大豆蛋白的分离与纯化论文

问：大豆活性肽的分离纯化方法

1. 答：① 对大豆粉进行水、碱两步提取；
   ② 制作Folin-酚法测定蛋白浓度的标准曲线；
   ③ 测定两步提取液的蛋白浓度（Folin-酚法）；
   ④ 将提取的大豆蛋白制成丙酮干粉。
   ⑤ 用微量凯氏定氮法测定提取的大豆蛋白质含量：
   样品→消化→蒸馏→滴定→计算
   ⑥ 双向纸层析测定大豆蛋白的氨基酸组成：
   样品处理（水解）→点样→酸性层析液中展层→碱性层析液中展层→显色→ 定性鉴定。
   关键步骤与注意事项
   ① 提取蛋白等电点沉淀时pH值的调节。
   ② Folin甲、乙试剂的使用条件和干扰因素；
   ③ 小心加样，切勿使样品沾污凯氏烧瓶口部、颈部。
   ④ 消化时，需斜放凯氏烧瓶（45o），火力先小后大，避免黑色消化物溅到瓶口、瓶颈壁上，以致影响测定结果。
   ⑤ 蒸馏时，切忌火力不稳，否则将发生倒吸现象。
   ⑥ 样品水解温度保持105度，使样品水解完全。
   ⑦ 层析液中的酸或碱的含量必须足够，而且在展层前必须用酸性层析液和氨水分别进行饱和，以防止层析滤纸上酸碱度不足的现象。
2. 答：那就是过分子筛啊，过完可以跑以下2D，直接打质朴，或是过液相。当然也可以做下离子交换。

问：蛋白质分离提纯方法

1. 答：1、盐析法：
   盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。
   2、有机溶剂沉淀法：
   有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其一、与盐溶液一样具有脱水作用；其二、有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。
   3、蛋白质沉淀剂：
   蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。
   4、聚乙二醇沉淀作用：
   聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。
   扩展资料：
   吸附层析
   1、吸附柱层析
   吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。
   2、薄层层析
   薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，然后按纸层析操作进行展层。
   3、聚酰胺薄膜层析
   聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。
   层析时，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，就能导致分离物质达到分离目的。

问：解释大豆蛋白的溶解性以及pH值对大豆蛋白溶解性的影响。

1. 答：当浸提pH超过等电点，豆粕中的蛋白质溶解度随pH的升高而增大，达到pH7时溶解度突增，达到pH12时蛋白质溶解度趋于最大。
   但在实际生产中一般采用pH7～9，这是因为当pH大于9时会使碱性太强而引起脱氨、脱羧、肽键断裂，又会发生“胱赖反应”，把氨基酸转变为有毒的化合物，而且影响产品风味，丧失食用价值。
   另外，pH过高，酸沉时用大量的盐酸，会使产品中的盐分增加，存在大量氯化钠的情况下即使达到等电点pH，蛋白质也不会沉淀，反而使蛋白质溶解，既浪费了酸碱，又不利于产品的质量和蛋白的功能性，也影响产品的得率。所以将浸提蛋白的pH控制在7～9范围内比较合适。
   扩展资料：
   蛋白质作为有机大分子分子化合物，在水中以分散态（胶体态）存在，因此，蛋白质在水中无严格意义上的溶解度，只是将蛋白质在水中的分散量或分散水平相应的称为蛋白质的溶解度。
   蛋白质溶解度的大小在实际应用中非常重要，因为溶解度特性数据在确定天然蛋白质的提取、分离和纯化时是非常有用的，蛋白质变性的程度也可以通过蛋白质的溶解行为的变化作为评价指标，此外，蛋白质在饮料中的应用也与其溶解性能有直接的关系。
   参考资料来源：
2. 答：当浸提pH超过等电点，豆粕中的蛋白质溶解度随pH的升高而增大，达到pH7时溶解度突增，达到pH12时蛋白质溶解度趋于最大。
   但在实际生产中一般采用pH7～9，这是因为当pH大于9时会使碱性太强而引起脱氨、脱羧、肽键断裂，又会发生“胱赖反应”，把氨基酸转变为有毒的化合物，而且影响产品风味，丧失食用价值。
   另外，pH过高，酸沉时用大量的盐酸，会使产品中的盐分增加，存在大量氯化钠的情况下即使达到等电点pH，蛋白质也不会沉淀，反而使蛋白质溶解，既浪费了酸碱，又不利于产品的质量和蛋白的功能性，也影响产品的得率。所以将浸提蛋白的pH控制在7～9范围内比较合适。
   扩展资料：
   蛋白质溶解度的大小受到一些条件如pH值、离子强度、温度、溶剂类型等的影响。蛋白质的溶解度在等电点时通常是最低的，pH值在高于或低于等电点时，蛋白质所带的净电荷为负电荷或正电荷，其溶解度均增大。蛋白质的溶解度在pI时虽然是最低的，但是对不同的蛋白质，还是有一定差异的。
   一些蛋白质如酪蛋白、大豆蛋白在等电点时几乎不溶，而乳清蛋白在等电点时的溶解度仍然很好。对于溶解性随pH值变化大的蛋白质，通过改变介质的酸碱度对其进行相应的提取、分离是十分方便的；而对于溶解性随pH值变化不大的蛋白质，则需要通过其他的方式才能达到分离、提纯的目的。
   参考资料来源：
3. 答：HP 值大一些应该对溶解性有好处约7.5左右，可以添加碳酸氢钠，还可以提高口感