛卵巢疾病更加合理治疗方案的制定和靶向治疗药物的筛选提供科学依据。大量研究证明,哺乳动物排卵过程类似于炎症,先天免疫在其中发挥着重要作用。TLRs是动物先天免疫系统中一类具有重要功能的PRRs,已被证明存在于多种哺乳动物卵巢组织,在卵巢生理活动和卵巢相关疾病发生发展过程中发挥重要作用。随着人们对TLRs在卵巢先天免疫研究方面的深入,TLR2/4的内源性配体HMGB1在卵泡液中的作用引起了研究者的兴趣。但是到目前为止,HMGB1和TLRs在卵巢活动及相关卵巢疾病中的功能还不甚明确,其在奶牛卵巢颗粒细胞中的作用研究报道较少。本论文以原代奶牛卵巢颗粒细胞为对象,采用qRT-PCR、免疫印迹、免疫组化、免疫共沉淀、间接免疫荧光、ELISA和基因沉默等技术,研究了HMGB1和TLR2在不同发育阶段卵泡来源的颗粒细胞中的表达规律及调控其表达的因素,分析了HMGB1/TLR2对排卵相关基因的影响及姜黄素通过HMGB1/TLR2/NF-κB对排卵相关基因的干预作用。结果表明:来源于不同发育阶段的健康卵泡颗粒细胞均可高表达TLR3、TLR1、TLR6、TLR2、TLR10和HMGB1,低表达TLR4和TLR5,不表达TLR7/8/9,TLRs和HMGB1的表达水平随着卵泡的发育呈逐渐升高趋势;TLR2分别与HMGB1、TLR1和TLR6之间存在交叉对话,这种对话也会随着卵泡的发育呈增强趋势;用5种浓度的FSH刺激卵巢颗粒细胞6 hr,其中12.5、25、50 mIU/mL FSH不会抑制细胞活性,25和50 mIU/mL FSH能显着上调HMGB1、TLR2、TLR1、TLR6和MyD88的表达水平,12.5、100和500 mIU/mL FSH对这些蛋白的调节作用不明显。在细胞培养液中加入0.2、1和5μg/mL HMGB1孵育6 hr后,5μg/mL HMGB1能显着上调卵巢颗粒细胞内TLR2、EGFR、VEGF、StAR、TIMP1/2的mRNA水平与TLR2、TLR1、TLR6、p-NF-κB p65蛋白水平,引起细胞NF-κB p65发生核易位和大量分泌IL-6;HMGB1分别与TLR2、TLR1、TLR6和p-NF-κB p65之间存在交叉对话,对话强度与HMGB1有剂量依赖性,siRNA靶向基因沉默TLR2能显着逆转HMGB1引起的上述变化。分别用1.25、2.5和5μg/mL姜黄素预孵育卵巢颗粒细胞6 hr,再用5μg/mL HMGB1孵育卵巢颗粒细胞6 hr后,5μg/mL姜黄素能显着下调HMGB1引起的TLR2与排卵相关基因的mRNA水平变化、显着下调TLR2、TLR1、TLR6和p-NF-κB p65蛋白水平、抑制NF-κB p65的核易位和IL-6的分泌,降低HMGB1与TLR2、TLR1、TLR6和p-NF-κB p65的交叉对话。综上所述,奶牛不同发育阶段的卵泡颗粒细胞能表达TLRs家族成员和HMGB1,表达水平与卵泡发育程度有相关性;FSH对卵巢颗粒细胞HMGB1和TLR2的表达有一定调控作用;HMGB1能通过TLR2激活颗粒细胞中的NF-κB信号通路,刺激细胞大量分泌IL-6,进而影响排卵相关基因表达;姜黄素干预能显着逆转HMGB1对TLR2/NF-κB的激活,抑制IL-6的分泌,影响排卵相关基因的表达。HMGB1可以作为评估卵泡发育程度的指示性指标及治疗卵巢相关疾病的潜在性靶点,但仍需深入研究。
马雪杰[7]（2020）在《AdipoQ及AdipoRs对鸡卵巢颗粒细胞生殖激素分泌和相关基因表达的影响》文中提出脂联素及其受体存在多种动物的生殖腺及生殖组织中,在调控动物生殖及胚胎生长发育方面起重要作用。目前相关研究大多集中在哺乳动物上,对家禽的生殖机能的研究比较少。颗粒细胞是作为研究禽类卵泡发育相关研究良好的试验模型。因此本实验以海兰褐蛋鸡为试验材料,采用qRT-PCR、Western blot（WB）技术在体外研究脂联素受体激动剂（AdipoRon）及脂联素受体（AdipoRs）在鸡卵巢颗粒细胞中的生物学作用及调控机制,为完善家禽生殖调控理论奠定基础。相关研究结果如下:试验一 AdipoQ及AdipoRs基因在鸡组织和卵巢中的表达分布情况1、采用qRT-PCR技术研究AdipoQ及AdipoRs在鸡体各组织和卵泡的表达情况。结果显示:AdipoQ及AdipoRs广泛存在于鸡的各种组织和卵泡中。AdipoQ在下丘脑和脂肪的表达量最高,AdipoR1主要在腿肌和下丘脑表达,AdipoR2主要在下丘脑和垂体中表达。AdipoR1在F3中的表达量最低,在SWF、SYF、LWF中表达量最高;AdipoQ在F1和SYF卵泡中的表达量最高,AdipoR2在F1和F2卵泡中的表达量最高。说明脂联素及其受体参与生命活动和卵巢卵泡发育的过程。2、qRT-PCR检测结果显示脂联素及其受体存在于颗粒细胞和膜细胞中,AdipoQ在颗粒细胞中的表达量最低,AdipoQ mRNA在膜细胞中的表达水平比颗粒细胞高出40倍左右（P<0.001）。膜细胞中AdipoR1 mRNA表达水平较颗粒细胞低约2倍（p<0.05）。3、免疫组化结果显示,AdipoQ在卵巢颗粒细胞和膜细胞都有分布。AdipoR1、AdipoR2在卵巢髓质部有分布。试验二AdipoRon对原代卵巢颗粒细胞增殖、凋亡及分泌功能的影响1、血清和卵泡液中均存在脂联素及其受体。AdipoQ（14.3 1±1.81）在血清中的分泌水平最高。2、通过CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,结果发现AdipoRon（5ug/mL和10ug/mL）作用卵巢颗粒细胞24h对其活力和凋亡没有影响,因此可以作为后续试验。3、本试验利用酶消化法分离得到原代卵巢颗粒细胞,待贴壁12h后,用0（对照组）、5、10ug/ml AdipoRon处理原代卵巢颗粒细胞24h,采用ELISA方法检测细胞培养液生殖激素分泌量。结果显示:AdipoRon影响了生殖激素的分泌。AdipoRon（5ug/ml、10ug/ml）显着抑制了E2的分泌（P<0.05）,显着刺激了LH、FSH、PROG、AdipoR1、AdipoR2、GnRH分泌（P<0.05）。试验三过表达或干扰AdipoRs和AdipoRon共处理对原代卵巢颗粒细胞的影响过表达或干扰AdipoRs与AdipoRon联合作用鸡卵巢颗粒细胞24h对其生殖激素及受体等相关基因表达的影响。结果显示:1、AdipoRon（5ug/ml、10ug/ml）单独处理颗粒细胞显着增加了ACC、P450SCC0、STAR、CYP19A1 mRNA水平（P<0.05）,FSHB、AdipoR2、LHR、FSHR、P38MAPK表达都有上升趋势（P>0.05）。AdipoRon（5ug/ml、10ug/ml）单独处理颗粒细胞显着抑制了E2的分泌（P<0.05）,显着刺激了AdipoQ、AdipoR1、AdipoR2、GnRH、FSH、LH、PROG分泌（P<0.05）。我们推测在鸡卵巢颗粒细胞中,AdipoRon可促进LH与LHR受体的结合,从而刺激卵巢卵泡的发育和排卵。2、干扰AdipoR1或AdipoR2分别与AdipoRon（5ug/ml、10ug/ml）联合作用颗粒细胞可显着升高FSHR、LHR的表达,促进FSH与LH的分泌。因此促进小卵泡的发育,刺激类固醇激素的分泌。过表达AdipoRs显着刺激了 LH的分泌,降低了 LHR的表达,对FSHB、STAR、GnRH mRNA水平没有影响。AdipoRon（5ug/ml、10ug/ml）、过表达AdipoRs和AdipoRon（5ug/ml、10ug/ml）共处理都增加了GnRH的表达,促进了GnRH分泌。在颗粒细胞中过表达AdipoRs和AdipoRon联合、单独添加AdipoRon或过表达AdipoR2都提高了 P38MAPK mRNA水平,过表达AdipoR1、干扰AdipoR2显着降低了P38的表达（P<0.05）。可以推测脂联素参与了鸡颗粒细胞P38信号通路,在家禽早期发育中具有生理作用。3、过表达AdipoRs都显着促进了AdipoRs的分泌,干扰AdipoRs显着抑制了AdipoRs的分泌。过表达或干扰AdipoRs分别与AdipoRon（5ug/ml、10ug/ml）联合作用颗粒细胞显着抑制了E2的分泌,促进了AdipoR1、AdipoR2、GnRH、FSH、LH、PROG的分泌（P<0.05）。此外,过表达AdipoR1或AdipoR2都显着促进了AdipoR1和AdipoR2的分泌,抑制AdipoQ的分泌（P<0.05）,脂联素的分泌与AdipoR1、AdipoR2 mRNA丰度呈负相关。AdipoRs过表达或干扰分别与AdipoRon联合都促进了孕酮的分泌,促进卵泡的排卵。综上所述:脂联素及其受体参与生命活动和卵巢卵泡发育的过程,调控生殖相关基因的表达,促进类固醇激素的分泌,从而促进了卵巢的发育和排卵。
孔德琦[8]（2020）在《Sirtuin家族基因在卵泡发育过程中的作用及分子机制研究》文中认为背景卵泡是卵巢的基本结构及功能单位。女性出生时,双侧卵巢内储存大量处于休眠阶段的原始卵泡。进入青春期后,99%的原始卵泡发生闭锁,仅剩不到1%的原始卵泡在体内性激素水平刺激下,卵泡体积由小及大,颗粒细胞形态也由单层扁平状变为多层柱状,并逐步分化为有功能的外层卵泡膜细胞和内层颗粒细胞。随着卵泡的生长发育,初级卵母细胞发生减数分裂,卵泡腔逐渐形成,依次经历初级卵泡、次级卵泡、窦前卵泡阶段最后发育为成熟卵泡并最终排出卵子。随着女性年龄的增加,卵巢内储存的原始卵泡数量逐渐减少,尤其是女性35岁后的原始卵泡数量加速减少。一旦因为各种原因导致卵巢内原始卵泡提前耗竭,则会发生原发性卵巢功能不全（primaryovarian insufficiency,POI）。因此,维持原始卵泡池对延长女性生殖寿命最为关键。原始卵泡激活和早期卵泡生长发育受多种细胞信号通路调控,如Hippo通路、PI3K-PTEN-AKT-FOXO3通路等,且至今未阐明清楚。.Sirtuins是一个存在于哺乳动物中的NAD+依赖性的蛋白去乙酰化酶家族,在组织中的表达具有高度保守性,主要参与包括细胞衰老、代谢、凋亡、细胞周期、细胞存活和基因组稳定性等多个生理事件的调控过程。哺乳动物Sirtuin家族具有7个成员,这些成员因其亚细胞定位和蛋白结构特异性不同,因而其活性和功能也有所不同。Sirtuin1、Sirtuin6和Sirtuin7主要定位于细胞核,Sirtuin2定位于细胞质,而Sirtuin3、Sirtuin4和Sirtuin5则表达定位于线粒体。有研究表明Sirtuin家族基因与女性卵巢卵泡发育及卵母细胞成熟等密切相关:在肥胖大鼠模型的研究中,Sirtuin1可改善由高卡路里饮食诱导产生的始基卵泡丢失及卵泡闭锁;而过表达Sirtuin1则可模拟热量限制饮食所诱导的小鼠始基卵泡储备的维持。提示Sirtuin1可能参与早期卵泡发育调控过程。鉴于此,本课题以小鼠卵巢为研究对象,探索Sirtuin家族基因在各发育阶段卵泡中的表达和定位情况;以人原代颗粒细胞及KGN细胞系为研究对象,重点阐述Sirtuin1在早期卵泡发育中的调控作用及分子机制。目的1.探索Sirtuin家族基因在卵巢卵泡发育过程中的表达模式及空间定位;2.阐明Sirtuin1对早期卵泡发育的调控作用;3.研究Sirtuin1对颗粒细胞增殖与凋亡的影响及机制;4.以及初步探究Sirtuin1对颗粒细胞线粒体功能的潜在调控作用。方法本研究运用rea1 time-PCR检测不同日龄新生小鼠卵巢Sirtuin家族基因的相对表达水平;运用IHC技术检测Sirtuin1、Sirtuin4和Sirtuin6在小鼠各级卵泡中的定位及表达情况;应用Sirtuin1腺病毒过表达体系和HE染色验证Sirtuin1对早期卵泡发育的影响;应用Sirtuin1腺病毒过表达体系和转染siRNA沉默Sirtuin1研究Sirtuin1对颗粒细胞增殖及凋亡的影响;运用real time-PCR和Western Blot研究Sirtuin1对颗粒细胞线粒体功能的潜在影响机制。结果1.Sirtuin家族7个基因在卵巢卵泡发育各阶段表达情况不同。其中,Sirtuin1、Sirtuin 4和Sirtuin6的表达水平随着卵泡的发育而逐渐下降;Sirtuin5的表达则先上升后下降,且在次级卵泡阶段表达水平达到最高值。从7个基因于各时期的相对表达比较来看:Sirtuin2于各级卵泡中的表达量始终较高水平;Sirtuin7在原始卵泡阶段表达水平相对较低,而在其它发育阶段则相对较高;Sirtuin6仅高表达于始基卵泡阶段。2.对小鼠卵巢卵泡的免疫组化结果提示:Sirtuin1集中表达于早期卵泡颗粒细胞中,细胞质与细胞核中均有阳性信号,而卵母细胞及卵巢间质细胞中几乎无表达;Sirtuin4和Sirtuin6表达于颗粒细胞和卵母细胞胞质中,黄体中也有较强表达。3.通过小鼠卵巢体外培养体系培养不同日龄卵巢,采用腺病毒感染过表达Sirtuin1,结果发现Sirtuin1过表达可抑制原始卵泡向初级卵泡转化以及初级卵泡向次级卵泡的转化进程,表明Sirtuin1延缓了早期卵泡发育进程。4.干扰Sirtuin1表达水平显着影响原代颗粒细胞及KGN细胞增殖,可能与调控CCN2的表达水平改变有关。5.感染Sirtuin1表达水平显着影响原代颗粒细胞及KGN细胞凋亡,可能与调控AMPK/PI3 K/Akt1/caspase表达水平相关。6.KGN中Sirtuin1表达水平改变影响了线粒体融合蛋白2（mitofusin,Mfn2）以及线粒体自噬相关蛋白Atg5、Beclin1和LC3B的表达,提示Sirtuin1可能通过影响颗粒细胞线粒体功能进而影响卵泡发育。结论Sirtuin家族基因在卵泡发育过程中具有不同的表达模式,Sirtuin1、Sirtuin 4和Sirtuin6的表达水平随着卵巢卵泡发育进程而逐渐降低。过表达Sirtuin1可延缓原始卵泡向初级卵泡以及初级卵泡向次级卵泡转化过程,提示sirtuin1可能参与早期卵泡发育调控过程。Sirtuin1对早期卵泡发育的调控可能与Sirtuin1影响颗粒细胞增殖与凋亡有关,且干扰Sirtuin1表达水平改变了线粒体融合蛋白和自噬相关蛋白的表达,提示Sirtuin1对卵泡发育的调控亦可能是通过影响颗粒细胞线粒体功能实现的。
李泽[9]（2020）在《MicroRNA-18b调控兔卵巢颗粒细胞功能的研究》文中研究指明雌性哺乳动物的生育能力与卵巢卵泡的发育和闭锁紧密相关。作为卵泡的重要组成部分,颗粒细胞对于卵母细胞的存活和生长以及类固醇的合成分泌至关重要。miRNA作为转录后基因表达的负调控因子,通过与靶m RNA相互作用调节颗粒细胞的功能和凋亡。家兔是重要的经济动物及良好的动物模型,为繁殖母兔的选育和管理提供理论基础,并且关于miRNA在兔卵巢发育过程中的功能研究较少。在人类生殖系统疾病发展过程中,miR-106a-363簇的miRNA（miR）-18b起着重要作用。因此,本研究将探究miR-18b在类固醇激素合成过程中的表达及其对颗粒细胞增殖凋亡的影响。本试验以兔颗粒细胞为研究对象,通过过表达和抑制miR-18b,使用酶联免疫吸附测定（ELISA）,CCK8细胞增殖检测方法,流式细胞术及Annexin V-FITC/PI染色,实时定量PCR（Real-time q PCR）,双荧光素酶和蛋白印迹（Western Blot）等试验技术探究miR-18b对颗粒细胞功能的影响,并对miR-18b的靶基因进行了预测和验证。本试验对深入了解调节兔颗粒细胞类固醇激素的功能和机理方面的研究提供了新视角。结果如下:1.预测miR-18b的基本功能,发现兔miR-18b在进化上高度保守。使用生物信息学预测并分析miR-18b的直接靶标,发现miR-18b靶基因富集的信号通路在细胞增殖和凋亡等。这些结果大多与已知在卵巢发育,成熟和闭锁中起作用的信号通路相吻合。这为进一步探索miR-18b在卵巢颗粒细胞中的生物学功能提供了依据。2.本研究分离鉴定了兔颗粒细胞。然后,使用CCK-8法,流式细胞术检测了细胞增殖和周期,结果显示过表达miR-18b后,细胞周期停滞在S期之前,从而抑制了DNA合成和细胞增殖。运用Annexin V-FITC荧光检测结果表明,miR-18b能够促进颗粒细胞凋亡;并使用q PCR检测凋亡相关基因（Caspase-3,Bax和Bcl2）的表达,与凋亡检测结果一致。3.在过表达miR-18b后,使用ELISA检测到细胞培养基中E2表达量降低,但是P4合成没有受到显着影响。并使用q PCR检测激素合成相关基因（CYP19A1,CYP11A1和17B-HSD1）的表达量,结果表明miR-18b的沉默增加了E2生成相关基因的表达。4.本试验通过双萤光素酶检测验证了miR-18b直接靶向ESR1的3’UTR区。在体外培养的兔颗粒细胞中的功能分析表明,miR-18b的过表达导致ESR1 m RNA和蛋白水平降低,进一步证明了miR-18b和ESR1呈负相关表达模式。以上结果表明,miR-18b对兔卵巢颗粒细胞激素分泌和凋亡具有调控作用。过表达miR-18b会抑制颗粒细胞增殖,促进细胞凋亡。同时miR-18b可以充当负调节因子介导与E2合成相关酶的产生下调E2的水平。并且本研究还预测及鉴定了miR-18b的直接靶基因ESR1。研究结果对进一步了解miRNA影响卵泡发育提供了新的候选基因,对提高畜牧生产的经济效益具有重要意义。
徐德军[10]（2020）在《SIRT2对牛卵母细胞成熟与老化的作用及其机制》文中提出作为极为重要的细胞代谢和应激反应传感器,Sirtuins（SIRT1-7）家族在繁殖上的功能日益受到研究者关注。已有证据表明SIRT2在体细胞的有丝分裂、能量代谢及衰老等方面具有重要作用,而有关SIRT2与卵母细胞成熟、老化的报道较少,其作用机制更是不明确。基于此,本研究利用小分子抑制剂、si RNA干扰、免疫组织化学、细胞免疫荧光、ELISA、RT-q PCR、Western blot和免疫共沉淀等技术与方法,解析SIRT2在牛卵巢组织和卵母细胞亚细胞的定位,及其在卵子成熟、胚胎发育和老化过程中的表达规律;揭示SIRT2对牛卵母细胞核成熟、胞质成熟和老化的作用;明确SIRT2对牛卵丘-卵母细胞间隙连接通讯和卵巢颗粒细胞类固醇激素合成的作用及其调节途径。以期系统阐明SIRT2调控牛卵母细胞成熟、老化的分子机制,为提高牛卵母细胞质量、延缓卵母细胞老化提供科学依据。本研究获得以下主要研究结果和结论:1.SIRT1-7均在牛卵母细胞中表达,其中SIRT1和SIRT2的表达水平最高。除SIRT7之外,Sirtuins家族的m RNA表达水平在牛卵母细胞老化过程中以时间依赖的方式逐渐降低。特别是在牛卵母细胞体外老化48 h后,SIRT1、SIRT2和SIRT5的基因表达水平极显着低于新鲜成熟的卵母细胞（P<0.01）。进一步研究显示SIRT2在牛卵巢颗粒细胞、卵母细胞、卵丘细胞中均高表达,并且SIRT2存在于牛卵母细胞的细胞质和核。此外,SIRT2在牛卵母细胞的减数分裂阶段表达水平最高,而在成熟后发育至囊胚阶段,其表达水平逐渐下调。这些结果表明,SIRT2可能参与牛卵母细胞的减数分裂和老化过程。2.在牛卵母细胞体外成熟培养过程中,添加5μM Sir Real2（SIRT2特异性抑制剂）,几乎完全抑制了SIRT2的去乙酰化酶活性,但不影响牛卵母细胞的活力。SIRT2失活显着抑制了牛卵母细胞的核成熟和胚胎发育（P<0.05）,而SIRT1失活对核成熟无明显作用。共聚焦扫描和定量分析揭示,SIRT2失活显着增加了牛卵母细胞的纺锤体/染色体缺陷,并导致α-tubulin和H4K16高度乙酰化（P<0.05）。更为重要的是,SIRT2失活通过扰乱牛卵母细胞成熟过程中皮质颗粒、内质网和线粒体等细胞器的重新分布（P<0.05）,进而阻碍了胞质成熟。同时,SIRT2失活导致胞内ROS增加、ATP产生下降和线粒体膜电位降低（P<0.05）,引起线粒体功能障碍。进一步分析揭示,SIRT2失活异常下调TFAM和Mfn2表达、上调DRP1表达（P<0.05）,从而扰乱线粒体的生物合成和动力学。SIRT2失活通过增加Fox O3a乙酰化水平来抑制Fox O3a的核转位,进而下调Fox O3a依赖的抗氧化基因SOD2、Cat的表达（P<0.05）。这些发现证明了,SIRT2介导的去乙酰化酶活性是牛卵母细胞核和胞质成熟所必需的。3.在牛卵母细胞体外成熟过程中,抑制SIRT2的活性干扰了卵丘-卵母细胞的间隙连接通讯（P<0.05）。SIRT2失活促进了Cx43的磷酸化修饰,并上调了MEK/ERK信号途径（P<0.05）。有意思的是,SIRT2失活介导的Cx43磷酸化作用能够被MEK1/2抑制剂所抵消。同时SIRT2失活上调了MEK1/2的乙酰化水平,这表明SIRT2通过MEK/ERK信号调节Cx43磷酸化。在功能上,下调MEK/ERK信号可以部分减缓由SIRT2失活引起的间隙连接通讯闭合。进一步分析显示,SIRT2失活通过上调Cx43乙酰化水平来阻止Cx43在牛卵丘细胞膜和卵母细胞透明带上的定位。这些证据揭示了SIRT2促进牛卵丘-卵母细胞间隙连接通讯的作用可能依赖于下调Cx43的磷酸化和乙酰化修饰。4.SIRT2失活显着抑制了牛卵巢颗粒细胞的雌二醇、睾酮分泌,促进了孕酮分泌（P<0.05）。基因表达定量分析发现,SIRT2失活显着下调了ESRs、AR表达,上调PGR表达（P<0.05）。SIRT2失活或SIRT2敲低（SIRT2-KD）均显着抑制了PPARγ、LXRα和LXRβ的蛋白水平,促进了PPARα的蛋白水平（P<0.05）。免疫共沉淀分析显示,SIRT2-KD明显增加了PPARα的乙酰化水平（P<0.05）,却对PPARγ的乙酰化水平无显着影响,这表明SIRT2可能通过去乙酰化途径调节PPARα的蛋白稳定性。进一步的研究发现,PPARα激活或PPARγ失活能够模仿SIRT2-KD对LXRα表达和LXRα/RXR异源二聚体形成的抑制作用。与SIRT2-KD扰乱类固醇激素合成稳态的现象类似,PPARα激活或PPARγ失活均下调了雌二醇、睾酮合成,上调了孕酮合成（P<0.05）。值得注意的是,LXRα激活可以抵消SIRT2-KD、PPARα激活或PPARγ失活对类固醇激素分泌的调节作用。LXRα激活也可以废除SIRT2-KD、PPARα激活或PPARγ失活对St AR、CYP17和aromatase表达下调,CYP11A1表达上调的作用。这些结果揭示了,SIRT2通过LXRα促进雌二醇生物合成酶的表达、抑制孕酮合成酶的表达,从而调节类固醇激素的生物合成。5.抑制SIRT2的活性显着增加了老化牛卵母细胞的激活率、胞质碎片和纺锤体缺陷（P<0.05）,进而加快了牛卵母细胞的老化进程。SIRT2失活导致老化牛卵母细胞出现更高ROS水平、异常线粒体分布、低ATP产生和丢失线粒体膜电位（P<0.05）,从而加重老化牛卵母细胞的氧化应激和线粒体功能障碍。随着牛卵母细胞的老化,SIRT2表达也显着降低（P<0.05）。同时,SIRT2的表达下调或活性抑制均异常上调了牛卵母细胞的自噬水平（P<0.05）。通过早期细胞凋亡分析发现,牛卵母细胞的老化伴随着细胞凋亡,抑制SIRT2的活性增加了老化卵母细胞的凋亡率（P<0.05）。进一步研究揭示,SIRT2失活或自噬异常上调均显着增加了老化卵母细胞的caspase-3活性（P<0.05）,而自噬下调可以缓解SIRT2失活对caspase-3活性的促进作用。这些结果表明SIRT2下调是牛卵母细胞老化的一个关键机制。综上,SIRT2通过对α-tubulin、H4K16和Fox O3a等靶蛋白去乙酰化作用,调节牛卵母细胞减数分裂过程中纺锤体形成、染色体排列、线粒体功能和氧化还原稳态,进而促进核和胞质成熟。此外,SIRT2通过调节Cx43的乙酰化和磷酸化修饰,促进牛卵丘-卵母细胞间隙连接的通讯,并通过PPARs/LXRα途径刺激牛卵巢颗粒细胞雌二醇的分泌,从而参与牛卵母细胞的发育与胞质成熟。老化诱导的SIRT2下调导致纺锤体缺陷、氧化应激和线粒体功能障碍,进一步加速了牛卵母细胞的老化进程,并过度激活自噬诱导的细胞死亡。这些发现最终阐明SIRT2在牛卵母细胞的发育成熟和老化过程中的生物学功能。
二、哺乳动物卵巢中的细胞凋亡及其调节（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、哺乳动物卵巢中的细胞凋亡及其调节（论文提纲范文）
（1）热应激影响蛋鸡等级前卵泡发育的机理研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 热应激对蛋鸡生产性能的影响 |
| 1.1.1 蛋鸡对热耐受性的生理特点 |
| 1.1.2 热应激影响蛋鸡生产性能的研究 |
| 1.1.3 蛋鸡热应激模型的研究概况 |
| 1.2 蛋鸡卵泡的发育 |
| 1.2.1 蛋鸡卵泡的生长发育 |
| 1.2.2 成年蛋鸡卵泡分级 |
| 1.2.3 卵泡的闭锁与选择 |
| 1.2.4 热应激对卵泡数量的影响 |
| 1.3 细胞凋亡及其信号通路 |
| 1.3.1 细胞凋亡 |
| 1.3.2 Caspase通路 |
| 1.3.3 Bcl-2与Bax通路 |
| 1.3.4 Fas/FasL信号通路 |
| 1.3.5 TNFα/TNFR信号通路 |
| 1.3.6 氧化应激与细胞凋亡 |
| 1.4 热应激对相关激素的影响 |
| 1.4.1 CRH与热应激 |
| 1.4.2 皮质酮与热应激 |
| 1.4.3 雌激素与热应激 |
| 1.4.4 孕酮与热应激 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物与饲养条件 |
| 2.1.2 主要设备 |
| 2.1.3 主要试剂及其配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 蛋鸡热应激动物模型的建立 |
| 2.2.2 蛋鸡热应激动物模型的验证 |
| 2.2.3 热应激对蛋鸡卵泡损伤的组织学观察 |
| 2.2.4 TUNEL法检测卵泡颗粒细胞凋亡 |
| 2.2.5 流式细胞仪检测卵泡颗粒细胞凋亡 |
| 2.2.6 Western blot检测卵泡颗粒细胞相关蛋白表达 |
| 2.2.7 荧光定量PCR检测卵泡颗粒细胞相关基因的表达 |
| 2.2.8 卵泡中FasL与TNF-α含量的检测 |
| 2.2.9 蛋鸡血清和卵泡氧化应激指标TAS、SOD及MDA的检测 |
| 2.2.10 网络药理学方法研究Hsps蛋白系统在细胞凋亡中的机理 |
| 2.2.11 血清和卵泡中孕酮和雌二醇激素含量的检测 |
| 2.2.12 蛋鸡卵泡中促肾上皮质激素释放激素和皮质酮含量的检测 |
| 2.2.13 解除热应激后蛋鸡生产性能恢复试验设计 |
| 2.3 统计方法 |
| 2.4 技术路线 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 蛋鸡热应激动物模型建立的研究 |
| 3.1.1 蛋鸡热应激模式及温度的确定 |
| 3.1.2 热应激持续时间对蛋鸡生产性能的影响 |
| 3.1.3 热应激对蛋鸡血液中促肾上腺素激素释放激素和皮质酮的影响 |
| 3.1.4 热应激持续时间对蛋鸡血液心肌酶的影响 |
| 3.2 热应激对蛋鸡卵泡发育的影响 |
| 3.2.1 热应激对蛋鸡产蛋率的影响 |
| 3.2.2 热应激对蛋鸡卵泡数量的影响 |
| 3.3 热应激对蛋鸡卵泡颗粒凋亡的影响 |
| 3.3.1 热应激对蛋鸡卵泡组织损伤的影响 |
| 3.3.2 TUNEL法检测热应激后卵泡颗粒细胞凋亡情况 |
| 3.3.3 流式细胞法检测热应激后卵泡颗粒细胞凋亡情况 |
| 3.3.4 热应激对蛋鸡卵泡颗粒细胞Caspase-3蛋白表达的影响 |
| 3.3.5 热应激对蛋鸡卵泡颗粒细胞相关凋亡基因表达的影响 |
| 3.4 热应激导致蛋鸡卵泡颗粒细胞凋亡通路研究 |
| 3.4.1 热应激对蛋鸡卵泡颗粒细胞FasL/Fas蛋白系统的影响 |
| 3.4.2 热应激对蛋鸡卵泡颗粒细胞TNF-α蛋白系统的影响 |
| 3.4.3 网络药理学方法分析Hsps蛋白系统在细胞凋亡中的作用 |
| 3.5 热应激对蛋鸡血清和卵泡氧化应激的影响 |
| 3.5.1 热应激对蛋鸡血清中相关氧化指标的影响 |
| 3.5.2 热应激对蛋鸡卵泡中SOD和MDA的影响 |
| 3.6 热应激对蛋鸡卵泡和血清激素水平的影响 |
| 3.6.1 热应激对蛋鸡血清和卵泡中雌二醇和孕酮激素含量的影响 |
| 3.6.2 热应激对蛋鸡血清与卵泡中促肾上腺皮质激素释放激素和皮质酮含量的影响 |
| 3.7 解除热应激对蛋鸡生产性能与卵泡发育影响的研究 |
| 3.7.1 解除热应激对蛋鸡各级卵泡数量变化的影响 |
| 3.7.2 解除热应激后蛋重与蛋品质的恢复研究 |
| 3.7.3 热应激解除前后蛋鸡血液皮质酮含量的变化研究 |
| 3.7.4 解除热应激后蛋鸡卵泡组织损伤恢复情况的研究 |
| 4 讨论 |
| 4.1 蛋鸡热应激模型的建立 |
| 4.2 热应激导致了蛋鸡等级前卵泡颗粒细胞凋亡 |
| 4.3 热应激激活蛋鸡卵泡颗粒细胞FasL/Fas与TNF-α通路 |
| 4.4 热应激导致蛋鸡血液及等级前卵泡氧化应激 |
| 4.5 热应激导致蛋鸡血液和卵泡相关激素含量改变 |
| 4.6 解除热应激后蛋鸡生产性能与卵泡组织的恢复 |
| 4.7 热应激影响蛋鸡卵泡发育的可能机理探讨 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 |
（2）三（2-羧基乙基）膦盐酸盐处理对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育能力的影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 猪卵母细胞体外成熟的研究进展 |
| 2 猪卵母细胞体外成熟的影响因素 |
| 2.1 物理因素 |
| 2.1.1 猪卵巢的来源 |
| 2.1.2 卵巢离体后的时间 |
| 2.1.3 卵巢离体后的温度 |
| 2.1.4 卵巢的质量及卵泡的大小 |
| 2.1.5 猪卵母细胞体外培养体系 |
| 2.2 化学因素 |
| 2.2.1 激素 |
| 2.2.2 抑制或促进卵母细胞成熟的因子 |
| 2.2.3 血清 |
| 2.2.4 卵泡液(PFF) |
| 2.2.5 卵丘细胞 |
| 2.2.6 Ca~(2+)及钙调素 |
| 2.2.7 巯基物质 |
| 3 氧化应激与胚胎发育的关系 |
| 3.1 活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和氧化应激的产生 |
| 3.2 在卵子发生过程中的ROS和氧化还原反应 |
| 3.3 在胚胎发育过程中的ROS和氧化还原反应 |
| 3.4 卵母细胞体外成熟中的氧化应激 |
| 4 抗氧化系统 |
| 4.1 抗氧化剂的分类 |
| 4.2 抗氧化剂与体外成熟 |
| 5 巯基类还原剂 |
| 5.1 β-巯基乙醇(β-ME) |
| 5.2 二硫苏糖醇(DTT) |
| 5.3 三(2-羧基乙基)膦盐酸盐 |
| 6 研究目的与意义 |
| 第二章 TCEP-HCL对卵母细胞成熟、体外受精和胚胎发育能力的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 卵巢 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 仪器设备 |
| 1.1.4 实验耗材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 卵母细胞的收集和体外培养 |
| 1.2.2 体外受精和胚胎培养 |
| 1.2.3 核成熟和体外受精状态的评估 |
| 1.2.4 胚胎发育的评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 TCEP-HCL对猪卵母细胞核成熟及体外受精的影响 |
| 2.2 TCEP-HCL对猪卵母细胞体外受精胚胎发育能力的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 TCEP-HCL对卵母细胞质量的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 卵巢 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 仪器设备 |
| 1.1.4 实验耗材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 卵母细胞的收集和体外培养 |
| 1.2.2 卵母细胞成熟后细胞内GSH和 ROS含量的检测 |
| 1.2.3 RT-qPCR |
| 1.2.4 卵母细胞体外成熟后线粒体含量的测定 |
| 1.2.5 卵母细胞凋亡的测定 |
| 1.2.6 囊胚凋亡细胞的测定 |
| 2 结果 |
| 2.1 TCEP-HCL对猪卵母细胞GSH和 ROS水平的影响 |
| 2.2 TCEP-HCL对猪卵母细胞线粒体含量的影响 |
| 2.3 TCEP-HCL对猪卵母细胞细胞凋亡的影响 |
| 2.4 TCEP-HCL对体外受精囊胚细胞凋亡的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（3）低氧浓度对牦牛卵母细胞和附植前胚胎发育的影响及其作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 文献综述 |
| 第一章 哺乳动物卵母细胞的成熟和附植前胚胎的发育及其细胞凋亡 |
| 1 卵母细胞的成熟 |
| 1.1 卵巢与卵泡的形成 |
| 1.2 卵母细胞体内发育过程 |
| 1.3 卵母细胞的成熟 |
| 1.4 卵丘细胞在卵母细胞成熟中的作用 |
| 2 孤雌激活 |
| 2.1 孤雌激活 |
| 2.2 孤雌激活方式 |
| 3 体外受精胚胎发育的影响 |
| 4 细胞凋亡 |
| 第二章 低氧浓度对哺乳动物卵母细胞的成熟和附植前胚胎的发育的影响 |
| 1 雌性哺乳动物生殖器官中氧浓度的变化及生理学作用 |
| 2 氧化应激 |
| 2.1 活性氧的产生及生理意义 |
| 2.2 活性氧对卵母细胞成熟和胚胎发育的作用 |
| 3 低氧对胚胎发育的影响 |
| 4 p38丝裂原活化蛋白激酶 |
| 实验研究 |
| 第三章 不同氧气浓度对牦牛卵母细胞及后续孤雌激活胚胎发育的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 卵母细胞的采集及体外成熟培养 |
| 1.3 卵母细胞成熟的评估 |
| 1.4 孤雌激活和胚胎发育的评估 |
| 1.5 引物设计 |
| 1.6 牦牛COCs RNA的提取和反转录 |
| 1.7 qRT-PCR检测不同氧气浓度组牦牛COCs中与卵母细胞发育能力相关基因的表达 |
| 1.8 Western blotting检测不同氧气浓度组牦牛COCs中与卵母细胞发育能力相关蛋白的表达 |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同氧气浓度对牦牛卵母细胞成熟的影响 |
| 2.2 不同氧气浓度对牦牛孤雌激活胚胎发育潜能的影响 |
| 2.3 不同氧气浓度对牦牛COCs中卵母细胞发育能力相关基因的表达影响 |
| 2.4 不同氧气浓度对牦牛COCs中卵母细胞发育能力相关蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 不同氧气浓度对牦牛卵母细胞HIF-1α和VEGF表达的影响及其与细胞凋亡的关联性分析 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 样品的采集及卵母细胞的体外成熟培养 |
| 1.3 免疫组织化学法检测HIF-1α和VEGF在牦牛卵巢中的定位 |
| 1.4 引物设计 |
| 1.5 牦牛COCs总RNA的提取和反转录 |
| 1.6 qRT-PCR检测牦牛COCs中HIF-1α、VEGF及凋亡相关基因的表达 |
| 1.7 Westernblotting检测牦牛COCs中 HIF-1α、VEGF及凋亡相关蛋白的表达 |
| 1.8 不同氧气浓度下牦牛COCs的细胞凋亡检测 |
| 1.9 免疫荧光染色法检测不同氧气浓度组牦牛COCs中HIF-1α和VEGF蛋白的表达 |
| 1.10 数据分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 HIF-1α和VEGF在牦牛卵巢中的定位 |
| 2.2 不同氧气浓度对牦牛COCs中HIF-1α、VEGF及凋亡相关基因的表达影响 |
| 2.3 不同氧气浓度对牦牛COCs中HIF-1α、VEGF及凋亡相关蛋白的表达影响 |
| 2.4 不同氧气浓度对牦牛COCs中细胞凋亡的影响 |
| 2.5 不同氧气浓度组牦牛COCs中HIF-1α和VEGF蛋白的表达定位 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 不同氧气浓度对牦牛体外受精胚胎发育及其凋亡的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 卵母细胞的采集及体外成熟培养 |
| 1.3 牦牛卵母细胞的体外受精及胚胎发育的评估 |
| 1.4 牦牛囊胚的差异染色及细胞计数 |
| 1.5 牦牛囊胚的细胞凋亡检测 |
| 1.6 引物设计 |
| 1.7 牦牛囊胚RNA的提取和反转录 |
| 1.8 qRT-PCR检测牦牛囊胚中与胚胎发育能力以及凋亡相关基因的表达 |
| 1.9 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎发育的影响 |
| 2.2 低氧浓度对牦牛体外受精囊胚细胞数的影响 |
| 2.3 低氧浓度对牦牛囊胚细胞凋亡的影响 |
| 2.4 低氧浓度对牦牛体外受精囊胚中与胚胎发育和凋亡相关基因的表达影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第六章 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎p38 MAPK和HIF-1α表达的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料与试剂 |
| 1.2 卵母细胞的采集及体外成熟培养 |
| 1.3 牦牛卵母细胞的体外受精 |
| 1.4 引物设计 |
| 1.5 牦牛不同阶段体外受精胚胎总RNA的提取和反转录 |
| 1.6 qRT-PCR检测牦牛不同阶段体外受精胚胎中p38MAPK和HIF-1α基因的表达 |
| 1.7 免疫荧光染色法检测不同阶段体外受精胚胎中p38MAPK和HIF-1α蛋白的表达 |
| 1.8 数据分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎中HIF-1α基因的表达影响 |
| 2.2 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎中p38 MAPK基因的表达影响 |
| 2.3 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎中HIF-1α蛋白的表达和定位 |
| 2.4 低氧浓度对牦牛体外受精胚胎中p38 MAPK蛋白的表达和定位 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（4）EGF与IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 缩略词 |
| 主要仪器 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 卵丘细胞在雌性哺乳动物早期生殖事件中的作用 |
| 1.1 卵泡发生发育及卵泡闭锁 |
| 1.2 卵丘细胞的发生及分化 |
| 1.3 卵丘细胞对卵母细胞发育及成熟的影响 |
| 1.4 卵丘细胞在卵母细胞受精和早期胚胎发育中的作用 |
| 1.5 牦牛卵丘细胞的研究意义 |
| 2 细胞自噬的研究进展 |
| 2.1 细胞自噬概念及相关信号通路 |
| 2.2 细胞自噬与哺乳动物生殖的关系 |
| 3 小窝蛋白介导的胞吞研究进展 |
| 3.1 小窝蛋白和胞吞简介 |
| 3.1.1 胞吞的结构基础——小窝 |
| 3.1.2 胞吞的功能使者——小窝蛋白 |
| 3.2 小窝蛋白在哺乳动物生殖中的相关研究 |
| 3.3 胞吞与自噬的联系 |
| 4 EGF和 IGF-1 的研究进展 |
| 4.1 EGF简介及相关研究进展 |
| 4.2 IGF-1简介及相关研究进展 |
| 5 本研究的目的及意义 |
| 第二部分 试验研究 |
| 实验一 自噬及胞吞相关蛋白表达在牦牛卵丘细胞中的表达定位 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 牦牛卵巢样品的采集 |
| 1.1.2 主要试剂及配制 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 牦牛卵丘细胞的分离培养及冻存 |
| 1.2.2 间接免疫荧光检测自噬及胞吞相关蛋白在牦牛卵丘细胞中的分布 |
| 2 结果分析 |
| 2.1 牦牛卵丘细胞培养 |
| 2.2 自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、LC3 在牦牛卵丘细胞中的分布 |
| 2.3 胞吞相关蛋白Cav1、Cav2 在牦牛卵丘细胞中的分布 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 EGF 对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 PCR检测牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关基因mRNA的表达 |
| 1.3 Western-blot检测牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白的表达 |
| 1.4 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 普通PCR验证引物及模板 |
| 2.2 EGF对牦牛卵丘细胞自噬相关基因Atg5、Beclin1、LC3 表达的影响 |
| 2.3 EGF对牦牛卵丘细胞胞吞相关基因Cav1、Cav2 表达的影响 |
| 2.4 EGF对牦牛卵丘细胞自噬相关蛋白Atg5、Atg5-Atg12、Beclin1、LC3 表达的影响 |
| 2.5 EGF对牦牛卵丘细胞胞吞相关蛋白Cav1、Cav2 表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验三 IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 PCR检测牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关基因mRNA的表达 |
| 1.3 Western-blot检测牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白的表达 |
| 1.4 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 普通PCR验证引物及模板 |
| 2.2 IGF-1 对牦牛卵丘细胞自噬相关基因Atg5、Beclin1、LC3 表达的影响 |
| 2.3 IGF-1 对牦牛卵丘细胞胞吞相关基因Cav1、Cav2 表达的影响 |
| 2.4 IGF-1 对牦牛卵丘细胞自噬相关蛋白Atg5、Atg5-Atg12、Beclin1、LC3 表达的影响 |
| 2.5 IGF-1 对牦牛卵丘细胞自噬相关蛋白Cav1、Cav2 表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者介绍 |
（5）针刺对卵巢储备功能减退模型大鼠HPO轴及FSH-cAMP信号通路的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 卵巢储备功能减退的生物学机制研究进展 |
| 1. 下丘脑-垂体-卵巢轴功能紊乱与卵巢储备功能减退生物学机制 |
| 2. 氧化应激参与卵巢储备功能减退生物学机制 |
| 3. 自身免疫反应参与卵巢储备功能减退生物学机制 |
| 4. 基因功能异常与卵巢储备功能减退生物学机制 |
| 5. 线粒体功能异常参与卵巢储备功能减退生物学机制 |
| 6. 脑源性神经营养因子参与卵巢储备功能减退生物学机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 针刺改善卵巢储备功能的动物学实验研究进展 |
| 1. 现有的卵巢储备功能减退模型 |
| 2. 针刺干预卵巢储备功能减退的机理研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一: DOR动物模型的建立及验证 |
| 1. 材料及方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 实验二: 针刺对DOR大鼠的HPO轴及FSH-cAMP信号通路的影响 |
| 1. 材料及方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 结论 |
| 本研究的不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）HMGB1/TLR2对奶牛卵巢颗粒细胞排卵相关基因的影响及姜黄素对其干预作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 科学问题 |
| 1.2 选题背景和意义 |
| 1.3 TLRs及其在卵巢活动中的作用 |
| 1.3.1 Toll样受体家族概况 |
| 1.3.2 家畜的TLRs及其在卵巢中的表达 |
| 1.3.3 TLRs在卵巢活动中的作用 |
| 1.4 HMGB1及其对卵巢功能的影响 |
| 1.4.1 HMGB1的损伤相关分子模式作用 |
| 1.4.2 HMGB1的生物学功能 |
| 1.4.3 HMGB1释放的机制 |
| 1.4.4 HMGB1受体和炎症反应 |
| 1.4.5 卵巢中的HMGB1 |
| 1.5 姜黄素针对TLRs的抗炎作用及其对生殖的影响 |
| 1.5.1 姜黄素的安全性评价及其药理作用 |
| 1.5.2 姜黄素的作用靶点 |
| 1.5.3 姜黄素抑制TLRs的分子机制 |
| 1.5.4 姜黄素对生殖系统的影响 |
| 第二章 奶牛不同发育阶段卵泡颗粒细胞中TLRs/HMGB1 表达差异分析 |
| 2.1 材料与仪器设备 |
| 2.1.1 主要试剂及耗材 |
| 2.1.2 仪器与设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 奶牛卵巢颗粒细胞的分离与培养 |
| 2.2.2 免疫细胞化学 |
| 2.2.3 奶牛卵巢颗粒细胞总RNA的提取及c DNA的合成 |
| 2.2.4 q RT-PCR |
| 2.2.5 蛋白免疫印迹 |
| 2.2.6 免疫共沉淀 |
| 2.2.7 免疫组织化学 |
| 2.2.8 数据统计与分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 奶牛卵巢颗粒细胞形态及鉴定 |
| 2.3.2 奶牛卵巢颗粒细胞TLRs基因转录水平差异 |
| 2.3.3 奶牛卵巢颗粒细胞TLRs及 HMGB1 蛋白水平表达差异 |
| 2.3.4 奶牛卵巢颗粒细胞TLRs与 HMGB1 交叉对话 |
| 2.3.5 奶牛卵巢颗粒细胞层中TLRs及 HMGB1 的表达 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 FSH对颗粒细胞HMGB1/TLRs表达的调控作用 |
| 3.1 材料与仪器设备 |
| 3.1.1 主要试剂及耗材 |
| 3.1.2 设备与仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 奶牛卵巢颗粒细胞的分离与培养 |
| 3.2.2 MTT实验 |
| 3.2.3 细胞凋亡检测 |
| 3.2.4 FSH处理卵巢颗粒细胞 |
| 3.2.5 奶牛卵巢颗粒细胞总RNA的提取及c DNA的合成 |
| 3.2.6 q RT-PCR |
| 3.2.7 蛋白免疫印迹 |
| 3.2.8 数据统计与分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 FSH对奶牛卵巢颗粒细胞活性的影响 |
| 3.3.2 FSH对奶牛卵巢颗粒细胞凋亡的影响 |
| 3.3.3 FSH对卵泡颗粒细胞中HMGB1/TLRs m RNA水平的调控作用 |
| 3.3.4 FSH对卵泡颗粒细胞中HMGB1/TLRs蛋白水平的调控作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 HMGB1 对卵泡颗粒细胞TLR2 信号通路与排卵相关基因的影响 |
| 4.1 材料与仪器设备 |
| 4.1.1 主要试剂及耗材 |
| 4.1.2 仪器与设备 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 奶牛卵巢颗粒细胞的分离与培养 |
| 4.2.2 MTT实验 |
| 4.2.3 siRNA合成与细胞转染 |
| 4.2.4 细胞处理 |
| 4.2.5 奶牛卵巢颗粒细胞总RNA的提取及cDNA的合成 |
| 4.2.6 qRT-PCR |
| 4.2.7 蛋白免疫印迹 |
| 4.2.8 间接免疫荧光 |
| 4.2.9 免疫共沉淀 |
| 4.2.10 酶联免疫吸附试验 |
| 4.2.11 数据统计 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 HMGB1对颗粒细胞活性的影响 |
| 4.3.2 TLR2基因沉默 |
| 4.3.3 HMGB1对TLR2 及排卵相关基因mRNA水平的影响 |
| 4.3.4 HMGB1对TLR2/NF-κB的影响 |
| 4.3.5 HMGB1对NF-κB核易位的影响 |
| 4.3.6 浓度对HMGB1 结合TLR2、TLR1、TLR6及p-NF-κB p65 蛋白的影响 |
| 4.3.7 HMGB1对IL-6与TNF-α表达水平的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 姜黄素干预卵泡颗粒细胞HMGB1/TLR2 信号通路对排卵相关基因的影响 |
| 5.1 材料与仪器设备 |
| 5.1.1 主要试剂及耗材 |
| 5.1.2 仪器与设备 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 奶牛卵巢颗粒细胞的分离与培养 |
| 5.2.2 MTT实验 |
| 5.2.3 细胞凋亡检测 |
| 5.2.4 细胞处理 |
| 5.2.5 奶牛卵巢颗粒细胞总RNA的提取及c DNA的合成 |
| 5.2.6 q RT-PCR |
| 5.2.7 蛋白免疫印迹 |
| 5.2.8 间接免疫荧光 |
| 5.2.9 免疫共沉淀 |
| 5.2.10 ELISA |
| 5.2.11 数据统计 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 姜黄素对颗粒细胞活性的影响 |
| 5.3.2 姜黄素对颗粒细胞凋亡及坏死的影响 |
| 5.3.3 姜黄素对HMGB1 诱导的TLR2 及排卵相关基因转录水平的影响 |
| 5.3.4 姜黄素对HMGB1 诱导的TLR2/NF-κB蛋白水平的影响 |
| 5.3.5 姜黄素对HMGB1 诱导的NF-κB核易位的影响 |
| 5.3.6 姜黄素对HMGB1与TLR1、TLR2、TLR6、p-NF-κB p65 结合水平的影响 |
| 5.3.7 姜黄素对HMGB1 诱导的IL-6及TNF-α表达水平的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 结论 |
| 6.1 全文结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（7）AdipoQ及AdipoRs对鸡卵巢颗粒细胞生殖激素分泌和相关基因表达的影响（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 家禽卵巢结构及发育特征 |
| 1.1.1 鸡卵巢结构及发育特点 |
| 1.1.2 鸡卵泡结构及发育特点 |
| 1.1.3 鸡卵巢颗粒细胞的结构及发育特点 |
| 1.2 AdipoQ的研究概况 |
| 1.2.1 脂肪因子对生殖功能的影响 |
| 1.2.2 AdipoQ结构及代谢功能 |
| 1.2.3 AdipoRs结构及代谢功能 |
| 1.2.4 AdipoQ及AdipoRs在动物生殖调控中的作用 |
| 1.2.5 AdipoRon的研究概况 |
| 1.3 本研究的目的和意义 |
| 2 试验一 AdipoQ及AdipoRs基因在鸡组织和卵巢中的表达分布情况 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验试剂和设备 |
| 2.1.3 分离培养鸡卵巢原代颗粒细胞过程 |
| 2.1.4 引物设计 |
| 2.1.5 反转录与荧光定量 |
| 2.1.6 石蜡切片免疫组化实验步骤 |
| 2.1.7 数据处理和分析 |
| 2.2 结果分析 |
| 2.2.1 总RNA质量检测 |
| 2.2.2 颗粒细胞的鉴定 |
| 2.2.3 AdipoQ及其受体在鸡产蛋高峰期不同组织中的表达变化 |
| 2.2.4 AdipoQ及其受体在鸡产蛋高峰期不同卵泡中的表达变化 |
| 2.2.5 AdipoQ及其受体在卵泡细胞中的表达 |
| 2.2.6 AdipoQ及其受体在鸡产蛋高峰期卵巢和卵泡中的免疫定位 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 3 试验二 AdipoRon对颗粒细胞增殖、凋亡及分泌功能的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 CCK-8法检测卵巢颗粒细胞活力 |
| 3.1.4 流式细胞仪检测卵巢颗粒细胞凋亡 |
| 3.1.5 ELISA法检测血清、卵泡液及细胞培养液中相关激素的分泌 |
| 3.1.6 数据处理和分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 血清和卵泡液中AdipoQ及其受体含量 |
| 3.2.2 不同浓度的AdipoRon对鸡卵巢颗粒细胞活力的影响 |
| 3.2.3 不同浓度的AdipoRon对卵巢颗粒细胞凋亡的影响 |
| 3.2.4 不同浓度的AdipoRon对体外培养鸡卵巢颗粒细胞AdipoQ、AdipoR1、FSH、AdipoR2、GnRH、LH、PROG、E2分泌的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 4 试验三 过表达或干扰AdipoRs和AdipoRon共处理对原代卵巢颗粒细胞的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验动物 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器设备 |
| 4.1.3 Western blot检测 |
| 4.1.4 过表达载体的构建 |
| 4.1.4.1 设计并合成引物 |
| 4.1.4.2 载体的双酶切 |
| 4.1.4.3 目的片段的扩增 |
| 4.1.4.4 过表达载体与目的片段的连接（无缝克隆） |
| 4.1.4.5 转化 |
| 4.1.4.6 阳性克隆鉴定 |
| 4.1.4.7 质粒抽提 |
| 4.1.5 细胞转染试验 |
| 4.1.6 ELISA法检测细胞培养液中相关激素的分泌 |
| 4.1.7 设计引物 |
| 4.1.8 反转录与荧光定量 |
| 4.1.9 数据处理与分析 |
| 4.2 结果分析 |
| 4.2.1 测序结果 |
| 4.2.2 AdipoR1和AdipoR2对颗粒细胞干扰和过表达的结果 |
| 4.2.3 干扰AdipoR1和AdipoRon共同处理卵巢颗粒细胞生殖受体相关基因表达的影响 |
| 4.2.4 干扰AdipoR2和AdipoRon共同处理对卵巢颗粒细胞生殖受体相关基因表达的影响 |
| 4.2.5 过表达AdipoR1和AdipoRon共同处理对卵巢颗粒细胞生殖受体相关基因表达的影响 |
| 4.2.6 过表达AdipoR2和AdipoRon共同处理对卵巢颗粒细胞生殖受体相关基因表达的影响 |
| 4.2.7 干扰AdipoR1和AdipoRon共同处理对卵巢颗粒细胞生殖激素分泌的影响 |
| 4.2.8 干扰AdipoR2和AdipoRon共同处理对卵巢颗粒细胞生殖激素分泌的影响 |
| 4.2.9 过表达AdipoR1和AdipoRon共同处理对卵巢颗粒细胞生殖激素分泌的影响 |
| 4.2.10 过表达AdipoR2和AdipoRon共同处理对卵巢颗粒细胞生殖激素分泌的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 5 全文结论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
（8）Sirtuin家族基因在卵泡发育过程中的作用及分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词索引 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验对象及试剂 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 主要实验耗材、仪器 |
| 2.1.4 实验试剂的配置 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 细胞的分离及培养 |
| 2.2.2 小鼠卵巢切除及体外培养 |
| 2.2.3 HE染色及各级卵泡的识别 |
| 2.2.4 免疫组化 |
| 2.2.5 转染及感染 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR (Real-time qPCR) |
| 2.2.7 蛋白印迹(Western Blot) |
| 2.2.8 细胞增殖实验 |
| 2.2.9 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 SIRTUIN亚型于小鼠卵巢各发育时期的差异表达模式 |
| 3.2 SIRTUIN1/4/6于小鼠卵巢各发育时期的亚细胞定位 |
| 3.3 过表达SIRTUIN1可有效减慢早期小鼠卵泡发育速度 |
| 3.4 SIRTUIN1可抑制颗粒细胞增殖 |
| 3.5 过表达SIRTUIN1可抑制颗粒细胞凋亡 |
| 3.6 SIRTUIN1可能与调节线粒体功能相关 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 SIRTUIN家族与女性生殖系统疾病相关性研究 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（9）MicroRNA-18b调控兔卵巢颗粒细胞功能的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 前言 |
| 1.1 哺乳动物的卵泡与颗粒细胞 |
| 1.1.1 卵泡生长和发育 |
| 1.1.2 颗粒细胞与卵泡发育的研究 |
| 1.2 卵泡发育过程中的激素的功能及相关调控机制 |
| 1.2.1 卵泡发育过程中的激素的功能 |
| 1.2.2 雌激素受体的研究进展 |
| 1.3 MIRNA与卵巢 |
| 1.3.1 micro RNAs在卵巢中的表达 |
| 1.3.2 miR-18b的研究进展 |
| 1.4 本研究的目的及意义 |
| 第二章 MIR-18B的生物信息学分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 miR-18b前体序列及成熟序列的分析 |
| 2.2.2 miR-18b靶基因预测及分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 MIR-18B对颗粒细胞增殖凋亡的作用 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 分离培养颗粒细胞并鉴定 |
| 3.2.2 miR-18b过表达和抑制效率检测 |
| 3.2.3 miR-18b对颗粒细胞增殖及细胞周期的影响 |
| 3.2.4 miR-18b对凋亡相关基因的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 MIR-18B对颗粒细胞功能的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 miR-18b抑制兔颗粒细胞E2合成 |
| 4.2.2 miR-18b对雌激素相关信号通路的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 MIR-18B靶基因的验证 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验材料 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 miR-18b直接靶向ESR1 |
| 5.2.2 miR-18b和 ESR1 呈负相关表达模式 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）SIRT2对牛卵母细胞成熟与老化的作用及其机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 卵母细胞成熟的分子机制 |
| 1.2 卵母细胞老化的分子机制 |
| 1.2.1 细胞形态学和生物学变化 |
| 1.2.2 卵母细胞老化的分子变化 |
| 1.3 卵丘-卵母细胞间隙连接通讯的研究进展 |
| 1.4 卵巢类固醇激素合成的研究进展 |
| 1.4.1 卵巢类固醇激素的合成 |
| 1.4.2 卵巢颗粒细胞类固醇合成分子机制 |
| 1.5 SIRT2对卵巢功能的调控 |
| 1.5.1 SIRT2的生物学功能 |
| 1.5.2 SIRT2与卵母细胞成熟 |
| 1.5.3 SIRT2与卵母细胞老化 |
| 1.5.4 SIRT2与卵巢颗粒细胞激素分泌 |
| 1.6 本研究的目的与意义 |
| 第二章 SIRT2在牛卵母细胞成熟和老化过程中的表达规律 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试验材料 |
| 2.2.2 试验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 Sirtuins家族在牛卵母细胞中表达 |
| 2.3.2 SIRT2在牛卵巢组织中表达 |
| 2.3.3 SIRT2在牛卵母细胞成熟和胚胎发育过程中的表达规律 |
| 2.3.4 Sirtuins家族在牛卵母细胞老化过程中的表达规律 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 SIRT2调节牛卵母细胞核和胞质成熟 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 试验材料 |
| 3.2.2 试验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 Sir Real2 有效抑制牛卵母细胞的SIRT2 活性 |
| 3.3.2 SIRT2失活抑制减数分裂 |
| 3.3.3 SIRT2失活扰乱纺锤体形成和染色体分离 |
| 3.3.4 SIRT2失活抑制胞质成熟 |
| 3.3.5 SIRT2失活导致线粒体功能障碍 |
| 3.3.6 SIRT2调节线粒体的生物合成和动力学 |
| 3.3.7 SIRT2 通过Fox O3a–Sod2/Cat信号轴调节ROS水平 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 SIRT2调节牛卵丘-卵母细胞复合体间隙连接通讯 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试验材料 |
| 4.2.2 试验方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 SIRT2调节牛卵丘-卵母细胞复合体的间隙连接通讯 |
| 4.3.2 SIRT2 失活通过激活MEK/ERK信号途径促进Cx43 磷酸化 |
| 4.3.3 MEK/ERK信号途径参与SIRT2 介导的间隙连接通讯 |
| 4.3.4 SIRT2 通过去乙酰化作用促进Cx43 膜定位 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 SIRT2调节牛卵母细胞成熟微环境的类固醇激素分泌 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 试验材料 |
| 5.2.2 试验方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 原代牛卵巢颗粒细胞的活力和鉴定 |
| 5.3.2 抑制剂或激活剂在牛卵巢颗粒细胞中的浓度筛选 |
| 5.3.3 干扰载体质粒有效抑制SIRT2的表达 |
| 5.3.4 SIRT2调节类固醇激素的分泌及其受体的表达 |
| 5.3.5 SIRT2 调节PPARs/LXRs信号途径 |
| 5.3.6 SIRT2 通过PPARs/LXRα通路调节类固醇激素分泌 |
| 5.3.7 SIRT2 依赖LXRα调节类固醇激素合成途径 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 SIRT2对牛卵母细胞老化的影响机制 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 试验材料 |
| 6.2.2 试验方法 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 SIRT2失活促进牛卵母细胞老化 |
| 6.3.2 SIRT2失活加重老化牛卵母细胞的氧化应激和线粒体功能障碍 |
| 6.3.3 SIRT2介导老化牛卵母细胞的自噬活性 |
| 6.3.4 SIRT2失活诱导过度自噬引起的老化牛卵母细胞凋亡 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 第七章 结论 |
| 创新点 |
| 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、哺乳动物卵巢中的细胞凋亡及其调节（论文参考文献）
- [1]热应激影响蛋鸡等级前卵泡发育的机理研究[D]. 李桂明. 山东农业大学, 2020
- [2]三（2-羧基乙基）膦盐酸盐处理对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育能力的影响研究[D]. 曾毅仁. 广西大学, 2020(07)
- [3]低氧浓度对牦牛卵母细胞和附植前胚胎发育的影响及其作用机制的研究[D]. 何翃闳. 甘肃农业大学, 2020(01)
- [4]EGF与IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响[D]. 马睿. 甘肃农业大学, 2020
- [5]针刺对卵巢储备功能减退模型大鼠HPO轴及FSH-cAMP信号通路的影响[D]. 尹雅倩. 中国中医科学院, 2020(01)
- [6]HMGB1/TLR2对奶牛卵巢颗粒细胞排卵相关基因的影响及姜黄素对其干预作用[D]. 解颖颖. 中国农业科学院, 2020
- [7]AdipoQ及AdipoRs对鸡卵巢颗粒细胞生殖激素分泌和相关基因表达的影响[D]. 马雪杰. 河南农业大学, 2020
- [8]Sirtuin家族基因在卵泡发育过程中的作用及分子机制研究[D]. 孔德琦. 郑州大学, 2020(02)
- [9]MicroRNA-18b调控兔卵巢颗粒细胞功能的研究[D]. 李泽. 西北农林科技大学, 2020(02)
- [10]SIRT2对牛卵母细胞成熟与老化的作用及其机制[D]. 徐德军. 西北农林科技大学, 2020(02)