一、胎儿和少儿皮肤内碱性成纤维细胞生长因子及其受体的基因表达（论文文献综述）
刘大海[1]（2020）在《双酚S通过调节碱性成纤维细胞生长因子影响恶性血管瘤细胞生物学特性的机制》文中指出研究背景血管瘤是常见的良性病变,由中胚层血管组织过度增生引起。血管瘤会给患者带来沉重的身心负担,尤其是对于皮肤病变患者。药物治疗和外科手术是血管瘤治疗的主要方法。但是,仍然有25%的血管瘤患者接受切除手术后仍存在症状。据报道,约75%–80%的血管瘤患者是女性。女性优势的详细原因尚不清楚。据报道,健康儿童的雌二醇水平低于血管瘤患者。增殖的血管瘤组织中的血清雌二醇水平高于渐开线阶段的水平。实验室研究表明,雌激素可促进血管瘤细胞的体外增殖,这可能取决于某些生长因子并被他莫昔芬抑制。此外,雌激素和VEGF对血管瘤细胞的增殖具有协同作用。所有这些数据表明,雌激素信号对血管瘤进展具有积极作用。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）是6个配体家族。VEGFA是与内皮增殖,迁移和存活相关的主要生长因子。成纤维细胞生长因子（Fibroblast growth factor,FGFs）由22个分子组成,与结构相关。根据新的命名法,FGF被连续编号,碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）被称为FGF-2。FGF和VEGF诱导的形态差异毛细血管论证了这些生长因子在血管生成中的不同作用。众所周知,VEGF是血管通透性的强力诱导剂,可引起水肿并导致高浓度血管瘤的形成。但是,尚未报告这些有害作用与此相关,反而FGF诱导的新形成的血管通常情况下功能表征成熟,且毛细血管壁细胞增加了。双酚S可以通过Snail的诱导在血管瘤细胞中诱导上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）。目的:（1）探究双酚S通过调节碱性成纤维细胞生长因子诱发血管瘤细胞恶性变的机制。（2）探究BPS通过增加HA细胞中碱性成纤维细胞生长因子（Basic fibroblast growth factor,bFGF）的表达增加HA细胞增殖和迁移的机制。（3）探究BPS通过激活和增加HIF-1α增加bFGF表达的分子机制。（4）探究BPS通过上调HIF-1α和下调miR-195来增加bFGF的表达来触发HA细胞的恶性发展的机制。方法:（1）原代HA衍生内皮细胞（HDEC）和CRL‐2586细胞在含10%FBS的DMEM培养基中培养保存,使用含有相同浓度（小于0.5%）的DMSO（对细胞无毒作用）的培养基作为对照。细胞增殖测定,细胞群落形成试验,细胞周期分析,实时RT-PCR分析,蛋白质印迹分析,酶联免疫吸附试验,启动子活性分析。（2）研究中使用血管瘤来源的内皮细胞（Hemangio-derived endothelial cells,HDEC）,将细胞保存在含有10%的内皮基础培养基（EBM-2）中。将HDEC接种于RPMI1640中,其中补充了10%热灭活的胎牛血清,链霉素和青霉素（100U/mL）,于37℃,5%CO2的湿润气氛下培养。根据实验要求将细胞分为以下几组:对照组（正常培养的细胞系作为实验对照）,BPS处理组（使用浓度80μM的BPS处理细胞）,miR-424的过表达组（将100 pmol miR-424模拟物添加到HDEC进行转染）,抑制剂组（使用BAY 11-7082对BPS诱导的HDEC进行处理）。逆转录定量PCR（RT-qPCR）实时分析bFGF、VEGF、FGFR1、p65 mRNA表达。用MTT测定法分析HDEC增殖活力。流式细胞仪分析细胞凋亡。Transwell分析检测细胞迁移。蛋白质印迹分析检测miR-424对bFGF/FGFR1通路蛋白表达的影响。（3）内皮细胞系来源于血管瘤组织,在补充有10 ng/ml表皮生长因子和15%胎牛血清加上100 U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI-1640培养基（Invitrogen,卡尔斯巴德,加利福尼亚州,美国）中培养细胞系,环境温度37°C下,含有5%CO2的潮湿环境。根据实验将培养细胞分为以下分组:对照组（正常培养的细胞系作为实验对照）,BPS处理组（用100μMBPS处理细胞,并孵育24小时）,HIF-1α抑制组（BPS处理前使用一定浓度的HIF-1α抑制剂NS398同细胞一起孵育）,siRNA敲低HIF-1α组（使用X-tremeGene siRNA转染试剂在不含抗生素的人内皮无血清培养基中进行转染,每个样品使用1μg siRNA）,除实验处理不同外各组细胞的培养条件都相同。蛋白印迹分析细胞中HIF-1α及bFGF蛋白表达;MTT测定细胞增殖;TUNEL分析细胞的凋亡情况;逆转录定量PCR（RT-qPCR）实时分析STAT3和Bcl-2的mRNA表达。（4）作为双酚A（Bisphenol A,BPA）的替代品,双酚S（Bisphenol S,BPS）已应用于我们日常生活中的消费产品。具有与BPA类似的化学结构,BPS还被证明是一种外源性内分泌干扰化学物质。HA来源的内皮细胞（HA-derived endothelial cells,HDEC）细胞系购自北京安必奇生物科技有限公司。HDEC细胞系在Dulbecco改良的Eagle培养基中添加10%热灭活的胎牛血清,100 U/每毫升青霉素和100μg/mL链霉素将其置于37°C含5%CO2的潮湿气氛中。将Lv-HIF-1α过表达载体和miR-195模拟物或抑制剂转染到HAs细胞中,并进行进一步的功能实验。通过蛋白质免疫印迹检测BPS诱导后miR-195、bFGF和VEGF蛋白含量。通过MTT测定法评价细胞增殖活性。通过流式细胞仪分析细胞凋亡指数。使用miRWalk 2.0进行生物信息分析,筛选miR-195的靶基因。将带有HIF-1α野生型（WT）3’-UTR或突变的3’-UTR的pmirGLO报告载体与miR-195模拟物或抑制剂共转染入HDEC细胞。转染后48小时,用双重荧光素酶报告系统检查荧光素酶活性。通过qRT-PCR检测miR-195、HIF-1α和bFGF的表达。结果:（1）细胞群落形成分析表明,10nm BPS也能显着地触发HDEC和CRL-2586细胞的定植。细胞周期分析表明,BPS组G0/G1期细胞数量减少。BPS可通过诱导细胞周期转换而触发HA细胞的增殖。在BPS HA细胞增加bFGF的表达。bFGF参与了BPS诱导的HA细胞增殖。bFGF可以提高bFGF的转录和mRNA的稳定性。NF-κB参与BPS诱导的HA细胞bFGF表达。miR-155-5p参与BPS增加的bFGF mRNA稳定性。（2）BPS处理组较对照组bFGF、VEGF、FGFR1的mRNA表达升高（P<0.05）。说明BPS促进血管瘤细胞bFGF、VEGF、FGFR1的转录表达。第24小时和第36小时BPS处理组较对照组细胞增值率升高（P<0.05）,第72小时BPS处理组较对照组细胞增值率升高（P<0.01）。BPS处理组较对照组细胞凋亡率降低（P<0.05）,BPS处理组较对照组细胞活力升高（P<0.05）。BPS处理组较对照组细胞迁移数量增加（P<0.05）,BPS处理组较对照组细胞侵袭数量增加（P<0.05）,说明BPS可促进细胞的迁移侵袭。抑制剂组较BPS处理组p65mRNA表达升高（P<0.05）,BPS处理组较对照组p65mRNA表达无差异（P>0.05）,抑制剂组较BPS处理组和对照组bFGFmRNA表达降低（P<0.05）,BPS处理组较对照组bFGFmRNA表达升高（P<0.05）。miR-424的过表达组较BPS处理组和对照组bFGF/FGFR1、ERK1/2蛋白表达降低（P<0.05）,BPS处理组较对照组bFGF/FGFR1、ERK1/2蛋白表达升高（P<0.05）。说明miR-424的过量表达阻断了bFGF/FGFR1途径,且miR-424过表达显着抑制ERK1/2磷酸化。（3）BPS（0μM）较BPS（50μM）HIF-1α、bFGF蛋白表达降低（P<0.05）,BPS（50μM）较BPS（200μM）HIF-1α、bFGF蛋白表达降低（P<0.05）,结果表明,BPS以剂量依赖的方式促进了HIF-1α、bFGF的蛋白表达。第72小时较第48小时、24小时HIF-1α及bFGF蛋白表达升高（P<0.05）,第48小时较第24小时HIF-1α及bFGF蛋白表达升高（P<0.05）,表明,HIF-1α和bFGF表达在24 h时增加,并持续增加直至72 h。通过MTT测定细胞增殖力情况,第24小时、48小时BPS处理组较对照组细胞增殖增加（P<0.05）,第72小时对照组较BPS处理组细胞增殖降低（P<0.01）。BPS处理组较对照组HIF-1α、bFGF蛋白表达升高（P<0.05）,HIF-1α抑制组较BPS处理组HIF-1α、bFGF蛋白表达降低（P<0.05）。结果表明,BPS对细胞的影响通过是通过HIF-1α的激活来增加bFGF的蛋白表达。对照组较BPS处理组STAT3、Bcl-2 mRNA表达降低（P<0.05）,siRNA敲低HIF-1α组较BPS处理组STAT3、Bcl-2 mRNA表达降低（P<0.05）。siRNA敲低HIF-1α降低STAT3和Bcl-2的mRNA表达,这些结果表明HIF-1α在BPS介导的血管瘤细胞对STAT3信号的促进中起着重要作用。（4）HA组较对照组miR-195蛋白含量降低、bFGF和VEGF蛋白含量升高,BPS诱导组较HA组miR-195蛋白含量进一步降低、bFGF和VEGF蛋白含量进一步升高（P<0.05）。miR-195模拟物转染组（2.53±0.37,8.53±0.85）较空白对照组（3.46±0.52,2.17±0.24）细胞增殖活性降低,细胞凋亡率增加（P<0.05）。miR-195抑制剂转染组（3.89±0.22,2.11±0.23）较空白质粒转染组（2.37±0.26,5.64±0.16）细胞增殖活性增加,细胞凋亡率降低（P<0.05）。miR-195模拟物降低了HIF-1αWT 3’-UTR的萤光素酶活性,而miR-195抑制剂增强了该效果,但它们均对HIF-1α突变3’-UTR的萤光素酶活性没有影响。miR-195模拟物增加了miR-195的表达,降低了HIF-1α和bFGF的表达,而miR-195抑制剂则降低了miR-195的表达,增加了HIF-1α和bFGF的表达。结论:（1）BPS可以通过诱导细胞增殖和细胞周期转换而引发HA细胞的恶性变,该过程是通过BPS激活p65造成miR-155-5p下调,使得bFGF的表达增加而实现的。（2）BPS可以诱导细胞增殖触发HA细胞肿瘤的发生,该过程通过激活ERK1/2和了bFGF/FGFR1信号通路,上调bFGF的表达,促进HA细胞的增殖迁移完成的。（3）BPS通过激活和增加缺氧诱导因子（HIF）-1α来促进bFGF在血管瘤细胞中的表达,诱导血管瘤细胞的增殖发展。（4）miR-195通过靶向HIF-1α,调控bFGF和VEGF的表达,促进BPS诱导的HA细胞的增殖并抑制其凋亡,抑制皮肤HA的发展。并且miR-195上调和HIF-1α下调为HAs提供了潜在的治疗靶标。由于产前时期对BPS暴露敏感,我们建议孕妇和婴儿应特别注意避免暴露于BPS（例如,减少使用塑料制品,PCP,罐头食品以及与热敏纸的皮肤接触）。
宋亮丽[2]（2019）在《TGF-β、BMP2和性激素相关蛋白对牦牛毛囊周期的调控研究》文中研究表明牦牛（Bos grunniens）生活在海拔30005000 m的高原地区,是该地区的重要畜种之一。据报道,高海拔地区年平均气温在-3-5°C的范围内;相比海平面年平均气温（16.523.1°C）,高原地区表现出气温低下的特点。皮肤是直接接触外界环境的器官,其附属物毛囊在寒冷季节产绒,且产生的毛纤维具有很强的防湿能力,有利于牦牛生活在高寒地区。因此,为探索转化生长因子-β（Transforming growth factor,TGF-β）、骨形态发生蛋白2（Bone morphogenetic protein 2,BMP2）和性激素相关蛋白对牦牛毛囊周期的调控特征。本试验以成年雄性牦牛为研究对象,分别采集毛囊休止期、生长早期、生长中期、生长晚期和退行期5个不同生长时期的皮肤样本,进行了以下3个方面的研究:（1）TGF-β和热休克蛋白70（Heat shock protein 70,HSP70）是调控毛囊从生长期-退行期转换的重要因子。为了检测TGF-β和HSP70是否参与调控牦牛皮肤毛囊从生长期-退行期的转换。本试验采用免疫组织化学、免疫荧光、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）以及Western blotting等方法,对毛囊生长中期、生长晚期和退行期皮肤样本中TGF-β、Ⅱ型TGF-β受体（Transforming growth factor receptorⅡ,TGF-βRⅡ）、Casepase-3以及HSP70的表达进行检测。结果显示,TGF-β2 mRNA在毛囊不同时期皮肤内的转录水平显着高于TGF-β1和TGF-β3mRNA转录水平;同时,TGF-β2、TGF-βRⅡ及Caspase-3蛋白在毛囊退行期皮肤内的表达高于生长中期;并且免疫荧光双染结果显示,退行期毛囊的部分TGF-βRⅡ阳性细胞呈现TUNEL阳性。HSP70在生长中期的表达高于生长晚期和退行期,且HSP70的最低和最高表达水平与Caspase-3相反。结果表明,TGF-β2在牦牛毛囊退行期的诱导中发挥重要作用,并且其可能通过TGF-βRⅡ的介导途径来诱导毛囊上皮细胞凋亡;相反,HSP70可能通过保护细胞免受凋亡来调控牦牛毛囊向退行期转换。综上所述,TGF-β2和HSP70在牦牛毛囊退行期发生过程中发挥重要的调控作用。（2）BMP2、ⅠA型骨形态发生蛋白受体（Bone morphogenetic protein receptorⅠA,BMPR-ⅠA）及Noggin是参与毛囊休止期-生长期转换的重要蛋白。为了探索BMP2、BMPR-ⅠA和Noggin在牦牛毛囊不同时期皮肤内的表达特征,本试验采用qRT-PCR、Western blotting和免疫组织化学法,对毛囊休止期、生长早期和生长中期皮肤中BMP2、BMPR-ⅠA及Noggin基因和蛋白的表达进行了检测。qRT-PCR和Western blotting结果显示BMP2及BMPR-ⅠA在毛囊休止期皮肤中的表达最高,而Noggin的最高表达出现在生长早期;并且从休止期到生长早期阶段,BMP2及BMPR-ⅠA的表达呈下调趋势,而Noggin的表达呈上调趋势。免疫组织化学结果显示BMP2、BMPR-ⅠA和Noggin分别表达于皮肤表皮、毛囊外根鞘及毛母质细胞。综上所述,BMP2、BMPR-ⅠA和Noggin的特征性表达,提示BMP2和BMPR-ⅠA对牦牛毛囊休止期的维持具有重要的调控作用,而Noggin可能对牦牛毛囊的生长具有重要的调控作用,其主要是通过影响皮肤上皮细胞的增殖和分化来发挥作用。（3）双氢睾酮（Dihydrotestosterone,DHT）和雌二醇（17β-estradiol,E2）是潜在的调控人毛囊生长的性激素,其分别在5α还原酶（5α-reductase,5α-red）和芳香化酶（Aromatase）的催化作用下催化睾酮（Testosterone,T）产生。为明确牦牛毛囊是否有性激素合成酶及受体的表达,本试验采用免疫组织化学、qRT-PCR和Western blotting法对毛囊休止期、生长期和退行期皮肤内DHT和E2合成相关蛋白以及受体的表达进行检测,发现5α-red1、5α-red2和雄激素受体（Androgen receptor,AR）均表达于上皮细胞,并且在毛乳头中也检测到AR的表达。同时,5α-red1 mRNA在毛囊各个时期中的转录水平极显着高于5α-red2mRNA;并且5α-red1和5α-red2蛋白最高表达水平分别见于毛囊生长期和休止期,而AR蛋白仅在毛囊生长期表达。此外,Aromatase及雌激素受体α和β（Estrogen receptorαandβ,ERα和ERβ）均在皮肤上皮细胞中表达,并且在真皮乳头中也有ERα和ERβ的表达。另外,ERαmRNA在毛囊各个时期的转录水平极显着高于ERβmRNA;并且从退行期到休止期,Aromatase和ERβ蛋白的表达呈下调趋势,而ERα蛋白呈上调趋势。DHT相关蛋白的特征性表达可能表明,牦牛皮肤细胞中可能存在DHT的合成途径及作用机制,并且其可能对毛囊的生长具有重要的调控作用;而E2相关蛋白的表达趋势,提示牦牛皮肤细胞中可能存在E2的合成途径及其受体的作用机制,并且E2可能对牦牛毛囊的退化具有重要的调控作用。综上所述,（1）TGF-β2可能通过TGF-βRⅡ的介导途径,参与调控牦牛毛囊的退化过程;而HSP70可能通过参与保护细胞免受凋亡来影响牦牛毛囊的生长;（2）BMP2和BMPR-ⅠA能够通过影响牦牛皮肤上皮细胞的增殖和分化来参与调控牦牛毛囊休止期的维持,而Noggin则可能通过影响牦牛皮肤上皮细胞的增殖,从而在毛囊休止期-生长期的转换中发挥重要的调控作用;（3）牦牛皮肤细胞中存在DHT的合成途径以及作用机制,并且其可能对毛囊的生长具有重要的调控作用;牦牛皮肤细胞中同样存在E2的合成途径及其受体作用机制,并且E2可能对牦牛毛囊的退化具有重要的调控作用。这为深入研究上述因子在牦牛毛囊生长周期中的作用及其作用机制提供理论依据,也为进一步揭示牦牛对高原特殊环境的适应机制提供有力支撑。
孔杰[3]（2019）在《血管紧张素Ⅱ对皮肤弹力纤维的调控作用及机制研究》文中指出【背景】皮肤真皮中弹力纤维网逐渐萎缩或出现异常蛋白的沉积是皮肤老化的重要特征,减少弹力纤维降解、促进其再生是延缓皮肤衰老的重要思路。弹性蛋白是弹力纤维的主要成分,含量达90%,其只在胚胎中晚期及新生儿时期合成,稳定地存在于组织中,但是随着各种内外因素的影响,会逐渐出现损伤、退化。目前关于心血管弹力纤维的研究较多,可以作为对皮肤弹力纤维调控研究的借鉴。心血管系统对一定的生理和病理刺激的反应可表现结构的重塑,出现细胞、基质及纤维成分的改变。肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）不仅改变血流动力学,亦可作为内分泌因素参与重塑过程,实验表明应用RAS阻断剂可以上调血管壁弹力纤维的含量。生物体内存在两种RAS,一种为系统性的,主要调控血压、体液容量和电解质稳态;另一种为局部RAS,存在于不同的器官和组织,对于组织的修复和重建有一定的作用。皮肤中存RAS的所有成分,主要效应物血管紧张素II（AngⅡ）可在局部形成,因此AngⅡ对皮肤弹性蛋白和弹力纤维的合成可能具有一定的调控作用。【目的】探索血管紧张素II及其不同受体拮抗剂对人皮肤成纤维细胞弹性蛋白合成的调控作用及可能存在的作用机制,发现可以促进弹性蛋白及弹力纤维合成的新方法,并在活体动物皮肤中进行验证,为临床上解决皮肤衰老问题提供新的思路。【方法】酶消化法培养原代人皮肤成纤维细胞,RT-PCR、Western blot、细胞免疫荧光检测细胞AngⅡ受体AT1R、AT2R。以不同浓度(10-8M10-5M)的AngⅡ、AT1R拮抗剂氯沙坦、AT2R拮抗剂PD123319分别干预成纤维细胞24和48h,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响。以不同浓度的AngⅡ(10-8M10-6M)加或不加氯沙坦(10-5M)、PD123319(10-5M)作用于成纤维细胞提取细胞总RNA和细胞总蛋白。总RNA逆转录为cDNA,行荧光定量PCR检测弹性蛋白mRNA含量的变化;总蛋白定量后行Western Blot,检测可溶性弹性蛋白原含量。确定AngⅡ对弹性蛋白的作用及作用受体后,予以相应的受体拮抗剂和AngⅡ干预成纤维细胞,Western Blot检测EGFR、ERK1/2的磷酸化水平,再以EGFR磷酸化抑制剂AG1478、MEK1/2抑制剂U0126干预成纤维细胞后Western Blot检测弹性蛋白原含量以验证EGFR/ERK1/2通路的作用。选8周龄雌性Balb/c小鼠,背部脱毛处理后行剥脱性二氧化碳点阵激光,作用后1天8周免疫组织化学检测局部皮肤AngⅡ、AT1R、AT2R的表达变化,以验证点阵激光后皮肤RAS是否被激活。小鼠经点阵激光作用后外用氯沙坦、卡托普利或凡士林,设立只加外用药不做点阵激光的对照组,用药后第2周、第4周、第8周分别处死各组小鼠后,取背部皮肤组织做间苯二酚碱性品红染色,测量真皮厚度、分析弹力纤维含量。【结果】成功培养原代人皮肤成纤维细胞,经转录及翻译水平、细胞水平的验证,其稳定表达AngⅡ受体AT1R、AT2R。AngⅡ作用于成纤维细胞后,弹性蛋白mRNA及可溶性弹性蛋白原表达减少,EGFR、ERK1/2磷酸化水平增加。AT1R拮抗剂氯沙坦、EGFR抑制剂AG1478、MEK1/2抑制剂U0126可拮抗AngⅡ对弹性蛋白表达的抑制作用。剥脱性二氧化碳点阵激光作用于Balb/c小鼠皮肤后,局部AngⅡ、AT1R、AT2R表达增强,RAS被激活,小鼠真皮厚度增加。点阵激光后外用氯沙坦或卡托普利可明显增加小鼠皮肤弹力纤维的含量。【结论】AngⅡ经受体AT1R通过EGFR/ERK1/2途径抑制人皮肤成纤维细胞表达弹性蛋白。剥脱性二氧化碳点阵激光可激活Balb/c小鼠皮肤RAS,点阵激光后外用RAS阻断剂可增加小鼠皮肤弹力纤维的含量。
王虎军[4]（2013）在《维药异常黑胆质成熟剂对增生性瘢痕影响的实验研究》文中研究指明瘢痕（Scar）是机体创伤愈合的必然产物。病理性瘢痕由于瘢痕增生过度,从而引起外形和（或）功能异常。增生性瘢痕（Hypertrophic Scar, HS）是临床最常见的病理性瘢痕之一,造成患者外观畸形和功能异常,给患者身体及心理带来了较大的影响。由于其具体机制尚不十分清楚,且治疗后易复发等特点,当前尚无较好的防治手段。增生性瘢痕的形成是多环节、多阶段的一个复杂过程,包括凝血、早期炎症、晚期炎症、成纤维细胞的迁移与胶原的合成、血管化、上皮化、重塑阶段等。传统治疗方法包括局部加压、激素注射、硅凝胶类以及放化疗等虽然取得了一定效果,但在治疗HS的同时,会出现副作用或不良反应,临床应用受到一定限制。在传统中医理论中,HS认为是由于气血壅滞、经络痹阻、痰湿搏结或三者联合所致,且基于活血化瘀、攻毒散结、通络止痛、酸涩收敛和消结散瘢等方法在增生性瘢痕的防治上取得了一定进展。虽然目前报道的中医治疗瘢痕的方法很多,但多数存在用药途径比较单一、剂型有限、多集中在单味药物或是提取物研究等缺陷,且疗效不确切,容易复发等缺点。维医理论认为体液是人类生命及生理活动过程的基本物质体内各种营养物质在肝中产生的各种液体总称为体液,分为胆液质、血液质、粘液质和黑胆质四种。它们贯穿于整个人生,在体内自然形成,对健康和疾病起很大的作用。它们在体内不断地消耗,又不断地产生,保持着一定的平衡状态。四体液脱离自然的正常状态,在数量和质量上发生改变,成为对人体无益或有损的体液,称为异常体液。在体内外各种因素的作用下,人体内胆质体液的量增加,功能改变,在机体基础“热”的作用下“燃烧”最终形成异常黑胆质,是许多疾病维吾尔医学病理生理上所共有的特性。治疗上主要采用异常黑胆质成熟剂（Abnormal Savda Munziq, ASMq）进行调整。ASMq在防治部分肿瘤、糖尿病、高血压等方面均取得了一定效果。体外研究显示ASMq具有抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡等作用。研究表明皮肤增生性瘢痕是由于成纤维细胞过度增殖以及细胞外基质胶原过度沉积所引起,又被称为“皮肤成纤维细胞良性肿瘤”。本研究在传统维医理论指导下提出科学假设：皮肤增生性瘢痕是异常黑胆质体液在皮肤的局部沉积所致,是全身异常黑胆质体液的局部表现。本研究拟通过兔耳增生性瘢痕动物模型以及体外人增生性瘢痕成纤维细胞培养实验,通过采用不同浓度ASMq干预研究,来检验假设,并进一步探讨其细胞与分子机制。研究表明,增生性瘢痕是由于成纤维细胞过度增殖以及细胞外基质胶原过度沉积所引起,其中TGF-p是导致增生性瘢痕形成的重要细胞因子,它主要通过TGF-β/Smad信号通路参与调节成纤维细胞的增殖,凋亡,迁移和胶原代谢。TGF-β能同时触发两个可以对抗Smad蛋白介导的正反馈调节机制,其中就是快速激活Smad7启动子,诱导Smad7基因表达,通过Smad7竞争性的占据TGF-βI型受体,抑制受体的蛋白激酶R-TGF-p的磷酸化而阻断信号传导,最后诱发它能促进细胞外基质在伤口沉积,并能促进纤维化,促使形成增生性瘢痕。由于增生性瘢痕是成纤维细胞过度增殖和细胞外胶原机制过度沉积而引起,因此抑制成纤维细胞增殖、抑制其胶原表达是防治增生性瘢痕的基础。在细胞水平上,通过抑制细胞活性从而抑制成纤维细胞增殖、促进细胞凋亡可以减少瘢痕内成纤维细胞数量,可以在一定程度上防治增生性瘢痕；在细胞超微结构中,改变细胞内内质网、核糖体、线粒体等与胶原表达关系密切的亚细胞器活性可以在一定程度上具有减少瘢痕胶原的沉积的作用;在蛋白分子水平上,由于TGF-β/Smad信号通路是胶原产生的主要通路之一,且TGF-β1是促进细胞增殖的重要因子之一,因此通过减少TGF-β1的表达、增加Smad7的表达可以防治增生性瘢痕的发生和发展。目的：通过体内体外实验初步探讨维药ASMq对增生性瘢痕的影响及其作用机制,为临床采用维医维药理论防治增生性瘢痕提供实验和理论依据。方法：本研究采用兔耳瘢痕动物模型、体外增生性瘢痕成纤维细胞培养等途径,分别从组织学、细胞学以及分子生物学水平,探讨维药ASMq对增生性瘢痕的影响及其作用机制。第一部分,体内实验部分,灌胃给予维药ASMq对兔耳增生性瘢痕影响的实验研究。20只新西兰大耳白兔采用随机数字表法随机分为4组,即空白对照组（生理盐水）三个实验组分别为：（ASMq400mg/kg）,（ASMq800mg/kg）、（ASMq1200mg/kg）,每组5只。在创面形成后第45天（预实验表明此时瘢痕增生达到峰值）,分别取材后进行各项指标测定,备好切片后进行四项实验实施。（1）通过计算瘢痕增生指数（Hypertrophic Indes, HI）,与空白对照组相比,从而明确各实验组ASMq对兔耳增生性瘢痕有无影响。（2）通过对各组创面范围内组织切片行HE染色,观察各组兔耳瘢痕胶原排列以及成纤维细胞密度等情况,进一步明确ASMq对兔耳增生性瘢痕胶原增生以及成纤维细胞增殖的影响。（3）通过对各组创面范围内组织行Masson染色,观察各组胶原排列以及胶原密度,通过采用单因素方差分析分析多组间胶原面密度,通过两两比较q检验,明确各组间胶原面密度有无差异。（4）通过对兔耳创面范围内组织标本通过透射电镜观察组织超微结构（包括原胶原纤维、线粒体、内质网等细胞亚结构）,通过与空白对照组相比较分析,初步在超微结构层面进一步观察不同浓度维药ASMq对兔耳增生性瘢痕的影响机制。第二部分,体外实验,通过体外分离培养人增生性瘢痕来源成纤维细胞,分四组（1个空白对照组,3个实验组）：空白对照组,低浓度ASMq组（0.1mg/m1）,中浓度ASMq组（0.4mg/m1）,高浓度ASMq组（0.7mg/m1）。对各组在相应时间点收集标本进行检测：（1）通过CCK-8方法,采用酶标仪检测ASMq对成纤维细胞体外增殖有无影响。（2）采用细胞凋亡分析试剂盒通过流式细胞分析仪行细胞凋亡检测,拟明确不同浓度ASMq对成纤维细胞凋亡的影响。（3）采用细胞周期检测试剂盒,通过流式细胞术分析ASMq对成纤维细胞细胞周期的影响,拟明确ASMq阻断细胞增殖周期的具体时间点。（4）通过细胞划痕迁移实验观察成纤维细胞迁移能力,拟明确不同浓度ASMq对成纤维细胞迁移能力有无影响。（5）通过透射电镜观察成纤维细胞合成原胶原能力以及内质网、核糖体、细胞核、线粒体等细胞亚结构情况,拟明进一步分析明确不同浓度ASMq对成纤维细胞表达胶原以及细胞凋亡、增殖的机制。第三部分,采用RT-PCR方法和免疫印迹等方法基于TGF-β/Smad通路分析ASMq对增生性瘢痕来源成纤维细胞细胞增殖、胶原表达影响的分子机制。拟明确不同浓度ASMq对增生性瘢痕来源成纤维细胞细胞增殖、胶原表达的分子机制。结果：第一部分,体内兔耳增生性瘢痕动物模型实验结果表明,灌胃给药ASMq可以在一定程度上抑制增生性瘢痕的发生发展,且在一定浓度范围内具有浓度梯度依赖性。（1）大体观察结果,增生性瘢痕的厚度随着ASMq的浓度逐渐增大,其厚度逐渐减小,硬度逐渐软化,体积逐渐减小趋于平复,颜色逐渐变淡。（2）计算瘢痕增生指数结果,与空白组（3.87±0.22）对比,实验各组分别为（3.38±0.34）、（2.63±0.15）、（1.72±0.12）增生性指数（HI）随着ASMq的浓度逐渐增加而降低（p<0.05）。（3）通过HE染色在1200mg/kg浓度维药ASMq灌胃后对瘢痕增生的成纤维细胞密度观察结果,与空白组（4022.5±±189.3）相比,实验组（3541.44±206.6）的显示瘢痕增生不明显,成纤维细胞数量及密度减少（p<0.05）。（4）通过Masson染色在1200mg/kg浓度维药ASMq灌胃后对瘢痕增生的胶原纤维情况观察结果,与空白组（42.25±2.58）相比,实验组（23.55±1.28）的增生性瘢痕胶原纤维面密度明显减少（p<0.05）。（5）通过透射电镜观察不同浓度的ASMq对增生性瘢痕成纤维细胞的超微结构观察结果;与空白组对比,随着实验组浓度的递增成纤维细胞密度和胶原纤维面密度逐渐减少。第二部分,体外增生性瘢痕来源成纤维细胞干预实验结果表明,在一定浓度范围内ASMq具有抑制成纤维细胞增殖、促进细胞凋亡的作用；细胞超微结构分析结果显示ASMq具有抑制成纤维细胞原胶原合成,抑制细胞亚结构（如内质网、核糖体、线粒体等）活性,促进细胞凋亡等作用。生物学特性的影响。（1）体外细胞培养原代和传代及细胞冻存和复苏情况结果,成纤维细胞界限清楚,胞体较大,呈棱形或不规则三角形,细胞质向外伸出两三个长短不同的突起,胞浆丰富、胞膜边界清晰、核仁多以成双出现大小均等。（2）用CCK-8法检测各组HSFs增殖活性结果,与空白对照组相比,不同浓度ASMq组以及阳性对照组5-Fu组的HSFs增值活性明显降低,其差异具有统计学意义（p<0.05）。（3）用流式细胞技术检测各组HSFs细胞凋亡结果,与空白对照组凋亡率为2.2%±0.59%,不同浓度ASMq实验组凋亡率分别为14.1%±3.87%,23.5%±3.22%,38.8%±3.14%,43.7%±2.58%；ASMq组凋亡率明显高于对照组,且凋亡率随ASMq浓度增加呈递增趋势。（4）ASMq对HSFs细胞周期的影响结果,与空白对照组比较,不同浓度ASMq组HSFs在G2/M期细胞比例呈不同程度升高,具有浓度依赖性,即在0.1-1.0mg/ml浓度间,随着ASMq浓度增加,GR/M期细胞比例从13.1%增加到29.5%,差异具有统计学意义（p<0.05）。（5）ASMq干预增生性瘢痕来源的成纤维细胞迁移实验结果。与空白组相比,实验组分别在0h、24h、48h后,增生性瘢痕的成纤维细胞迁移能力随着时间的延长而逐渐减弱（p<0.05）。（6）ASMq对HSFs超微结构的影响结果,从低倍和高倍镜观察到：0.4mg/ml组的成纤维细胞的细胞核消失；0.7mg/ml组成纤维细胞膜出现收缩;1mg/ml组成纤维细胞出现凋亡小体相对空白组。第三部分,通过体外对不同浓度ASMq干预后的增生性瘢痕来源成纤维细胞基于TGF-β/Smad通路分析,结果显示ASMq可以抑制TGF-β1的表达,促进抑制型Smad7的表达。在分子生物水平方面,通过RT-PCR的检测方法和western-blot检测方法。（1）ASMq对成纤维细胞TGF-β1mRNA表达的影响结果,与空白组对比,AMSq随着药物浓度的增加,TGF-β1mRNA表达量减少（P<0.05）。（2）ASMq对成纤维细胞Smad7mRNA表达的影响结果,与空白组对比,ASMq随着药物浓度的增加Smad7mRNA表达量增加（P<0.05）。（3）ASMq对成纤维细胞TGF-β1蛋白表达的影响结果,与空白组对比,ASMq随着药物浓度的增加,TGF-β1蛋白表达量减少（P<0.05）。（4）ASMq对成纤维细胞Smad7蛋白表达的影响结果,与空白组对比,ASMq随着药物浓度的增加Smad7蛋白表达量增加（P<0.05）。结论：灌胃给药ASMq可以在一定程度上抑制兔耳增生性瘢痕的发生发展,且在一定浓度范围内具有浓度梯度依赖性,其通过抑制胶原合成和成纤维细胞增殖途径发挥作用。在一定浓度范围内,ASMq具有抑制人增生性瘢痕来源成纤维细胞增殖、促进细胞凋亡的作用；细胞超微结构分析结果显示ASMq具有抑制成纤维细胞原胶原合成,抑制细胞亚结构（如内质网、核糖体、线粒体等）活性,促进细胞凋亡等作用。ASMq可以抑制人增生性瘢痕来源成纤维细胞TGF-p1的表达,促进抑制型Smad7的表达。综上表明ASMq可以基于TGF-β/Smad通路抑制成纤维细胞增殖、促进细胞凋亡以及抑制胶原表达,从而抑制增生性瘢痕的发生发展,为增生性瘢痕的防治提供了新的思路。
伍杰,潘宁[5]（2011）在《雌激素与瘢痕形成的相关研究进展》文中研究指明瘢痕是皮肤软组织损伤后由于各种内外因素导致的病理性愈合的结果,其形成的具体机制目前还没有完全明确。但病理研究表明瘢痕的形成在于成纤维细胞异常增殖、分化,胶原的过度沉积等,雌激素参与了皮肤的多种生理、病理过程。本文旨在对雌激素与瘢痕形成的相关研究进展予以探讨。
石慧娟[6]（2010）在《胚胎皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原及波形蛋白表达与超微结构变化的研究》文中提出目的：研究不同胎龄大鼠胚胎皮肤中Ⅰ型胶原（collagenⅠ; Col-Ⅰ）、Ⅲ型胶原（collagenⅢ; Col-Ⅲ）及波形蛋白（vimentin; Vim）表达的变化特征与超微结构的变化规律,并探讨其与胎龄的相关性及在胚胎皮肤无瘢痕愈合中的意义。方法：（1）动物模型制备：成年健康雌雄大鼠1：1合笼配种,每日上午8：00观察配种结果,发现阴栓记为雌鼠怀孕0天。配种成功后雌雄分笼,随机饲养雌鼠至胎龄10天、12天、14天、16天、18天,即将孕鼠随机分为胎龄10天组（G10组）、胎龄12天组（G12组）、胎龄14天组（G14组）、胎龄16天组（G16组）、胎龄18天组（G18组）五组。（2）组织标本的制备：各组孕鼠分别于不同胎龄（胎龄10天,12天,14天,16天,18天）麻醉后,取胎鼠臀背部皮肤,用双面刀片修成1 mm3大小的3块,放入2.5%戊二醛4℃固定,用作透射电镜分析,在JEOL-1400下观察表皮及真皮成纤维细胞超微结构特征和变化规律；其余部分取大约0.5 cm-1.0 cm胎鼠皮肤组织放入10%的中性福尔马林中经固定后,石蜡包埋切片,对各切片做以下检测：①应用HE染色观察不同胎龄皮肤的形态结构特点；②采用SABC免疫组化染色法检测不同胎龄胚胎皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原和波形蛋白的表达。每张切片采用日本OLYMPUS公司的Ax-70显微成像系统低倍（100倍）和高倍（400倍）视野进行观察分析及照相,用Image-Pro Plus 6.0图像分析系统,分别测定Ⅰ、Ⅲ型胶原,波形蛋白的平均光密度值和真皮阳性细胞数。（3）所得数据以均数土标准差（x±s）表示,采用spss 13.0.统计软件进行统计学分析。同一指标多组均数问比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,两两比较采用LSD检验。指标之间采用Pearson相关分析（Pearson Correlation Analysis）,P<0.05为差异有统计学意义。结果：（1）Ⅰ型胶原表达情况：Ⅰ型胶原的表达随着胎龄的增加逐渐增强,图像分析结果显示,胎龄10天组平均光密度最低,随着胎龄的增加,平均光密度值增加,至胎龄18天组升至最高,各胎龄组间差异有显着性（P<0.05）；真皮内阳性细胞数随着胎龄的增加逐渐减少,各胎龄组间差异有显着性（P<0.05）。（2）Ⅲ型胶原表达情况：Ⅲ型胶原的表达随着胎龄的增加逐渐减弱,在10天胎龄皮肤组织中平均光密度最高,随着胎龄增长平均光密度逐渐降低,各胎龄组间差异有显着性（P<0.05）；真皮内阳性细胞数随着胎龄的增加逐渐增多,各胎龄组间差异有显着性（P<0,.05）。（3）波形蛋白表达情况：波形蛋白的平均光密度随着胎龄的增加逐渐降低,除胎龄10天组与胎龄12天组之间以及胎龄16天组与胎龄18天组之间差异无显着性差异（P>0.05）,其余各组之间的差异均有显着性差异（P<0.05）；真皮内阳性细胞数随着胎龄的增加逐渐增多,各胎龄组间差异有显着性（P<0.05）。（4）Ⅰ型胶原的平均光密度分别与Ⅲ型胶原和波形蛋白的平均光密度之间为负相关关系（P<0.05）；Ⅰ型胶原的真皮阳性细胞数分别与Ⅲ型胶原和波形蛋白的真皮阳性细胞数之间为负相关关系（P<0.05）；Ⅲ型胶原的平均光密度与波形蛋白的平均光密度之间为正相关关系（P<0.05）；Ⅲ型胶原的真皮阳性细胞数与波形蛋白的真皮阳性细胞数之间亦为正相关关系（P<0.05）。（5）超微结构变化：胚胎皮肤表皮各层细胞清晰可见,表皮细胞层数也随着胎龄的增长逐渐增多,真皮成纤维细胞胞质内粗面内质网和线粒体随着胎龄的增长逐渐减少。结论：（1）Ⅰ、Ⅲ型胶原在胚胎发育不同时期的表达差异,特别是胚胎发育前中期Ⅲ型胶原的相对高表达和Ⅰ型胶原的低表达可能与无瘢痕愈合紧密相关。（2）波形蛋白的表达随着胎鼠胎龄的增加逐渐增强。波形蛋白在胚胎发育不同时期的表达差异可能在胚胎无瘢痕愈合过程中起重要的作用。（3）胎鼠皮肤中真皮成纤维细胞胞质内粗面内质网和线粒体随着胎龄的增长逐渐减少,可能与胚胎皮肤无瘢痕愈合密切相关。（4）在胚胎早期出现的无瘢痕性愈合的现象和胚胎成纤维细胞独特的结构功能状态、Ⅰ、Ⅲ型胶原、波形蛋白的表达以及和相关的基因调控有密切关系。
石慧娟,程基焱[7]（2008）在《细胞因子与胚胎皮肤无瘢痕愈合》文中进行了进一步梳理
韩兵[8]（2007）在《汗腺发育相关基因及其联用骨髓间充质干细胞促进汗腺再生修复的研究》文中指出目的：1．研究胎儿不同发育阶段皮肤组织的形态结构及抗原表达，并检测汗腺发育中皮肤组织内某些基因转录表达水平的动态变化，探讨皮肤附属器汗腺的发生和发育规律，进而寻找在汗腺发育中起重要作用的相关基因；2．研究汗腺相关基因与骨髓间充质干细胞的应用对汗腺再生修复的影响，探讨基因和干细胞治疗在汗腺组织再生修复方面的可行性。方法：1．采用HE染色和免疫组化方法观察胎龄为10～36w人胎儿皮肤组织的结构和特征，采用RT-PCR和western blotting等方法分析人类胎儿皮肤及汗腺附属器生理发育过程中的相关基因表达及其规律。2．从人胎儿成纤维细胞中克隆人汗腺相关基因的DNA片段，构建真核表达质粒，采用裸基因注射和体外转染大鼠MSCs后局部移植的方式处理裸鼠烫伤部位，RT-PCR和western blotting检测MSCs导入基因表达水平的变化，采用常规和免疫组化染色观察汗腺组织再生修复情况，结合碘-淀粉发汗试验检测汗腺功能以判定治疗效果。结果：1．不同发育阶段胎儿皮肤组织结构呈现规律性的演进，光镜下观察汗腺组织的发生发育过程大致分为三个阶段：胎儿发育第12～16w，为汗腺发育启动期，胎儿表皮基底层细胞分裂增殖，出现局灶增殖相间分布细胞团，进而向真皮凹陷生长形成表皮嵴；表皮嵴基底部及部分区域的基底层细胞增生活跃，相互聚集形成皮肤附件包括汗腺的原基，发育至16w左右的胎儿皮肤可观察到汗腺原基部细胞呈条索状向真皮深层生长。胎儿发育17w至24w，为汗腺发育成形期，汗腺发生发育活动在此期到达高峰，皮肤基底层细胞不断发生新汗腺原基的活动在此期到达高峰；汗腺原基细胞条索继续向真皮深部延伸生长，末端膨大形成蟠管，连接蟠管和原基的中段形成皮内导管原基；20w时细胞条索内部部分细胞退化变性形成腔隙，之后腔隙彼此沟通形成贯通管腔；23～24w，表皮基底层细胞形成汗腺原基活动减弱，汗腺数量趋于稳定，组织结构初步形成。胎儿发育25～33w，为汗腺发育成熟期，汗腺数量稳定，结构进一步完善。2．免疫组化结果显示汗腺的形成过程中表型变化的特殊规律：β1整合素在汗腺原基细胞表达阴性，汗腺蟠管形成后在蟠管细胞表达阳性；CK7在汗腺结构发生早期不表达，汗腺发育形成细胞索后在分泌部和皮内导管部原基细胞表达且表达部位呈现规律性下移；CK14在皮肤基底层和汗腺导管部连续表达；CK8／18在形成分泌部后表达；CK19和CEA在汗腺形成早期就有强表达并持续至汗腺成熟后。3．RT-PCR和western blotting检测结果显示皮肤中FGF10和EDA的转录表达在汗腺发育三阶段呈现规律性的上升-平台-下降趋势，与汗腺发生发育的变化规律基本相符；FGF7无上述显着性的变化。4．从胎儿成纤维细胞获取FGF10和EDA-A1基因片段，构建真核表达质粒，经酶切图谱鉴定和测序证实构建成功；将真核质粒注射到烫伤裸鼠足掌，可以促进汗腺的再生，发汗试验强阳性。5．采用构建的质粒以脂质体为载体体外转染大鼠MSCs，免疫细胞化学染色和western blotting检测结果显示目的基因表达显着增强，并分泌相应蛋白。将BrdU标记后的基因转染MSCs局部移植到裸鼠烫伤部位，显示部分移植的MSCs能够参与汗腺组织结构的再生修复并表达汗腺细胞表型。结论：1．皮肤汗腺的发育形成有明显的阶段性规律，其发育相关基因的转录表达水平的变化与之基本相符。2．局部直接导入汗腺发育相关基因对汗腺损伤后再生修复有促进作用，而基因修饰的骨髓间充质干细胞亦可有效参与汗腺修复，基因治疗联合干细胞治疗技术将为烧伤患者皮肤功能重建乃至完全再生带来新的希望。
周岗[9]（2006）在《人汗腺发生与修复过程中基因表达特征的系列研究》文中指出目的:1.研究皮肤及汗腺附属器官在胚胎不同发育阶段的基因表达特征,探讨汗腺发育在分子基因水平上的调控机制;2.研究汗腺细胞（SGCs）与骨髓间充质干细胞（MSCs）共培养和MSCs向SGCs诱导培养过程中细胞表型和基因表达的变化规律,探讨干细胞的可塑性在皮肤创面修复和汗腺组织再生方面的治疗可行性。 方法:1.采用HE方法检测不同发育阶段人胎儿皮肤组织的生理结构和特征,其次采用免疫组化、RT-PCR和基因芯片筛选等方法全面分析人类胎儿皮肤及汗腺附属器生理发育过程中的基因表达规律。2.体外分离培养成人MSCs和SGCs;将达70%融合的SGCs热休克损伤后与（1-2）×105MSCs共培养;观测细胞表型变化并采用免疫细胞化学、RT-PCR和Western blotting等方法检测融合细胞相比较于SGCs、骨髓MSCs及成纤维细胞的基因及蛋白表达特征。3.通过设立对照组、汗腺组织匀浆组和不同浓度的EGF组,比较在不同的诱导培养介质下骨髓MSCs向SGCs横向分化的潜能,并采用流式细胞术和Western blotting等分子检测方法加以鉴定。 结果:1.不同发育阶段胎儿皮肤组织结构的变化:光镜下可见不同发育阶段的胎儿皮肤具有典型的组织学结构。在E12周,表皮仅由1-2层细胞组成,表皮嵴较明显,出现局灶增殖相间分布细胞团;E13-14周皮肤表皮细胞层数增多,排列无极性,偶见汗腺原基;E16周后周皮细胞开始脱落,表皮和真皮均增厚,原基部汗腺细胞呈索状向真皮深层生长;在E20周可见管状汗腺结构;E23-24周,表皮细胞4-5层,规律排列,汗腺结构初步形成;E25-32周,汗腺结构和数量稳定。2.基因芯片筛选、免疫组化和RT-PCR结果发现胎儿皮肤及汗腺的形成过程是不同基因如EGF、FGF10等在细胞向空间分化时优势表达的过程。3.汗腺的微分离技术不仅有助于其生理学的研究,还有助于汗腺细胞功能学方面的研究。4.SGCs与骨髓MSCs共培养后,与自发融合相比产生了更多的融合细胞,并在细胞表型上出现扁平状上皮样改变和在分子基因水平上出现SGCs所具有的特异标记。5.骨髓MSCs在用不同的汗
李昊[10]（2006）在《瘢痕组织中神经构筑的实验研究》文中进行了进一步梳理在人体的皮肤组织中存在着大量的神经纤维，神经纤维是由神经元的长轴突外包胶质细胞所组成，包裹周围神经纤维轴突的是施万细胞。在创伤的恢复过程中，神经纤维和其他组织一同逐渐修复，研究发现，神经纤维除了自身修复外，还通过各种途径对成纤维细胞及其他修复细胞发生作用，从而对创伤的愈合施加影响。本论文研究了瘢痕组织中的神经纤维随创伤后时间而改变的规律，及年龄因素对瘢痕组织中神经构筑的影响，现将全文摘要如下： 越来越多的实验数据表明，神经系统，尤其是外周神经系统在瘢痕的形成中发挥了举足轻重的作用。但是，国内外学者在创伤后不同时期瘢痕组织中神经构筑方面的研究结果各执一词，另外，以往关于瘢痕组织中的神经构筑的研究都将研究的重点放在早期瘢痕（1年以内），且标本数量少，对于晚期瘢痕（1年以后）研究很少。 以往研究发现，年龄因素对于正常皮肤组织中的神经纤维有着重要的影响。对于瘢痕组织中的神经构筑的研究，既往主要是对不同时期的瘢痕组织中神经构筑的研究，对于年龄因素对瘢痕组织中的神经构筑影响的研究目前还没有报道。 针对以上几点，本实验选取临床到我院进行瘢痕整形修复手术的患者，正常皮肤来自整形手术的供皮区，标本在液氮罐中保存，采用冰冻切片技术，利用HE染色，单克隆抗体免疫荧光法（immunofluorescence，IF），免疫荧光显微镜观察创伤后不同时期的患者，瘢痕及正常皮肤组织中的神经丝蛋白(neurofi-
二、胎儿和少儿皮肤内碱性成纤维细胞生长因子及其受体的基因表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、胎儿和少儿皮肤内碱性成纤维细胞生长因子及其受体的基因表达（论文提纲范文）
（1）双酚S通过调节碱性成纤维细胞生长因子影响恶性血管瘤细胞生物学特性的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 主要试剂及仪器 |
| 绪论和引言 |
| 绪论 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 引言 |
| 1 血管瘤 |
| 2 血管瘤的生物学 |
| 3 双酚S |
| 4 双酚S在血管瘤细胞中诱导EMT |
| 5 双酚S通过bFGF的上调触发血管瘤细胞的增殖及其细胞周期的转变 |
| 6 血管瘤治疗 |
| 7 血管生成信号通路间的联系 |
| 8 总结和展望 |
| 第1章 双酚S通过调节碱性成纤维细胞生长因子诱发血管瘤细胞恶性变 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 细胞培养与处理 |
| 1.1.2 细胞增殖测定 |
| 1.1.3 细胞集落形成试验 |
| 1.1.4 细胞周期分析 |
| 1.1.5 实时RT-PCR分析 |
| 1.1.6 蛋白质印迹分析 |
| 1.1.7 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 1.1.8 启动子活性分析 |
| 1.1.9 统计分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 BPS诱导HA细胞的增殖和细胞周期转变 |
| 1.2.2 BPS增加HA细胞bFGF的表达 |
| 1.2.3 bFGF参与BPS诱导的HA细胞增殖 |
| 1.2.4 BPS可以增加bFGF的转录和m RNA稳定性 |
| 1.2.5 NF-κB参与BPS诱导的HA细胞bFGF表达 |
| 1.2.6 miR-155-5p参与BPS增强bFGF mRNA稳定性 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第2章 BPS通过增加HA细胞中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达增加HA细胞增殖和迁移的机制 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 细胞及细胞处理 |
| 2.1.2 细胞转染及抑制剂 |
| 2.1.3 实验分组 |
| 2.1.4 逆转录定量PCR(RT-qPCR) |
| 2.1.5 蛋白质免疫印迹 |
| 2.1.6 细胞增殖测定 |
| 2.1.7 细胞凋亡分析 |
| 2.1.8 细胞迁移试验 |
| 2.1.9 统计分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 BPS诱导bFGF、VEGF、FGFR1 表达 |
| 2.2.2 BPS诱导细胞增殖 |
| 2.2.3 细胞凋亡及活力检测 |
| 2.2.4 BPS促进血管瘤细胞的迁移侵袭 |
| 2.2.5 NF-κB参与BPS诱导的细胞中bFGF的表达 |
| 2.2.6 蛋白印迹分析bFGF/ FGFR1 含量 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 BPS通过激活和增加缺氧诱导因子(HIF)-1α增加b FGF表达的分子机制 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 细胞培养 |
| 3.1.2 细胞处理及siRNA |
| 3.1.3 实验分组 |
| 3.1.4 蛋白质免疫印迹 |
| 3.1.5 MTT检测细胞增殖 |
| 3.1.6 TUNEL分析 |
| 3.1.7 逆转录定量PCR(RT-qPCR) |
| 3.1.8 统计分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 BPS以剂量浓度方式促进血管瘤细胞中HIF-1α及 bFGF蛋白表达 |
| 3.2.2 BPS以时间依赖性方式促进血管瘤细胞中HIF-1α及 bFGF蛋白表达 |
| 3.2.3 BPS促进血管瘤细胞增殖 |
| 3.2.4 TUNEL染色分析 |
| 3.2.5 BPS通过激活HIF-1α增加bFGF的表达 |
| 3.2.6 BPS促进血管瘤细胞中STAT3和Bcl-2 的表达 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 BPS通过上调HIF-1α和下调miR-195 来增加bFGF的表达来触发HA细胞的恶性发展的机制 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 BPS下调miR-195 和上调bFGF水平 |
| 4.2.2 miR-195 模拟物抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡 |
| 4.2.3 miR-195 抑制剂促进增殖并阻止细胞凋亡 |
| 4.2.4 HIF-1α被确定为miR-195 的直接靶标 |
| 4.2.5 miR-195 调控HIF-1α和 b FGF水平 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第7章 结论 |
| 创新点及不足 |
| 参考文献 |
| 作者简介及博士期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）TGF-β、BMP2和性激素相关蛋白对牦牛毛囊周期的调控研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 一 皮肤毛囊概述 |
| 1 毛囊的胚胎发育及结构 |
| 2 毛囊的形态学特点和周期性变化 |
| 3 哺乳动物毛囊形态学的研究 |
| 二 TGF-β、BMP2和性激素相关蛋白与毛囊周期的研究进展 |
| 1 转化生长因子-β及热休克蛋白与毛囊周期性变化的研究进展 |
| 2 骨形态发生蛋白及Noggin与毛囊周期性变化的研究进展 |
| 3 性激素相关蛋白与毛囊周期性变化的研究进展 |
| 三 牦牛皮肤毛囊(绒)研究进展及本研究的意义 |
| 1 牦牛的分布和适应性 |
| 2 牦牛被毛的经济价值 |
| 3 牦牛皮肤毛囊形态发育过程及周期性变化 |
| 4 本研究的意义和目的 |
| 参考文献 |
| 第二部分 研究部分 |
| 第一章 TGF-β和HSP70在牦牛毛囊生长期-退行期转换中的表达 |
| 1 试验材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 BMP2、BMPR-ⅠA和Noggin在牦牛毛囊休止期-生长期转换中的表达 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 DHT和E_2相关蛋白在牦牛毛囊不同时期皮肤中的表达 |
| 1 试验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（3）血管紧张素Ⅱ对皮肤弹力纤维的调控作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对皮肤弹性蛋白的调控 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 细胞株、原代细胞取材标本 |
| 1.1.2 试剂及液体配制 |
| 1.1.3 仪器及耗材 |
| 1.1.4 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 原代人皮肤成纤维细胞的鉴定 |
| 1.2.2 人皮肤成纤维细胞血管紧张素II受体的检测 |
| 1.2.3 血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对皮肤成纤维细胞增殖作用的检测 |
| 1.2.4 血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对皮肤成纤维细胞分泌弹性蛋白原的影响 |
| 1.2.5 EGFR及 ERK1/2 在血管紧张素II对弹性蛋白调控中的作用检测 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 双酶联合消化法培养原代人皮肤成纤维细胞 |
| 1.3.2 人皮肤成纤维细胞表达血管紧张素II受体 |
| 1.3.3 血管紧张素II及其受体拮抗剂调控弹性蛋白的表达 |
| 1.4 小结 |
| 二、肾素-血管紧张素系统抑制剂对小鼠皮肤弹力纤维的作用 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 试剂及液体配制 |
| 2.1.3 仪器及耗材 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 点阵激光作用后小鼠皮肤血管紧张素II的合成变化 |
| 2.2.2 点阵激光作用后小鼠皮肤血管紧张素II受体的表达变化 |
| 2.2.3 各实验组小鼠真皮厚度的变化 |
| 2.2.4 各实验组小鼠皮肤弹力纤维含量的变化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 不同物种皮肤弹力纤维的异同 |
| 2.3.2 点阵激光对皮肤弹力纤维的促进作用 |
| 2.3.3 点阵激光激活皮肤肾素-血管紧张素系统(RAS) |
| 2.3.4 抑制皮肤RAS系统对弹力纤维表达的影响 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 弹性蛋白表达的调控 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）维药异常黑胆质成熟剂对增生性瘢痕影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分：维药ASMq对兔耳增生性瘢痕的体内动物实验研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分：维药ASMq对增生性瘢痕来源成纤维细胞的体外实验研究 |
| 1 研究内容和方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 ：维药ASMq基于TGF-β/Smad通路防治增生性瘢痕分子机制 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（5）雌激素与瘢痕形成的相关研究进展（论文提纲范文）
| 1 胶原与瘢痕形成 |
| 2 细胞因子与瘢痕形成 |
| 2.1 TGF-β与瘢痕形成 |
| 2.2 VEGF与瘢痕形成 |
| 2.3 成纤维细胞生长因子 (FGFs) 与瘢痕形成 |
| 2.4 血小板源生长因子 (PDGF) 与瘢痕形成 |
| 3 雌激素对胶原及细胞因子的影响 |
| 3.1 雌激素对胶原的影响 |
| 3.2 雌激素对TGF-β的影响 |
| 3.3 雌激素对VEGF的影响 |
| 3.4 雌激素对FGFs的影响 |
| 3.5 雌激素对PDGF的影响 |
| 4 展望 |
（6）胚胎皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原及波形蛋白表达与超微结构变化的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 致谢 |
| 细胞因子与胚胎无瘢痕愈合(综述) |
（7）细胞因子与胚胎皮肤无瘢痕愈合（论文提纲范文）
| 1 细胞因子与胚胎皮肤无瘢痕愈合的关系 |
| 1.1 转化生长因子β (TGF-β) 家族 |
| 1.2 血小板源性生长因子 (PDGF) |
| 1.3 表皮生长因子 (EGF) |
| 1.4 碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) |
| 1.5 白细胞介素 (IL) |
| 2 细胞因子对胚胎皮肤无瘢痕愈合的作用机制 |
| 3 细胞因子在瘢痕治疗中的应用进展 |
| 4 细胞因子与胚胎皮肤无瘢痕愈合关系的研究前景 |
（8）汗腺发育相关基因及其联用骨髓间充质干细胞促进汗腺再生修复的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 胎儿汗腺发育过程的观察及汗腺发育相关基因的检测 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂配制 |
| 1.4 实验方法与步骤 |
| 1.5 统计学方法和数据处理 |
| 2.实验结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 第二部分 应用汗腺相关基因与BM-MSCs促进汗腺修复的研究 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂配制 |
| 1.4 实验方法与步骤 |
| 1.5 数据处理与统计学分析 |
| 2.实验结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 5.附图(测序报告) |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 攻读博士学位期间发表文章及参与科研情况 |
| 致谢 |
（9）人汗腺发生与修复过程中基因表达特征的系列研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 汗腺形态发生过程中相关基因的表达及意义 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 主要试剂及仪器 |
| 1.2 主要试剂配制 |
| 1.3 实验方法与步骤 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2.实验结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 第二部分 汗腺细胞融合与诱导形成过程中相关基因的表达及意义 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 主要试剂及仪器 |
| 1.2 主要试剂配制 |
| 1.3 实验方法与步骤 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2.实验结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 攻读学位期间发表文章和参与课题 |
| 致谢 |
（10）瘢痕组织中神经构筑的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 致谢 |
| 附录一：攻读学位期间发表的及拟发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
四、胎儿和少儿皮肤内碱性成纤维细胞生长因子及其受体的基因表达（论文参考文献）
- [1]双酚S通过调节碱性成纤维细胞生长因子影响恶性血管瘤细胞生物学特性的机制[D]. 刘大海. 吉林大学, 2020(08)
- [2]TGF-β、BMP2和性激素相关蛋白对牦牛毛囊周期的调控研究[D]. 宋亮丽. 甘肃农业大学, 2019(02)
- [3]血管紧张素Ⅱ对皮肤弹力纤维的调控作用及机制研究[D]. 孔杰. 天津医科大学, 2019(02)
- [4]维药异常黑胆质成熟剂对增生性瘢痕影响的实验研究[D]. 王虎军. 新疆医科大学, 2013(02)
- [5]雌激素与瘢痕形成的相关研究进展[J]. 伍杰,潘宁. 实用医院临床杂志, 2011(01)
- [6]胚胎皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原及波形蛋白表达与超微结构变化的研究[D]. 石慧娟. 泸州医学院, 2010(04)
- [7]细胞因子与胚胎皮肤无瘢痕愈合[J]. 石慧娟,程基焱. 四川解剖学杂志, 2008(01)
- [8]汗腺发育相关基因及其联用骨髓间充质干细胞促进汗腺再生修复的研究[D]. 韩兵. 中国人民解放军军医进修学院, 2007(02)
- [9]人汗腺发生与修复过程中基因表达特征的系列研究[D]. 周岗. 中国人民解放军军医进修学院, 2006(09)
- [10]瘢痕组织中神经构筑的实验研究[D]. 李昊. 山东大学, 2006(12)
标签：成纤维细胞论文; 瘢痕论文; 成纤维细胞生长因子论文; 细胞增殖论文; 胶原纤维论文;