一、中医药研究中动物实验的设计与应用（论文文献综述）
李磊,刘建勋,任钧国,付建华[1]（2022）在《中医药动物模型研究现状及展望》文中提出随着中医药现代化研究的不断深入,越来越多的疾病动物模型被广泛用于揭示中医基础理论、中药疗效评价及中药作用机制等研究中。本文梳理了中医药疾病动物模型的研究和发展现状,对中医药疾病动物模型建立和评价研究中常见的思路方法以及存在的问题进行介绍,为建立适合中医药特点的动物模型提供参考。
谢瑞[2]（2021）在《基于筋伤理论探讨退行性腰椎失稳的力学、病理学机制及手法干预研究》文中研究指明退行性腰椎失稳（Degenerative Lumbar Spinal Instability,DLSI）是临床中引发下腰痛的常见疾病,该病迁延难愈,反复发作,对患者健康及生活质量造成巨大影响。近年来国内外对于DLSI的研究投入在逐渐增加,在该病病理学、生物力学、诊断学及治疗学等领域的相关研究正在逐步深入开展。现代医学研究表明,人体脊柱稳定性是由以椎体、韧带、椎间盘等为代表的“内源性稳定系统”和以肌肉为代表的“外源性稳定系统”所共同维持的,双方任何一者出现损伤均会引发脊柱动静力失衡,造成失稳。这与中医药的“筋伤”理论相契合:脊柱相关结构中的关节突关节囊、韧带以及肌肉均发挥着“筋”的作用维持着脊柱的稳定与运动,增龄虚损、慢性劳损等情况致肝肾不足、筋骨失养,发为慢性筋伤;暴力损伤、过度负载致筋脉断裂、气滞血瘀,造成急性筋伤;“筋伤”情况下“筋”对“骨”的维系力量降低,“筋不束骨”而使“筋出槽,骨错缝”,“筋骨失衡”最终发为脊柱的节段失稳。然而,失稳发生的机制仍不明晰,有待进一步深入探究。目前,国内外对于DLSI的机制研究多数关注于关节三联体（Tri-joint Complex,TJC）的组织退变或是脊柱运动节段（Functional Spinal Unit,FSU）应力分布的改变,尚缺乏动态观察由早期退变发展到最终失稳过程中FSU/TJC生物力学特性改变与组织退变情况二者同时研究的报道。这种机械途径和生物因素二者交互影响导致失稳的病机认识仍在进一步探索之中。临床方面,手法治疗作为针对DLSI的一种临床常用的特色治疗方式对改善该病患者的临床症状疗效显着,前期多中心研究研究证实坐位腰椎旋转手法对治疗退行性腰椎滑脱症等腰痛类疾病取得了较好疗效,并对该手法的作用机制方面进行了运动学的研究,但目前尚缺乏采用该手法治疗DLSI的临床报道。基于此,本课题的基础部分开展了针对DLSI发病机制的力学与生物学相关实验,动态呈现了从早期退变发展到最终失稳过程中FSU及TJC组织的力学特性变化及生物学组织退变情况,并对二者的相关性和其交互作用导致DLSI的发病机制进行了初步探讨;临床部分通过开展采用坐位腰椎旋转手法治疗DLSI的随机对照试验,评价其临床疗效。本课题为导师朱立国教授国家自然科学基金重点项目“基于‘筋伤’致筋骨失衡的病理及力学基础探讨中医药防治退行性腰椎失稳的效应机制研究”的前期研究部分,相关结论将为中、后期其采用中医药干预DLSI的基础和临床研究提供前期基础和理论支持,以期为进一步探讨该病机制及优化中医药对DLSI早期防治提供依据。基础研究“筋伤”致DLSI的力学与病理学机制研究目的:基于“筋伤”理论,通过建立以内源性（韧带损伤）和外源性（肌肉损伤）腰椎失稳的动物模型,观察并比较两种动物模型失稳过程中FSU/TJC的力学特性改变与组织退变情况,试从生物力学和病理学角度探讨二者的交互作用为导致DLSI的发病机制。方法:55只新西兰兔按随机数字表法分为外源性“筋伤”组、内源性“筋伤”组和正常对照组。其中9只兔于造模前及造模后的4w、8w、16w、24w进行影像学X线摄片与椎体滑移比例、椎间隙高度指数的指标评价;7只兔的L4/5运动节段于造模前及造模后的8w、16w、24w进行Micro-CT扫描和有限元模型建立,检测TJC组织在前屈后伸、左右侧屈和左右旋转动作时的平均应力、应力云图及变化;39只兔的多组运动节段于造模前及造模后的4w、8w、16w、24w进行椎间盘蠕变、疲劳加载及拉断等生物力学实验,检测椎间盘弹性变形能力和弹性势能储备、抗压缩能力和抗拉能力;同时对椎间盘髓核、软骨终板及关节突关节软骨进行HE、番红固绿染色及测定AGC、COL2a1、MMP3,Caspase3蛋白相对表达量的Western blot实验,检测各时间点TJC组织的病理学退变情况及变化。结果:（1）影像学评价指标:①滑移比例SLIP:对比Ow,外源组在4w时即出现L4椎体的SLIP显着增大（P<0.05）,8w为L1、L2、L5-L7（P<0.05）,24w为L3（P<0.05）。内源组4w出现显着滑移的为L1、L2、L6、L7（P<0.05）,8w为L4、L5（P<0.05）,L3椎体无统计学意义。对照组8w出现显着差异的为L1、L4（P<0.05）,16w 时为 L2、L3、L6、L7（P<0.05）,L5 差异无统计学意义。同时间点3组相比,外源组SLIP>内源组（P<0.05）的为8w-24w的L1,4w-24w的L4;外源组SLIP>对照组（P<0.05）的为4w-24w的L1、L4,8w-24w的L2、L5、L6,16w 的 L7;内源组 SLIP>对照组（P<0.05）的为 8w 的 L1、L2,8w-24w的L4、L5、L6,16w-24w的L7;内源组SLIP>外源组（P<0.05）的为8w时的L6。②椎间隙高度指数DHI:对比0w,外源组在4w时出现DHI显着降低（P<0.05）的为 L1/2、L3/4-L6/7,8w 为 L2/3、L7S1（P<0.05）;内源组在 4w 时出现 DHI显着降低（P<0.05）的为 L1/2、L3/4-L7S1,8w 为 L2/3（P<0.05）;对照组在4w 时出现 DHI 显着降低（P<0.05）的为 L4/5,8w 为 L5/6-L7S1（P<0.05）,16w为 L1/2、L2/3（P<0.05）,24w 为 L3/4（P<0.05）。同时间段 3 组相比,外源组DHI<内源组(P<0.05的为24w的L1/2、L5/6,4w的L4/5;外源组DHI/内压组 DHI<对照组（P<0.05）为 4w-24w 的 L1/2、L4/5、L6/7,8w-24w 的 L2/3、L3/4、L5/6、L7S1。内源组 DHI<外源组（P<0.05）为 8w 时的 L5/6。（2）有限元分析:①TJC组织平均压力:随着时间的延长,相比初始模型,内、外源组在前屈后伸、左右侧屈、左右旋转的动作时,椎间盘和关节突关节软骨面的平均压力逐渐升高;且外源组所受平均压力大于内源组。②应力分布变化:相比初始模型,随着时间的延长,内、外源组整体应力范围变宽变广:前屈、后伸时,椎间盘应力集中分别在前后侧纤维环上,前屈时椎体关节突关节几乎不受力,后伸时关节面应力范围增大,应力集中在四个软骨关节面的偏上部;左、右侧屈时,椎间盘应力集中在同侧纤维环的中后部,关节突关节面则呈现出典型的“对角线”式应力集中;左、右旋转时,椎间盘应力范围在同侧纤维环中后部,但对比侧屈时明显受力范围较小,更多的力集中在关节突关节软骨面上,出现“对应”式应力集中。（3）生物力学特性:①蠕变位移量:随着时间的延长,相比对照组,内、外源组L3/4 FSU椎间盘蠕变位移量逐渐减低（P<0.05）;同一时间点相比,4w-24w各时间点蠕变位移值为外源组<内源组<对照组（P<0.05）。内、外源组相比,在4w和16w差异较小（P>0.05）,在8w和24w差异显着（P<0.05）。②疲劳试验-椎间盘位移差:外源组的间盘位移值随时间增加而增大（P<0.05）;内源组椎间盘位移差的变化逐渐增大,仅0w与8w、4w与8w时具有统计学意义（P<0.05）;对照组缓慢增大（P<0.05）。同一时间点相比,4w-24w各时间点椎间盘位移差值均为外源组>内源组>对照组。4w时外源组与对照组的差异具有统计学意义（P<0.05）;8w、16w、24w时3组组间差异出现显着性（P<0.05）。③拉断实验-椎间盘抗拉能力:随时间增加,相比对照组,内、外源组椎间盘的破坏载荷显着减少（P<0.05）。同一时间点相比,4w-16w时破坏载荷数值为外源组<内源组<对照组,24w时内源组<外源组<对照组。各时间点内、外源组与对照组间差异显着（P<0.05）,但内、外源组间差异不显着（P>0.05）。（4）组织退变:①HE染色和番红固绿染色:随着时间的延长,外、内源组纤维环较对照组排列逐渐紊乱,在24w时可显着观察到不规则甚至出现断裂。椎间盘内髓核细胞显着性减少,髓核变得不规则,体积变小,部分髓核组织丢失后留有空隙,皱缩程度逐渐加重,部分髓核内空隙增大。终板软骨钙化层底部凹凸不平情况逐渐加重,出现多条潮线的复制。内、外源组关节突软骨的软骨基质相比对照组由表层至深层染色逐步加重,且可明显从表浅层、移行层观测到。内、外源组软骨细胞呈扁平、长梭形和多角形,呈簇状,部分细胞核变形、萎缩。同一时段对照组的软骨细胞呈梭状或椭圆状,细胞排列均匀有序;②Western blot:同一组在不同时间点相比,各组AGC、COL2a1蛋白在髓核、终板软骨、关节突关节软骨中的表达水平逐渐降低（P<0.05）,而Caspase3、MMP3蛋白在组织中表达水平逐渐上升（P<0.05）;同时间不同组相比,4w-24w各时间点各组AGC、COL2a1蛋白相对表达量为外源组<内源组<对照组（P<0.05）,各组MMP3、Caspase3蛋白相对表达量为外源组>内源组>对照组（P<0.05）。（5）力学与病理学相关性研究:Pearson相关性研究表明,同一组别在每个时间点时,其FSU椎间盘蠕变位移量和TJC髓核AGC蛋白相对表达量之间相关系数R值均非0,提示二者存在相关关系,检验P值均大于0.05,表明二者相关性不显着。结论:（1）内、外源性“筋伤”均会造成兔L1-L7椎体SLIP不同程度的增大以及L1/2-L7/S1椎间DHI不同程度的降低,各椎体出现滑移增大、椎间隙减少的时间、程度虽有差别,但失稳及退变表现随时间增长加重;肌肉损伤对兔腰椎SLIP增大、DHI降低的影响可能大于韧带损伤。（2）内、外源性“筋伤”均会造成FSU在活动时出现TJC组织发生平均应力增大、整体应力范围扩大和应力集中分布异常的生物力学改变;肌肉损伤对TJC应力增大、应力分布异常的影响可能大于韧带损伤。（3）内、外源“筋伤”均会导致FSU椎间盘出现弹性变形能力、弹性势能储备、抗压缩能力、抗拉能力的降低,且这些生物力学特性的改变随时间增长而加重;肌肉损伤对于椎间盘蠕变特性和抗压缩能力降低的影响可能大于韧带损伤。（4）内、外源“筋伤”均会造成TJC组织AGC、COL2a1蛋白表达显着降低,MMP3、Caspase3蛋白表达显着升高,TJC组织形态也发生了显着的退变,这些变化的程度均随时间增长而加重;肌肉损伤对于TJC组织病理学退变程度的影响可能大于韧带损伤。（5）“筋伤”致DLSI退变的过程中,伴随着FSU和TJC组织病理退变逐步加重,其生物力学特性出现蠕变特性、抗疲劳特性降低、FSU应力分布异常等表现,力学因素和组织病理退变二者交互影响形成恶性循环,加重了腰椎失稳,可能是造成DLSI发生的重要原因。临床研究坐位腰椎旋转手法治疗DLSI的临床研究目的:采用坐位腰椎旋转手法干预退行性腰椎失稳（DLSI）,为该手法治疗DLSI的研究提供临床依据,为进一步探讨该病机制及优化中医药DLSI早期防治策略提供依据。方法:采用随机对照临床研究方法,选取就诊于中国中医科学院望京医院脊柱二科DLSI患者,依据本课题纳入和排除标准选取共计60例。采用随机数字法将患者分为治疗组（坐位腰椎旋转手法组,n=30）和对照组（仰卧位腰椎牵引组,n=30）。治疗周期设定为2周,治疗组隔日1次,3次/周,对照组1次/日,5次/周。评分指标在治疗前、治疗开始的第2、6、13天及随访1月时采用疼痛视觉模拟标尺法（VAS）和日本骨科学会（JOA）下腰痛评分标准进行评分、记录,计算各时间点评分与治疗前评分的差值;治疗结束时（13d）和随访时（1m）应用JOA腰痛疾患疗效评定标准对患者进行总体疗效的评价。统计学方法采用SPSS21.0软件进行指标分析;计数资料和等级资料采用例数来表示,计量资料采用（x±s）表示;计数资料的组间比较采用X2检验,等级资料应用Wilcoxon秩和检验;计量资料同组内不同时间段比较采用配对t检验;同一时间点的评分组间比较、评分差值比较均采用秩和检验;所有统计结果以P<0.05定义差异显着,具有统计学意义。结果:（1）一般资料:本研究纳入的60例DLSI患者中,男性23例、女性37例,分别占到总数的38.33%和61.67%。患者的年龄范围为45-65岁,整体平均年龄56.25±6.46岁。其中治疗组男13例,女17例,平均年龄56.50±6.27岁,平均病程13.13±23.31月,发生腰椎失稳的节段为L3/4、L4/5、L5/S1节段,患病人群的数量分别为4例、19例、7例。对照组男10例,女20例,平均年龄为 56.00±6.74岁,平均病程为10.87±21.39月,L3/4、L4/5、L5/S1为失稳节段的分别为3例、17例、9例。经分析患者的性别、年龄、病程、失稳节段的分布两组间差异无统计学意义（P>0.05）,一般资料的各项基线具备可比性。（2）VAS评分:治疗组自治疗2d-随访1m时所有时间点VAS评分较治疗之前均降低（P<0.05）;对照组各时间点VAS评分较治疗前相比均下降,2d时差异不显着（P>0.05）,6d至1m随访时差异明显（P<0.05）。（3）JOA评分:治疗组与对照组在各时段的JOA评分均高于治疗前（P<0.05）。（4）VAS差值与JOA差值:相同时间点治疗组的VAS差值、JOA差值均显着大于对照组（P<0.05）。（5）总体疗效:治疗结束时（13d）,治疗组、对照组的总有效率分别为96.67%,83.33%;愈显率分别为90.00%、23.33%;两组相比治疗组的总体疗效优于对照组（P<0.05）。随访时（1m）,治疗组、对照组的总有效率分别为96.67%、66.67%;愈显率分别为66.67%、3.33%;两组相比治疗组显着优于对照组（P<0.05）。（6）安全性评价:治疗期间两组DLSI患者均未出现不良反应。结论:（1）治疗及随访各时间点,坐位腰椎旋转手法与仰卧位腰椎牵引法均可以改善退行性腰椎失稳的症状体征和临床疼痛,且手法治疗的起效时间和治疗效果较牵引治疗更快、更好;（2）治疗结束时和随访时,坐位腰椎旋转手法治疗退行性腰椎失稳的总体疗效优于仰卧位腰椎牵引法;（3）采用坐位腰椎旋转手法治疗退行性腰椎失稳症安全性高、短期疗效稳定、起效时间较快,取得了满意的临床疗效,值得临床推广。
闫韶花[3]（2021）在《补肾健脾法防治结直肠癌辅助化疗所致骨髓抑制的疗效及机制探索》文中进行了进一步梳理化疗所致的骨髓抑制,是肿瘤治疗中不可忽视的问题。中医药防治结直肠癌辅助化疗所致的骨髓抑制,已有相关临床研究,但多为小样本、单中心的研究,无法为临床提供高质量的循证医学证据。本研究首先运用系统评价和meta分析的方法,整合已有的临床研究,评价中医药防治结直肠癌辅助化疗所致骨髓抑制的疗效;其次,以结肠癌根治术后拟行辅助化疗的患者为研究人群,分析脾肾阳虚证患者肠道菌群的特征;最后,基于网络药理学,探索导师经验方—芪菟二至方防治化疗所致的骨髓抑制的作用机制,并在动物实验中进行验证和探索。第一部分:口服中药改善结直肠癌辅助化疗所致骨髓抑制的系统评价和meta分析研究目的:评价口服中药防治结直肠癌辅助化疗所致骨髓抑制的疗效。研究方法:在8个电子数据库检索中医药防治结直肠癌术后辅助化疗导致的骨髓抑制的随机对照研究。检索时间范围均为:建库至2021年1月20日。按照纳入、排除标准进行文献筛选、偏倚风险评估和数据提取,运用RevMan 5.3对纳入的文献进行偏倚风险评估和数据合成。研究结果:研究共纳入37篇文献,全部为随机对照临床研究,共涉及受试者2705名。Meta分析结果显示,口服中药可降低结直肠癌辅助化疗所致的白细胞减少的发生风险（RR=0.67,95%CI[0.61,0.75],P<0.00001）、血红蛋白降低的发生风险（RR=0.75,95%CI[0.63,0.89],P<0.0009）、血小板减少的发生风险（RR=0.71,95%CI[0.60,0.82],P<0.0001）、中性粒细胞减少的发生风险（RR=0.60,95%CI[0.46,0.79],P=0.0003）、≥3 级白细胞减少的发生风险（RR=0.36,95%CI[0.21,0.64],P=0.04）、≥ 3级血红蛋白减少的发生风险（RR=0.36,95%CI[0.13,0.95],P=0.04）、≥ 3级中性粒细胞减少的发生风险（RR=0.38,95%CI[0.16,0.89],P=0.03）;在降低红细胞减少的发生风险、≥ 3级血小板减少的发生风险、≥ 3级红细胞减少的发生风险方面,没有疗效;在提高白细胞计数、红细胞计数、血小板计数及血红蛋白方面,没有疗效。结论:口服中药可降低结直肠癌辅助化疗所致的白细胞减少、血红蛋白降低、血小板减少和中性粒细胞减少的发生风险,也可降低≥3级白细胞减少、血红蛋白减少、中性粒细胞减少的发生风险。临床实践中,可推荐口服中药用于防治结直肠癌辅助化疗所致的骨髓抑制。中医药防治结直肠癌辅助化疗所致的骨髓抑制,以补肾健脾方药为主。第二部分:Ⅱ期（高危）/Ⅲ期结肠癌根治术后脾肾阳虚证患者肠道菌群分布特征研究目的:探索结肠癌根治术后脾肾阳虚证患者肠道菌群的分布特征。研究方法:收集中国中医科学院西苑医院、江苏省中医院等收治的Ⅱ期（高危）/Ⅲ期结肠癌根治术后、拟行辅助化疗的患者,按照中医辨证分为脾肾阳虚证组和非脾肾阳虚证组,分别收集患者的粪便标本,采用16s rDNA高通量测序技术,分析两组患者肠道菌群的分布特征。研究结果:共纳入受试者32人,其中脾肾阳虚证组11人,非脾肾阳虚证组21人,两组受试者在性别、年龄、原发部位方面,无统计学差异。脾肾阳虚证和非脾肾阳虚证患者肠道菌群在物种丰富度、多样性和均匀度方面无显着差异;脾肾阳虚证组和非脾肾阳虚证组患者的肠道菌群均以拟杆菌门和厚壁菌门为主,但两组的厚壁菌比拟杆菌的比例存在差异;脾肾阳虚证患者肠道肠杆菌科数目较多,而非脾肾阳虚证患者肠道萨特菌科细菌较多;脾肾阳虚证组患者肠道黄杆菌属和梭状芽胞杆菌属细菌丰度升高。结论:（1）结肠癌根治术后,脾肾阳虚证患者与非脾肾阳虚证患者肠道菌群的丰度没有显着差异。（2）脾肾阳虚证组与非脾肾阳虚证组患者肠道菌群中厚壁菌比拟杆菌的比例可能存在差异。（3）脾肾阳虚证患者肠道肠杆菌科细菌数目较多,而非脾肾阳虚证患者肠道萨特菌科细菌数目较多;脾肾阳虚证组患者肠道黄杆菌属和梭状芽胞杆菌属细菌丰度升高。第三部分:基于网络药理学的芪菟二至方防治化疗所致骨髓抑制的机制初探研究目的:探索芪菟二至方防治化疗所致骨髓抑制的作用机制。研究方法:（1）在中药系统药理数据库和分析平台和中药百科全书数据平台检索芪菟二至方组成药物的主要成分。（2）将检索到的药物成分,借助Swiss Target Prediction平台进行靶点预测。（3）借助药物靶点数据库、人类基因数据库、药物银行数据库、人类孟德尔遗传数据库等检索化疗所致的骨髓抑制的疾病相关靶点。（4）利用韦恩分析获得芪菟二至方与化疗所致骨髓抑制的共同靶点,借助String数据库,进行有效成分-疾病靶点的蛋白互作（protein-protein interaction,PPI）网络构建。（5）借助Metascape对候选基因行基因本体（Gene Ontology,GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）分析,并将富集结果可视化。研究结果:筛选出黄芪潜在活性成分15个、当归潜在活性成分6个、墨旱莲潜在活性成分10个、女贞子潜在活性成分10个、菟丝子潜在活性成分11个、补骨脂潜在活性成分49个;最终获得芪菟二至方潜在作用靶点575个。检索到化疗所致骨髓抑制的疾病相关靶点3205个。通过韦恩图,最终获得交集靶点347个。PPI网络结果提示芪菟二至方-化疗所致骨髓抑制潜在靶点主要涉及PIK3CA、PIK3R1、MAPK1、SRC、MAPK3、AKT1、STAT3 等,GO功能和KEGG通路富集分析结果提示这些靶点主要涉及细胞衰老、PI3K-Akt信号通路和NF-κB信号通路等。结论:PI3K-Akt途径、细胞衰老、NF-κB信号通路可能是芪菟二至方发挥作用的主要途径。第四部分:5-Fu/5-Fu+L-OHP诱导骨髓抑制小鼠的模型研究研究目的:确定5-Fu诱导化疗所致骨髓抑制动物模型的最佳给药剂量,探索 5 氟尿嘧啶（5-Fluorouracil,5-Fu）联合奥沙利铂（oxaliplatin,L-OHP）诱导骨髓抑制动物模型的方法。研究方法:100只SPF级雄性BALB/c小鼠,随机分为5组（n=20）,具体给药方案:单药高剂量组5-Fu 180 mg/kg,单药低剂量组5-Fu 150 mg/kg,双药高剂量组 5-Fu 150 mg/kg+L-OHP 7.2 mg/kg,双药低剂量组 5-Fu 112.5 mg/kg+L-OHP 5.4 mg/kg,正常对照组0.9%NaCl溶液,给药方式均为一次给药、腹腔注射。观察小鼠一般情况变化,体重、外周血象的变化。d6每组处死8只小鼠、d13处死剩余小鼠,检测小鼠骨髓有核细胞计数。研究结果:（1）死亡情况:d7-d13,双药高剂量组死亡4只,单药高剂量组死亡6只。（2）体重:与正常对照组相比,模型组小鼠体重均先下降、后上升,以双药高剂量组和双药低剂量组下降最为明显。（3）外周血:d6,与正常对照组相比,模型组小鼠白细胞、血小板均明显下降（P<0.01）;d13,单药高剂量组小鼠白细胞与正常对照组的差异无统计学意义（P>0.05）,单药低剂量组和双药高、低剂量组白细胞计数高于正常对照组,但差异无统计学意义（P>0.05）;模型组小鼠血小板计数明显高于正常对照组（P<0.01）。红细胞、血红蛋白呈持续下降趋势。（4）骨髓有核细胞计数:d6,模型组小鼠骨髓有核细胞计数显着低于正常对照组（P<0.01）;d13,模型组小鼠骨髓有核细胞计数高于d6（P<0.01）,仍低于正常对照组（P<0.01）,双药低剂量组小鼠骨髓有核细胞计数高于单药低剂量组和双药高剂量组（P<0.01）。结论:（1）四种化疗方案均可诱导小鼠骨髓抑制;（2）单药高剂量组、双药高剂量组给药剂量过大。（3）单药低剂量组和双药低剂量组在骨髓抑制的程度、体重和生存率方面无差异。第五部分:芪菟二至方防治5-Fu诱导的小鼠骨髓抑制的疗效及机制探索研究目的:评价芪菟二至方防治5-Fu诱导的骨髓抑制的疗效,探索其作用机制。研究方法:120只SPF级雄性BALB/c小鼠,随机分为6组,每组20只:中药高、中、低剂量组提前7天给予相应的中药灌胃;d0,除正常对照组,其余小鼠予 5-Fu 150mg/kg,腹腔注射（intraperitoneal injection,ip）,诱导骨髓抑制。中药高、中、低剂量组d0-d13继续给予中药灌胃,阳性对照组于造模次日（d1）开始,予粒细胞集落刺激因子（human granulocyte colony stimulating factor,G-CSF）腹腔注射,每日1次。d-6、d0及造模后隔日分别对小鼠称重、取尾尖血测血常规;d6、d13各处死半数小鼠、取材。检测小鼠骨髓有核细胞计数,骨髓细胞周期,血浆TNF-α、IL-6、ROS、INF-γ、SCF含量。d6,正常对照组、模型组、中药中剂量组各取3只小鼠的骨髓组织,Western blot、qPCR法分别检测骨髓组织中p38、E2F、c-myc等的表达。研究结果:（1）血常规:①白细胞:d6,与正常对照组相比,模型组小鼠白细胞降低（P<0.01）;芪菟二至方高、中剂量组白细胞高于模型组（P<0.01或P<0.05）。d13,模型组小鼠白细胞低于正常对照组（P<0.05）,芪菟二至方高剂量组白细胞计数高于模型组（P<0.05）。②红细胞、血红蛋白:d6、d13模型组小鼠红细胞、血红蛋白均低于正常对照组（P<0.05或P<0.01）;芪菟二至方治疗组红细胞、血红蛋白与模型组相比无统计学差异（P>0.05）。③血小板:d6,模型组小鼠血小板显着低于正常对照组（P<0.01）,芪菟二至方治疗组与模型组相比,差异无统计学意义（P>0.05）;d13,模型组小鼠血小板高于正常对照组（P<0.01）,芪菟二至方治疗组与模型组相比,血小板的差异无统计学意义（P>0.05）。（2）骨髓有核细胞:d6,模型组小鼠骨髓有核细胞计数明显下降（P<0.01）,芪菟二至方高、中、低剂量组骨髓有核细胞计数均高于模型组（P<0.01或P<0.05）;d13,与正常对照组相比,模型组小鼠骨髓有核细胞计数下降（P<0.01）;芪菟二至方治疗组骨髓有核细胞计数高于模型组（P<0.01）。（3）脾脏指数和胸腺指数:d6,与正常对照组相比,模型组小鼠脾脏指数、胸腺指数降低（P<0.01）;与模型组相比,芪菟二至方高剂量组脾脏指数、胸腺指数升高（P<0.01）。d13,模型组小鼠脾脏指数高于正常对照组（P<0.01）,胸腺指数低于正常对照组（P<0.01）,芪菟二至方治疗组脾脏指数、胸腺指数与模型组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。（4）细胞周期及细胞增殖指数（proliferation index,PI）:d6,与正常对照组相比,模型组小鼠骨髓中G0/G1期细胞显着升高（P<0.01）,S期和G2/M期细胞比例降低（P<0.05）,PI降低（P<0.01）;芪菟二至方高、中、低剂量组小鼠骨髓中G0/G1期细胞比例均降低（P<0.01或P<0.05）,S期和G2/M期细胞比例均升高（P<0.05或P<0.01）,PI升高（P<0.05或P<0.01）。（5）细胞因子:d6,模型组小鼠血浆TNF-α、IL-6、ROS、SCF含量升高（P<0.01）,INF-γ含量降低（P<0.05）。芪菟二至方可能逆转这种变化。（6）Western blot:d6,模型组小鼠骨髓组织p38、E2F2表达较正常对照组上升,差异无统计学意义（P>0.05）;芪菟二至方中剂量治疗组小鼠骨髓组织p38、E2F2表达下降,差异无统计学意义（P>0.05）。（7）qPCR:d6,模型组骨髓E2F相对表达量升高（P<0.05）;芪菟二至方中剂量治疗组较模型组小鼠骨髓E2F相对表达量降低,差异无统计学意义（P>0.05）。模型组小鼠骨髓c-myc表达增加（P<0.05）;与模型组相比,芪菟二至方治疗组小鼠骨髓c-myc相对表达下降（P<0.01）。结论:（1）芪菟二至方能缓解5-Fu诱导的骨髓有核细胞减少;高、中剂量可有效防治造模小鼠的白细胞减少;芪菟二至方防治5-Fu诱导的白细胞减少存在剂量效应。（2）芪菟二至方高剂量组可改善骨髓抑制实验小鼠的免疫功能。（3）芪菟二至方可调节骨髓抑制小鼠骨髓中G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例,提高骨髓细胞增殖指数。（4）芪菟二至方可能通过调节骨髓抑制小鼠血浆中的TNF-α、IL-6、SCF、ROS、INF-γ发挥作用。（5）芪菟二至方中剂量可下调5-Fu造模小鼠骨髓组织c-myc mRNA的表达,对骨髓组织p38、E2F2有下调的趋势。
钱真真[4]（2021）在《基于缝隙连接通道的附子心脏毒性早期预警及风险防控研究》文中进行了进一步梳理中药的安全性问题一直是影响行业发展的重要问题,从马兜铃事件到何首乌事件,部分有毒药材引起的安全性问题,对中医药的发展和推广应用都造成了严重影响,如何预防中医药的安全性问题,特别是针对有毒药材,建立有毒药材的风险防控措施,对提高中药用药的安全性有重要的意义。附子,辛甘大热,归心肾脾,具有回阳救逆,补火助阳,散寒止痛之用,素为历代医家所喜用,在临床有效性上具有不可替代性。但因其毒性,使得附子及其复方制剂的安全性问题成为限制其临床使用的重要阻碍。附子毒性中以其心脏毒性最为常见,也最为致命。附子心脏毒性机制涉及离子通道、线粒体功能、细胞膜氧化损伤及缝隙连接通道等。其中,缝隙连接通道是一种特殊通道,主要负责连接相邻心肌细胞并参与调控其间化学信息的交换与电耦联,是维持正常心脏电活动的重要保证。目前关于附子心脏毒性的缝隙连接通路研究较少,尚未阐明其具体作用机制。基于此,本研究依托于国家重大科学工程建设项目计划（体现中药特点的重大疾病新药临床评价技术平台建设）,以附子心脏毒性为研究切入点,以缝隙连接通道为机制探索,从“成分-通路-靶点-临床评价”等方面开展“附子生物碱单体-药材-复方”等一体化、全链条的附子毒性研究、机制探索及风险防控,为构建有毒中药安全性评价体系提供参考。本研究包括以下四部分内容:第一部分 文献研究目的基于既往文献研究,围绕附子毒性,层层递进逐步梳理出课题的研究切入点,为进一步开展附子心脏毒性、构建附子安全性评价体系及风险防控研究提供理论基础与指导。方法首先基于Citespace软件对附子不良反应的相关研究进行文献计量分析;其次,基于既往文献研究对附子心脏毒性进行综述;最后,借助Pubchem、PDB数据库、PharmMapper数据库等导出附子双酯型生物碱的化学结构,及缝隙连接通道相关调控蛋白（CX40、CX43、SCN5A）的蛋白结构,并将此调控蛋白对应的基因靶点导入FunRich软件进行基因信息交互及生物进程富集分析。结果第一章文献计量:纳入研究文献245篇,最早研究可以追溯到1980年,大致可分为萌芽期（1980年到2004年）、快速增长期（2004年至今）;涉及作者548人,涉及单位/机构110家,发表文献最多的单位为成都中医药大学旗下相关单位（44篇,17.96%）。快速增长期涉及关键词428个,有23个出现频次≥5的,“心脏毒性”出现频次为11次,为领域研究较新的关键词,故基于此开展下一步关于附子心脏毒性的文献综述研究。第二章文献综述:附子心脏毒性表现包括心悸、心律失常及血压异常等,甚者可伴见心源性休克,甚至引起死亡。梳理化学成分包括生物碱及糖类、脂类等非生物碱成分等。心脏毒性物质基础主要是双酯型生物碱。毒性机制涉及离子通道、线粒体功能、细胞膜氧化损伤及缝隙连接通道等,其中,缝隙连接通道尚未研究清晰,涉及CX40、CX43、SCN5A等,故基于此开展下一步附子心脏毒性缝隙连接通道生物进程调控研究。第三章生物进程:数据库检索附子化学成分结构、缝隙连接通道调控蛋白的2D、3D结构,导入FunRich软件,对各基因进行交互信息分析,发现这3个基因与SRC、CSK等33个基因产生交互,生物进程涉及oligomerization of connexins into connexons、transport of connexons to the palsma membrane、regulation of gap junction activity、c-src mediated regulation of Cx43 function and closure of gap junctions、Transport of connexins along the secretory pathway、Microtubule-dependent trafficking of connexons from Golgi to the plasma membrane 等 6 个。小结附子不良反应众多,心脏毒性逐渐成为学者们的关注热点;附子心脏毒性机制涉及离子通道、线粒体功能、细胞膜氧化损伤及缝隙连接通道等。缝隙连接通道是心肌细胞间进行信息交换及电耦联的重要通路,可能通过参与调控离子通道影响心脏电生理进而产生心脏毒性。缝隙连接通道相关调节蛋白（CX40、CX43、SCN5A）对应的基因靶点与人体多个基因产生交互,参与人体多个生物进程。第二部分 附子生物碱的实验研究目的从附子毒性物质基础出发,探索附子单、双酯2种生物碱的毒性差异,毒性机制及毒性代谢特点,为构建附子安全性评价体系及风险防控研究奠定基础。方法首先,通过大鼠H9C2心肌细胞对附子主要毒性生物碱-双酯型生物碱（乌头碱）进行了心肌细胞毒性实验,实验中涉及的技术方法有:细胞孵育、细胞活力检测、生长曲线绘制、ELISA检测、细胞漏出率计算等;其次,对附子单、双酯2种生物碱进行了大鼠心脏毒性验证与比较,实验中涉及的技术方法有:大鼠灌胃、眼眶丛静脉采血、心电图检测,相关心脏毒性指标的ELISA检测等。最后,对附子单、双酯2种生物碱在大鼠体内的代谢特点进行了探索性研究,研究借助UPLC技术对大鼠灌胃后各时点采集的血液样本进行定性定量分析。结果细胞实验:乌头碱最小毒性浓度为0.03125%（0.2018mol/l）,IC50为2.882mmol/l,低浓度（0.0250mol/l、0.05040mol/l、0.10090mol/l）呈正向激发作用,当浓度在0.2018-1.6144mol/l时呈现出浓度、时间依赖性;在4h内随着药物作用时间的延长,细胞形态逐渐畸变,细胞核逐渐缩小,边界逐渐模糊,细胞间隙逐渐增大,细胞排列不规整;常规指标LDH、c-TNI、CK检测中,各浓度、时间组间差异呈现出统计学意义（P<0.05）;预警指标:与Control组,各浓度、时间组间组的SCN5A、CX43差异均无统计学意义（P值均>0.05）,CX40差异有统计学意义（P值<0.05）。动物实验:乌头碱最小毒性剂量为0.3mg/kg,以此剂量开展的等剂量下2种生物碱的毒性验证与比较,结果:1)ECG:心率:AC组90min、120min与KB组有差异（P值分别为0.0293、0.0093）,BAC组始终与KB组无差异（P值均>0.05）;QTc:AC 组在 5min、10min 时有差异（P 值分别为 0.0097、0.0255）,BAC组除20min时无差异（P=0.0593）其余各时点均有差异（P值分别为0.0080、0.0426、0.0200、0.0007、0.0007、0.0007、0.0413）。2)常规指标:CK:AC组、BAC组均有差异（P值分别为<0.0001、0.0097）;c-TNI:AC组、BAC组均有差异（P值分别为0.0043、0.0005）;LDH:AC组、BAC组均有差异（P值均<0.0001）。3)预警指标:SCN5A:AC组有差异（P=0.0126）、BAC组无差异（P=0.6407）;CX40:AC 组有差异（P<0.0001）、BAC 组无差异（P=0.0828）;CX43:AC组、BAC组均有差异（P值分别为0.0011、0.0107）。4)其他指标:H-FABP:AC组、BAC组均有差异（P值均<0.0001）。药代动力学研究:AC血浆中达峰时间约在45min,BAC约为20min;AC与BAC药代动力学参数比较均存在明显差异,Cmax、Tmax、AUCO-t、AUMCO-t、MRTO-t的 P 值分别为<0.0001、0.0151、0.0013、0.0132、0.0177。小结1)AC较低浓度（0.03125%）即可引起H9C2心肌细胞毒性改变,引起大鼠毒性改变而不引起大鼠死亡的AC剂量为0.3mg/kg;2)BAC毒性剂量下心电图中心率可能无明显改变,需进一步结合QTc、常规心脏毒性指标（CK、LDH、从c-TNI）及缝隙通道相关指标（CX40、CX43、SCN5A）等指标综合考察;4)AC大鼠体内达峰时间在45min左右,BAC在20min左右,但24h时仍可检测到其成分的存在,说明其毒性是急性反应,但是在体内降解吸收需要一定时间;5)AC与BAC之间存在单向、不可逆的降解过程,及AC可以转化成BAC,但BAC不能转化成AC;且同等剂量给药,AC毒性强于BAC。第三部分 附子药材的实验研究目的围绕附子药材开展“不同批次、不同剂型、不同煎煮时间”的“毒性验证-毒性比较-毒性物质基础探索-毒性代谢特点研究”,探索附子最佳用药方案,构建一体化、全链条的附子心脏毒性研究及风险防控体系,并为临床用药提供参考。方法首先,从物质基础层面出发,采用UPLC检测技术对不同批次、不同剂型、不同煎煮时间的附子药材进行2种生物碱的定性定量分析,实验过程中涉及的技术与方法有:药液的制备与提取、药物的定性定量UPLC检测;其次,从毒性验证角度出发,对附子药材不同剂型、不同煎煮时间的心脏毒性进行了动物实验验证,实验过程涉及的技术方法有药物的制备、大鼠灌胃给药,大鼠眼眶从静脉取血、血样的储存与处理、样本ELISA检测等;最后,从毒性代谢特点出发,对不同剂型、不同煎煮时间的附子药材进行大鼠灌胃给药,以探索各附子给药组中2种生物碱在大鼠体内的代谢特点,实验过程涉及的技术方法有:药物的制备、大鼠灌胃给药,大鼠眼眶从静脉取血、血样的储存与处理、样本UPLC检测等。结果附子药材UPLC检测:构建线性方程:BAC:Y=3980x+489,r=0.9993;AC:Y=20600x+101,r=0.9992。附子粉末AC含量 125.78、534.94、314.34ng/g,BAC 含量 39.52、45.24、45.80;附子水煎 30min AC 含量 0.3056、0.26765、0.168ng/ml,BAC 含量 1796、1352、2516 ng/ml;附子水煎 120minAC 含量 0.3056、0.444、0.3532,BAC 含量 2360、2812、2212。动物实验:附子水煎剂按临床最大剂量的2倍给药,散剂按水煎剂的1/10给药,在此条件下开展的附子不同剂型、不同煎煮时间的毒性验证比较结果提示:1)ECG:心率:F0及FB组在90min、120min时有差异（P值均<0.05）,其余各时点均无差异（P值均>0.05）,FB组始终无差异;QTc:F0组各时点的QTc值与KB组比较,差异均无统计学意义（P值分别为0.0931、0.5877、0.0736、0.0649、0.1212、0.4848、0.3939、0.6277）;FA 组在 5min、10min、20min、30min、45min、60min、90min 的 QTc 值有差异（P 值分别为 0.0007、0.0047、0.0007、0.0007、0.0007、0.0007、0.0007）;FB 组在 5min、20min、30min、45min、60min、90min、120min等时点的QTc值有差异（P值分别为0.0293、0.0386、0.0143、0.0007、0.0007、0.0007、0.0413）。2)常规指标:CK:F0组、FA组有差异（P值分别为0.0013、0.0104）,FB组无差异（P=0.2824）;c-TNI:F0 组、FA 组有差异（P 值分别为 0.0245、0.0266）,FB 组无差异（P=0.0813）,LDH:F0组、FA组有差异（P值分别为0.0245、0.0266）,FB组无差异（P=0.0813）。3)预警指标:SCN5A:F0组有差异（P=0.0395）,FA、FB组均无差异（P均>0.05）;CX40:F0、FA组有差异（P值分别为0.0088、0.0050）,FB组无差异（P=0.1091）;CX43:F0、FA 组有差异（P 值分别为 0.0280、0.0111）,FB组无差异（P=0.1535）。药代动力学:构建线性方程:BAC:Y=0.85x-0.00127,r=0.9978;AC:Y=2.14x+0.0909,r=0.9993。附子各给药组均大鼠体内AC含量均在定量下限以下,F0组、FB组可检测到BAC含量,FA组BAC含量亦在定量下限以下。比较各组（F0组VS FA组、FA组VS FB组、F0组VS FB组）AC药代动力学参数,Cmax、Tmax、AUC0-t、AUMC0-t、MRT0-t 的 P 值分别为（0.5333,0.7032,0.1905）、（0.2000,0.5317,0.0952）、（0.5000,0.7302,0.0530）、（>0.9999,0.7032,>0.9999）、（0.5333,0.5000,0.1905）、（0.2667,0.5317,0.0952）,各组参数的差异比较均无统计学意义（P值均>0.05）。比较各组（F0组VSFA组、FA组VSFB组、F0组VSFB组）BAC药代动力学参数,Cmax、Tmax、AUC0-t、AUMC0-t、MRT0-t 的 P 值分别为（0.2222,0.3333,0.6200）、（0.5000,>0.9999,0.1981）、（0.5000,0.6667,0.0530）、（0.5000,0.5000,0.0379※）、（0.8889,0.3333,0.0262※）,各组参数的差异比较有无统计学意义的有FO组VSFB组的AUMCO-t、MRTO-t比较（P值均>0.05）,其余各组参数的差异比较均无统计学意义（P值均>0.05）。小结1)不同批次间附子中生物碱含量存在差异,经过煎煮30min可有效缩小差异,控制附子中生物碱含量;2)附子中的毒性生物碱不仅仅是以乌头碱为代表的双酯型生物碱,以苯甲酰乌头原碱为代表的单酯型生物碱亦存在毒性;3)正常煎煮可控制附子药材中双酯型生物碱（乌头碱）含量,但是不能降低其毒性,其毒性可能与其单酯型生物碱成分有关,在临床使用中仍需要久煎。第四部分 附子复方的临床研究目的从附子复方层面出发,开展附子含附子制剂的临床安全性观察研究,综合阐述附子经过炮制及现代制药工艺处理后其临床安全性。方法采用单中心、开放、单次给药的研究设计开展含附子制剂的临床安全性观察研究。结果研究纳入健康受试者8人,男女各半,进行含附子制剂25g 口服给药,观察药前 30min、药后 30min、1h、2h、4h、8h、24h、48h、72h、96h、120h 生命体征（体温、心率、呼吸、血压）,给药后各时间点较给药前差异无明显统计学意义（P值均>0.05）;心电图:24h内各时点动态心电图指标无明显差异,24h内各时点的PR间期、QRS间期、QT间期、QTC间期较给药前的P值分别为 0.0781、0.5528、0.1406、0.1563、0.1096。1-5d PR 间期、QRS 间期、QT间期、QTC间期较给药前的P值分别为:PR间期:0.4453、0.4844、0.1250、0.4219、0.7422;QRS 间期:>0.9999、0.5859、0.4375、0.0625、0.2188;QT 间期:0.6406、0.1953、0.1719、0.5703、0.0156*;QTC 间期:0.6875、0.7969、0.5469、0.3516、0.0625。心脏损伤标志物:与给药前相比,CTNT的P值分别为>0.9999、0.5000、>0.9999;Pro-BNP 的 P 值分别为 0.7422、0.5469、>0.9999,均无统计学意义。小结试验所选含附子制剂是经过严格炮制制作的复方中成药膏,在临床安全剂量下使用,未发现引起相关实验室检查及毒性指标的异常改变,经过适当的炮制加工可有效控制附子毒性,所以临床实际用药中,需控制用药剂量,进行必要的加工和炮制,还要考虑合适的疗程和人体个体差异等情况。结论1)附子安全性评价体系构建:应用“成分-通路-靶点-临床评价指标”一体化、全链条的研究策略开展了对附子从“生物碱单体-药材-复方”的“毒性体内外验证-毒性物质基础-毒性代谢特点”研究,构建了有毒中药的安全性评价体系,并探索性应用于附子心脏毒性的研究中;2)附子心脏毒性的机制探索及早期预警:缝隙连接通道是位于心肌细胞上负责信息交换及电耦联的重要通路,在附子心脏毒性机制中发挥着重要作用,研究提示可能存在早期预警的敏感性指标,对于构建和完善附子心脏毒性的风险防控体系具有一定的参考价值;3)附子心脏毒性的风险防控:从附子“生物碱单体-药材-复方”层面以明确其“毒性物质基础-毒性机制-毒性代谢特点”,从各个环节层层把控其毒性,做到未病时先防,已病则应早发现、早治疗以防病变。
胡冠宇[5]（2021）在《“治神调形”下头针对缺血性中风痉挛大鼠BDNF/TrkB/CREB及PI3K/Akt/GSK-3β通路影响的研究》文中研究表明目的:基于“治神调形”中医理论,探讨头针疗法通过对BDNF/TrkB/CREB信号通路和PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的调节作用,促进对缺血性PSS大鼠受损脑组织细胞修复和细胞保护作用,进而改善缺血性PSS症状的生物学机制。方法:1.实验一:缺血性PSS大鼠模型的确立和验证采用文献检索和文献计量学统计的方式,通过对中国知网、万方数据知识服务平台、维普网以及Pubmed等主要中英文数据库进行检索,统计中风后肢体痉挛及相关疾病研究的动物实验中造模方法出现的频数,并根据实验中头针干预条件的情况确定恰当的缺血性PSS模型的造模方法。将60只Sprague Dawley大鼠（SD大鼠）随机分成空白组20只,假手术组20只,模型组20只。对模型组大鼠进行已确立的造模方案造模。造模后于1d、3d、7d、14d记录各组大鼠的死亡只数、痉挛发生只数、改良Ashworth（MAS）评分。2.实验二:缺血性PSS动物研究头针行针频率及时间验证将120只SD大鼠,分为空白组10只,假手术组10只,实验组100只,对实验组大鼠进行PSS模型建立。将造模成功大鼠随机平均分到模型组、头针A组（200r/min,3min）、头针B组（200r/min,1min）、头针C组（100r/min,3min）、头针D组（100r/min,1min）,给予相应的治疗7天,并于第7d观察记录Zealonga评分、改良Ashworth评分。3.实验三:头针对缺血性PSS大鼠行为学改变的影响以缺血性PSS模型大鼠为研究对象,将60只SD大鼠随机分成假手术组20只,实验组40只。对实验组大鼠进行缺血性PSS模型建立。将造模成功大鼠随机分到模型组和头针组,给予相应的治疗7天,并每2日观察记录Zealonga评分、改良Ashworth评分、平衡木行走实验评分等动物行为学数据。4.实验四:头针对缺血性PSS大鼠脑组织恢复的影响7d后对大鼠脑皮质组织进行取材,采用2,3,5—氯化三苯基四氮唑（TTC）染色的方法观察缺血性PSS大鼠脑梗死灶体积变化,采用HE染色和尼氏染色观察缺血损伤病变部位的病理改变及神经元细胞和尼氏小体的变化,采用FITC-葡聚糖脑血管灌注的方法观察脑组织血管状态变化。5.实验五:头针对缺血性PSS大鼠BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响对缺血性PSS大鼠损伤的脑皮质运动区组织采用Western Blotting、PCR检测脑皮质中的BDNF、TrkB、CREB、p-CREB的蛋白表达及其mRNA的表达。6.实验六:头针对缺血性PSS大鼠PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响对缺血性PSS大鼠损伤的脑皮质运动区组织采用Western Blotting、PCR检测脑皮质中的PI3K、Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的蛋白表达及其mRNA的表达。结果:1.实验一:缺血性PSS大鼠模型验证文献检索结果显示,相关动物实验研究论文发表数量为25例,其中中文18篇、英文7篇。所出现的造模方法主要包括:线栓法MCAO（包括再灌注）、线栓MCAO+内囊注射NMDA法、光栓法三种。其中线栓法MCAO在卒中后肢体痉挛动物研究中应用概率最大（60%）,其次为线栓MCAO+内囊注射NMDA法（32%）,最后为光栓法（8%）。并且考虑后两者均会造成颅损,因此初步确定线栓法永久性大脑中动脉闭塞（MCAO）为造模方法。对模型组大鼠进行线栓法MCAO造模,造模后,模型组存活15只,造模过程中死亡5只。空白组与假手术组大鼠14d内均无死亡、痉挛状态出现,且MAS评级为0级。与空白对照组,1d时模型组大鼠死亡1例,痉挛状态出现3例,MAS评分平均水平无显着性差异（P>0.05）;3d时模型组大鼠死亡3例,痉挛状态出现8例,MAS评分平均水平有显着性差异（P<0.05）;7d时模型组大鼠死亡4例,痉挛状态出现10例,MAS评分平均水平有显着性差异（P<0.05）;14d时模型组大鼠死亡7例,痉挛状态出现6例,MAS评分平均水平无显着性差异（P>0.05）。因此线栓法MCAO可以作为本研究中的动物造模方法。2.实验二:缺血性PSS动物研究中头针行针频率及时间验证头针干预7d时,头针B组相较头针A、C、D组Zealonga评分与改良Ashworth评分均有显着性降低（P<0.05）,与1d组相比,头针B组7d后Zealonga评分与改良Ashworth评分显着性（P>0.05）。因此最终选择200r/min,1min为头针的行针方案。3.实验三:头针对缺血性PSS大鼠行为学影响与假手术组比较,模型组大鼠Zealonga评分上升,平衡木行走评分下降,说明运动神经功能下降,改良Ashworth评分上升,说明肢体痉挛程度上升（P<0.05）;与模型组比较,头针组大鼠Zealonga评分下降,平衡木行走评分上升,说明经头针治疗后运动神经功能提升,改良Ashworth评分下降,说明肢体痉挛程度减小（P<0.05）。4.实验四:头针对缺血性PSS大鼠脑组织形态学影响对比假手术组,模型组缺血性PSS模型大鼠脑组织缺血性梗死灶占比显着性增高（P<0.05）,有明显液化性坏死区域,细胞数量减少,神经元细胞数量减少且排列不规整。与模型组比较,头针组缺血性PSS模型大鼠脑组织缺血性梗死灶占比显着性减小（P<0.05）,无明显病理改变,细胞数量增多,神经元数量及形态正常。5.实验五:头针对缺血性PSS大鼠BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响模型组相较假手术组大鼠患侧脑皮质运动区组织中BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达下降（P<0.05）,BDNF、TrkB、CREB mRNA的表达下降（P<0.05）;与模型组比较,头针组大鼠BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达及BDNF、TrkB、CREB相关mRNA的表达上升（P<0.05）。6.实验六:头针对缺血性PSS大鼠BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响模型组相较于假手术组大鼠患侧脑皮质运动区组织中PI3K、Akt、p-Akt、p-GSK-3β表达降低（P<0.05）,GSK-3β表达增高（P<0.05）,PI3K、Akt mRNA的表达下降（P<0.05）;与模型组比较,头针组大鼠PI3K、Akt、p-Akt、p-GSK-3β表达升高（P<0.05）,GSK-3β表达降低（P<0.05）,PI3K、Akt mRNA的表达升高（P<0.05）。结论:本研究基于“BDNF/TrkB/CREB信号通路及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路对脑组织中神经、血管等组织细胞的修复与保护作用,促进损伤的神经与血管网络的改善,进而改善缺血性PSS大鼠的痉挛状态,起到所提出中医康复理论中的‘治神调形’作用”的科学假说,从动物行为学观察、组织病理学、分子生物学三个方面进行分析,得到结论如下:1.从动物行为学的角度说明了头针具有改善PSS模型大鼠神经功能、肌痉挛程度、运动功能的效用,证明了头针疗法通过调节头部治疗区具有“调形”的治疗作用。2.从组织学层面说明了头针能有效减小缺血性PSS模型大鼠缺血梗死灶的体积,改善脑组织病理状态,促进上运动神经元细胞形态和数量上的恢复,以及脑血管状态的恢复。结合行为学研究结果证明了头针能通过对病机中提出的“脑损”的治疗,能起到“调形”,也就是促进行为学改善的功效。3.从分子生物学层面证明了头针能有效提高BDNF、TrkB、CREB等蛋白的表达,上调BDNF/TrkB/CREB信号通路,从而促进BNDF自分泌的良性循环,进而促进BDNF对脑组织细胞的修复作用和细胞保护作用,结合行为学和病理组织学的结论,头针对这一信号通路的影响证明了头针“治神”能改善“髓虚”,进而起到“调形”的功效。4.证明了头针能激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路,并可能通过激活该信号通路促进GSK-3β的磷酸化,抑制GSK-3β的促凋亡作用,从而对脑组织细胞起到保护作用,结合上述实验结论,头针可能通过上调BDNF与TrkB的表达,进一步激活的下游PI3K/Akt/GSK-3β信号通路,起到了对“脑损”组织的治疗作用,即“治神”,进而促进了行为学的恢复,即“调形”,从这一角度阐释了“治神”与“调形”的关系。
邓之彤[6]（2021）在《畅幽悠治疗功能性便秘的实验和临床研究》文中认为目的:通过动物试验研究评价中药食疗配方畅幽悠治疗功能性便秘的效果并且阐明其作用机理。通过前后对照试验比较畅幽悠治疗功能性便秘的临床疗效。探索畅幽悠调节肠道微生态的作用以及治疗功能性便秘的分子生物学机理。为治疗功能性便秘提出一种简便、有效、安全的中药食疗配方。方法:1.畅幽悠对功能性便秘大鼠的疗效研究对30只SD大鼠使用随机数字表法分组,分为空白对照组6只,模型对照组6只,畅幽悠组9只,乳果糖阳性对照组9只。使用复方地芬诺酯制造功能性便秘SD大鼠模型。除了空白对照组外,其余各组均连续20天采用复方地芬诺酯10 mg/kg每天一次灌胃以建立功能性便秘大鼠模型。治疗过程中,继续维持造模药物剂量。成模后按对应组别给药。畅幽悠用量为200 mg/kg。阳性对照组乳果糖用量为3340 mg/kg。采用墨汁对推进实验及粪便含水量检测评价治疗效果。检测粪便菌群结构、结肠组织、血浆的相关指标。2.畅幽悠治疗功能性便秘的临床研究对31例符合标准的功能性便秘患者使用畅幽悠治疗30天,用量为每天3次,每次9g（1包）。采用便秘评分量表衡量患者治疗前、后的疗效。收集患者治疗前后的大便并进行16SrDNA检测。结果:（一）在复方地芬诺酯诱导的功能性便秘SD大鼠模型实验中,口服畅幽悠:1.可明显提高模型动物的粪便含水率,缓解便秘;恢复大鼠受到复方地芬诺酯抑制的肠蠕动功能;作用均与阳性对照物乳果糖相似;2.可修复模型大鼠结肠上皮组织的病理损伤;3.可通过调节血浆中影响肠道蠕动的相关神经递质如胃动素、胃泌素、P物质、血管活性肠肽,促进肠蠕动。4.可调节肠粘膜屏障的通透性,下调Occludin和ZO-1蛋白及其对应的mRNA表达量以及下调水通道蛋白3、水通道蛋白8的表达,增加粪便含水率;5.可调节肠道菌群,增加粪便中产短链脂肪酸的菌属如Blautia,Ruminococcus,Roseburia,Coprococcus,Lachnospira 的相对丰度并且增加粪便中丙酸、丁酸、异丁酸等短链脂肪酸的含量。（二）功能性便秘患者31例口服畅幽悠30天:1.观察到①18例周完全自主排便频率异常的患者经治疗后,有16例排便频率增加;②31例患者经治疗后,有26例患者大便大便性状变软;③31例伴有排便未尽感的患者经治疗后,有26例患者排便未尽感症状缓解;④19例伴有腹痛症状的患者经治疗后,有15例患者腹痛症状缓解;⑤26例伴有腹胀症状的患者经治疗后,有18例患者腹胀症状缓解;⑥24例伴有排便困难的患者经治疗后,18例患者排便困难程度降低。2.把31名患者的大便按照就诊先后顺序进行排序。对治疗前采集的样本,把1号、2号、3号样本进行混样处理。随后对每3个连续标号的样本进行样本混合。最后将28号、29号、30号、31号4个样本混合成1个样本。治疗后采集的样本参照治疗前采集的样本进行样本混合。发现治疗后,患者答辩菌群结构与使用前相比,产短链脂肪酸相关菌属Butyricicoccus、Blautia、Lachnospira、Ruminococcus的相对丰度较使用前显着上升,益生菌Bifidobacterium、Lactobacillus相对丰度亦较干预前显着上升。结论:口服中药食疗配方畅幽悠,可明显恢复大鼠受到复方地芬诺酯抑制的肠蠕动功能,提高模型动物的粪便含水率,缓解便秘;修复模型大鼠结肠上皮组织的病理损伤。作用机理涉及:（1）调节血浆中胃动素、胃泌素、P物质、血管活性肠肽等影响肠道蠕动相关神经递质的水平,促进肠蠕动;（2）下调Occludin和ZO-1蛋白及其对应的mRNA表达量以及下调水通道蛋白3、水通道蛋白8的表达,改善肠粘膜屏障的通透性,增加粪便含水率;（3）增加粪便中Blautia、Ruminococcus等多种短链脂肪酸产生菌属的相对丰度并且增加粪便中丙酸、丁酸、异丁酸等短链脂肪酸的含量,改善肠道菌群微生态。在治疗功能性便秘患者临床试验中,观察到畅幽悠可明显改善便秘症状;并发现疗效与增加短链脂肪酸产生菌属风度、改善肠道菌群微生态相关。因此,畅幽悠是一种对功能性便秘有效的中药食疗配方。畅幽悠是由国家卫生部颁发的药食同源目录中可用作食材的中药组成,在临床试验中,未发现有患者出现严重不良反应和副作用,因此畅幽悠是一种安全性较高的功能性便秘食疗配方。畅幽悠是冲剂,每袋9g的独立包装为患者服用提供了简便性。
江心泳[7]（2021）在《妊娠糖尿病SD大鼠模型的构建》文中研究表明目的通过文献综述分析不同妊娠糖尿病（GDM）大鼠的建模方法,通过文献系统评价和Meta分析确定GDM SD大鼠空腹血糖（FBG）的成模标准,通过动物实验研究利用酶联免疫吸附剂测定（ELISA）、蛋白质印迹法（WB）和同位素标记的相对和绝对定量技术（i TRAQ）定量蛋白质组学等实验方法,优选建模方法,确立最优GDM SD大鼠模型,为研究GDM防治与护理机制提供GDM SD大鼠模型的构建依据。方法（1）文献综述研究:文献综述现有GDM大鼠建模的方法。（2）文献系统评价与Meta分析研究:检索9个中英文数据库中妊娠SD大鼠血糖相关文献,检索时限2014年1月至2020年12月。应用SYRCLE动物实验偏倚风险评估工具进行文献质量评价,STATA 15.0软件进行单组连续变量Meta分析。（3）实验研究:将40只SD雌性大鼠分为正常控制（NC）组、高脂高糖（HFHS）组、HFHS+链脲佐菌素（STZ）（HFHS+STZ）组、HFHS+行动限制（MR）（HFHS+MR）组,每组各10只。NC组予普通饲料喂养,其余三组予高脂高糖饲料喂养;确定妊娠第1天,HFHS+STZ组予腹腔注射25mg/kg STZ,HFHS+MR组予行动限制干预。观察、记录和测量妊娠前后各组大鼠体重、摄食量、饮水量、FBG,血清空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛β细胞功能（HOMA-β）、胰岛素敏感指数（HOMA-ISI）、成模率、胰腺和胎盘的病理结果,以及胎盘葡萄糖转子1（GLUT1）和葡萄糖转运子3（GLUT3）表达水平和胎盘蛋白差异表达结果。应用重复测量方差分析,Friedman检验和秩和检验进行统计分析,设定P<0.05为具有统计学意义。结果:（1）文献综述:GDM大鼠造模方法众多,包括药物诱导、饮食诱导和药物联合饮食诱导,且GDM大鼠FBG成模标准从6.67-16.7mmol/L不等。（2）系统评价和Meta分析:共纳入37篇文献,含428只大鼠。Meta分析显示,SD大鼠FBG的参考值上限妊娠第0周为5.51 mmol/L;妊娠第1周为6.92mmol/L;妊娠第2周为6.64 mmol/L;妊娠第3周为7.04 mmol/L。（3）动物实验:（1）成模率:HFHS组50%,HFHS+STZ组100%,HFHS+MR组28.6%;（2）一般指标和FBG:妊娠前,4组大鼠体重、摄食量、饮水量和FBG差异均无统计学意义（P>0.05）,但高脂高糖饲料喂养的3组模型组大鼠的体重和FBG高于NC组大鼠。妊娠期间,3组模型组大鼠的体重和FBG均高于NC组（P<0.05）,其中HFHS组的体重高于HFHS+STZ组和HFHS+MR组,HFHS+STZ组的FBG高于HFHS组和HFHS+MR组（P<0.05）;摄食量变化,HFHS+STZ组高于NC组、HFHS组和HFHS+MR组（P<0.05）,HFHS组和HFHS+MR组低于NC组;饮水量变化,HFHS+STZ组高于HFHS组高于NC组高于HFHS+MR组,组间差异有统计学意义（P<0.05）;（3）FINS和HOMA-IR结果中,HFHS组、HFHS+STZ组和HFHS+MR组均高于NC组（P<0.05）;HOMA-ISI的结果中,HFHS组、HFHS+STZ组和HFHS+MR组均低于NC组（P<0.05）;在HOMA-β结果中,各组间比较无统计学差异（P>0.05）;（4）胎盘和胰腺病理结果:对比NC组,HFHS组的胰腺内胰岛细胞分布稀疏,形状不规则,排列紊乱,胎盘组织分层界限不明显,边缘不齐,细胞分布疏松紊乱,细胞间隙变大;HFHS+STZ组胰腺内胰岛细胞分布稀疏,且出现明显萎缩,胎盘组织分层紊乱,界限不清,细胞分布紊乱;HFHS+MR组胰腺内胰岛细胞分布稀疏,形状不规则,体积明显增大,胎盘组织分层界限不明显,边缘不齐,细胞分布疏松紊乱。（5）WB结果:HFHS+STZ组和HFHS+MR组的GLUT1和GLUT3表达水平均较NC组明显上调（P<0.05）;（6）i TRAQ定量蛋白质组学结果显示:在定量到的胎盘差异表达蛋白中,有5个蛋白表达发生上调,18个蛋白表达下调,富集分析显示胎盘差异表达蛋白主要参与疼痛感官知觉、细胞对紫外线反应和细胞对皮质类固醇刺激的反应等生物学过程;组成共生体液泡和细胞质部分;发挥与多种分子结合的分子功能;参与雌激素信号通路的转导。结论:（1）GDM大鼠造模方法众多,但尚未形成公认的造模方法和FBG成模标准,同时缺少根据GDM病因减少大鼠活动量和增加压力构建GDM大鼠模型的方法。（2）GDM SD大鼠成模标准为FBG>6.92 mmol/L。（3）高脂高糖饲料联合25mg/kg STZ腹腔注射是构建GDM SD大鼠模型的一种适用方法。（4）高脂高糖饲料联合行动限制有望从病因角度成功构建GDM SD大鼠模型。（5）GDM SD大鼠胎盘存在多种参与GDM生物学过程的差异表达蛋白,在雌激素信号通路富集最为明显。
许梦白[8]（2021）在《产后抑郁症中医证候特点分析及逍遥散的干预作用机制研究》文中认为目的:1.临床流行病学研究通过临床横断面流行病学调查,探索引起产后抑郁症（Postpartum depression,PPD）患者抑郁程度加重的影响因素,利用因子及聚类分析等方法探索PPD的中医证候特点,进一步归纳PPD的中医病机和治则,以期为PPD临床个体化精准辨证提供理论支持。2.中医文献方药研究检索中药内服方剂治疗PPD临床研究的相关文献,探讨治疗PPD内服方药的药物组成规律及遣方用药思路,为临床治疗PPD的选方用药提供参考,并为进一步探索中药治疗PPD的机制研究提供理论依据。3.动物实验机制研究结合PPD临床流行病学研究及中医文献方药研究,开展动物实验,建立PPD大鼠模型并进行评价,造模成功后给予逍遥散干预。通过观察大鼠下丘脑病理组织形态、检测下丘脑-垂体-性腺（Hypothalamic-pituitary-gonadal,HPG）轴激素水平、下丘脑雌激素受体（ERα、ERβ、GPER）介导的PKA/CREB/BDNF信号通路表达水平等,探讨逍遥散治疗PPD的疗效及分子作用机制,为逍遥散治疗PPD提供具有科学内涵的客观依据,同时“以方测证”,揭示PPD的中医证候特点及病机本质。方法:1.临床流行病学研究建立《产后抑郁症调查问卷》,收集PPD患者的一般情况、抑郁量表积分、中医症状及体征信息。采用Pearson卡方检验或Fisher确切概率法对患者一般情况进行单因素分析,采用有序多分类Logistic回归对单因素分析结果中具有统计学意义的相关因素进行多因素分析,探索导致PPD患者抑郁程度加重的影响因素。采用频数分析、因子分析及聚类分析方法,对患者的中医临床症状及体征进行研究,归纳PPD患者的中医证候特点,进一步探寻PPD的中医病机和治则。2.中医文献方药研究检索中国知网、万方数据库等国内中文数据库2000年-2019年发表的关于中药治疗PPD临床研究的相关文献,按照筛选标准收集研究所需中药方剂。建立数据库,采用SPSS 24.0、Weka 3.8等软件对中药进行频数分析、聚类分析及关联规则分析,探索中药治疗PPD的遣方用药规律,探析临床治疗PPD的用药思路。3.动物实验机制研究以妊娠后期慢性极轻度应激（Chronic ultramild stress,CUMS）方法建立PPD大鼠模型,综合大鼠的一般情况、体重、产仔及活仔量、行为学变化对模型进行评价,造模成功后采用HE染色观察大鼠下丘脑病理组织形态,ELISA法检测血清E2、P、PRL含量;采用RT-qPCR及Western blot分别检测下丘脑组织匀浆中ERα、ERβ、GPER及PKA、CREB、BDNF的基因与蛋白表达水平,并采用免疫组化法对其分子蛋白表达进行定位分析,在基于HPG轴探索PPD的发病及逍遥散干预作用机制的同时,“以方测证”,以逍遥散为反证,揭示PPD肝郁脾虚证的证候生物学基础。结果:1.临床流行病学研究（1）206例PPD患者平均年龄为30.28±5.07岁;轻度抑郁患者94例,占比45.63%;中度抑郁患者72例,占比34.95%;重度抑郁患者40例,占比19.42%。在影响PPD患者抑郁程度加重的心理社会因素中,产前教育是影响PPD患者抑郁程度的保护因素,新生儿疾病、经前烦躁情况、孕期焦虑抑郁、孕产期负面事件、睡眠时间不足、患者受关心和支持度低是导致PPD患者抑郁程度加重的危险因素。（2）206例PPD患者的高频症状及体征有情绪抑郁、失眠多梦、神疲乏力、食少纳呆、烦躁易怒、善太息、乳房胀痛、悲伤欲哭、精神萎靡、健忘、腹胀,舌淡红、舌边有齿痕、舌黯及舌有瘀斑瘀点,苔白、苔薄、苔腻,脉细、脉弦、脉沉。将中医症状因子分析得出的9个公因子进行聚类分析,共出现5个聚类结果:①肝郁脾虚证,其症状包括善太息、腹胀、胁肋胀满甚则疼痛、乳房胀痛、食少纳呆;②阴血亏虚证,其症状包括面色淡白、爪甲色淡、肢体麻木、潮热盗汗、五心烦热、头晕、耳鸣;③肝火炽盛证,其症状包括口苦、目赤、口干咽燥、便秘、烦躁易怒、头痛;④脾肾阳虚兼痰湿证,其症状包括脘痞、恶心、胸闷、惊恐易醒、畏寒肢冷、腰膝酸软、浮肿、小便清长或（和）夜尿增多;⑤心脾两虚兼血瘀证,其症状包括心悸、神疲乏力、气短懒言、精神萎靡、面色萎黄、健忘、失眠多梦、悲伤欲哭、面色晦暗、自汗、下腹刺痛、恶露色紫暗有块。2.中医文献方药研究（1）本研究共筛选处方112例,涉及中药116味,使用频次为1216次。治疗PPD的高频药物有柴胡、甘草、当归、白芍、茯苓、白术等17味。所有药物中,归经以脾经、肝经为主,温性和甘味药出现频率最高,药物功效以补益、理气、安神、活血化瘀等为主。（2）17味高频药物共聚为4类:①聚类1包括柴胡、白芍、当归、甘草;②聚类2包括白术、茯苓;③聚类3包括香附、陈皮、川芎、郁金;④聚类4包括茯神、黄芪、大枣、地黄、合欢皮、酸枣仁、远志。（3）17味高频药物关联分析共得出50条关联药物组合,符合二阶关联规则的有6组,符合三阶关联规则的有18组,符合四阶关联规则的有17组。3.动物实验机制研究（1）实验一:4组大鼠产仔及活仔量无明显差异,大鼠造模后出现倦怠嗜卧、活动量减少、粪便质软、体重降低等宏观表现,行为学结果中糖水消耗率及强迫游泳不动时间明显减少,旷场实验中穿格、站立及修饰次数出现降低趋势性变化;氟西汀组及逍遥散组大鼠宏观表现及行为学结果均有明显改善,表明模型组大鼠产后出现抑郁样改变,PPD大鼠模型成功建立,“以方测证”,以逍遥散反证本研究建立的PPD大鼠模型是PPD肝郁脾虚证的病证结合模型。（2）实验二:在HPG轴中,HE染色发现模型组大鼠下丘脑神经元数目减少、排列疏松紊乱,大量神经元出现核固缩、深染及胞体萎缩、空泡样变性、周围脱髓鞘改变等严重病理学变化,而逍遥散组大鼠下丘脑组织病理学变化出现不同程度改善;ELISA检测显示模型组大鼠血清E2、P、PRL水平均明显降低;逍遥散组大鼠血清E2、P、PRL水平与模型组比较均明显升高。（3）实验三:RT-qPCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠下丘脑ERα、GPER、PKA基因表达水平明显降低,ERβ、CREB、BDNF基因表达水平有降低趋势;与模型组比较,逍遥散组大鼠下丘脑中ERα、CREB、BDNF基因表达水平明显升高,ERβ、GPER、PKA基因表达水平有升高趋势。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠下丘脑中ERα、CREB、BDNF蛋白表达水平明显降低,ERβ、GPER、PKA蛋白表达水平有降低趋势;与模型组比较,逍遥散组大鼠下丘脑中PKA、BDNF蛋白表达水平明显升高,ERα、ERβ、GPER、CREB蛋白表达水平有升高趋势。免疫组化对上述指标进行定位分析,结果显示其免疫阳性神经元在下丘脑ARC及VMH中广泛分布,其中,模型组大鼠下丘脑ARC中ERα、PKA、CREB、BDNF的MOD值明显降低,VMH中的ERα、ERβ、GPER、CREB、BDNF的MOD值明显降低,逍遥散则可逆转这一改变,明显升高PPD模型大鼠下丘脑ARC及VMH中已降低的相关指标。结论:1.心理社会等多种因素相互影响,可作为应激源导致PPD的发生、发展。肝郁脾虚证、阴血亏虚证、肝火炽盛证、脾肾阳虚兼痰湿证、心脾两虚兼血瘀证及其症状表现是PPD患者具有临床意义的中医证候特点。2.女子产后多虚多瘀,气血失调,神魂失养,存在于PPD发病的始终。基于肝脾与情志、气血的密切相关性,临床治疗PPD患者可从肝脾论治,调理气血,临床可灵活运用疏肝解郁、理气健脾、益气养血、养心安神等治法。逍遥散用药组合气血兼顾,肝脾同调,是治疗PPD的常用方剂。3.以妊娠后期CUMS方法可建立病证结合的PPD肝郁脾虚证大鼠模型。采用逍遥散对PPD模型大鼠进行干预,可通过HPG轴上调性改变下丘脑内雌激素受体ERα、ERβ、GPER介导的PKA/CREB/BDNF信号通路,调节抑郁样行为。4.基于“以方测证”及“微观辨证”等中医理论基础,肝郁脾虚证是PPD的重要证候特点,以逍遥散为反证的PPD肝郁脾虚证的证候生物学基础涉及到神经内分泌系统,可能与下丘脑组织病理学改变、HPG轴功能异常、性激素分泌减少、下丘脑雌激素受体介导的PKA/CREB/BDNF信号通路的下调性改变抑制神经发生有关。
张徐雯[9]（2021）在《基于功能磁共振成像电针对肥胖迷你猪肠-脑轴调控的研究》文中提出目的:基于功能磁共振fMRI以肠-脑轴为轴线通过急性电针刺激正常迷你猪的三组不同穴位组合,选出最佳穴位组合。然后以高脂饮食造模方法诱导肥胖迷你猪动物模型,对选出的最佳穴位组合进行一个月的慢性电针治疗,同样基于功能磁共振以肠-脑轴为轴线探索电针对肥胖迷你猪肠-脑轴相关的神经生理、代谢稳态、脑特定功能区及甜味进食偏好的调控。方法:我们首次把Yucatan迷你猪作为实验动物运用到电针的研究中。第一部分试验为急性电针试验。颈静脉置管手术后。运用功能磁共振、热像仪、多种仪器和软件等检测研究方法以肠-脑轴为轴线从神经生理、代谢稳态等方面比较了三组不同穴位组合和一组假电针穴位。以4只成年的正常迷你猪为试验动物,每只迷你猪在试验开始前一周都进行颈静脉置管手术,按照我们设计的拉丁方程图隔天接受一次不同穴位电针刺激,急性电针刺激前后都取血样和相关指标测量。试验结果对比后筛选出最佳穴位组合#70-#35。第二部分试验不同的是为期一个月的慢性电针治疗。16只正常成年迷你猪随机分为电针组和对照组,14周高热量饮食诱导成迷你猪肥胖动物模型后分别进行干预。电针组接受为期一个月的电针治疗共12次,对照组无电针干预,麻醉和控制方法和电针组相同。所有迷你猪都接受颈静脉置管手术,造模和治疗前后都分别进行采样检测并组间和组内进行比较。以肠-脑轴为轴线运用功能磁共振fMRI、热像仪、IVGTT、甜味食物偏好试验、荧光免疫等检测研究方法。探讨了电针疗效及对肠-脑轴相关神经生理、代谢稳态、特定脑区对甜味刺激的反应及甜味食物偏好的调控。结果:第一部分急性电针试验,基于功能性磁共振以肠-脑轴为轴线,先通过急性电针试验比较了 4组穴位组合（3组电针和1组假电针穴位组合）和无电针仅麻醉的状态。我们发现不同穴位组合对不同指标的影响不同,急性电针刺激#70-#35后产生特定的热信号,和假电针相比显着降低了穴位温度,迷走神经张力指标HRV显着高于#79-#63,传递食欲信号的激素（血清总ghrelin显着低于假电针,ghrelin active也比其他穴位有下降趋势）和进食愉悦感相关的（唾液皮质醇和其他穴位组合相比仅有升高趋势）,显着增加了参与享乐和认知控制食物摄入量的脑区（前额叶皮层和纹状体）活动。只有急性电针刺激#79-#63后血清瘦素没有显着降低,血清胰岛素也显着高于假电针。综上我们选择穴位组合#70-#35。第二部分慢性电针治疗,根据第一部分试验结果我们选择穴位#70-#35对14周高脂饮食诱导的肥胖迷你猪模型进行一个月慢性电针治疗后。基于功能性磁共振以肠-脑轴为轴线,我们发现为期一个月的电针治疗对肥胖迷你猪肠-脑轴及甜味饮食偏好有一定的调控作用。治疗后电针组迷你猪的腹围显着减小,血清高密度脂蛋白显着增高,迷走神经张力指标HRV显着增高、改善了 IVGTT葡萄糖耐量。甜味刺激后前额叶皮层和纹状体也比对照组显着激活,并降低了甜味进食偏好。但是对炎症参数结合珠蛋白、体重、血清胆固醇、甘油三酯、ghrelin active、瘦素没有显着改善。结论:通过第一部分急性电针试验基于功能磁共振以肠-脑轴为轴线选出穴位组合#70-#35。第二部分试验以#70-#35为治疗穴位,为期一个月的电针治疗在一定程度上改善了肥胖迷你猪肠-脑轴相关的部分神经生理及代谢稳态,调控了和认知及进食控制相关的脑特定功能区的活动并降低了肥胖迷你猪的甜味进食偏好。
王珂欣[10]（2021）在《基于新型网络药理学策略解析复方苦参注射液抗肝癌主要药效成分与作用机制》文中提出选题依据:肝癌是世界上流行最高的10种恶性肿瘤之一,死亡率在消化系统恶性肿瘤中位居第二,发病率有上升趋势,而我国每年新发病例占全球一半以上。目前肝癌的治疗手段主要有外科手术切除及放、化疗等,但患者5年内生存率低于30%。因此,探索肝癌发病机制和防治肝癌药物作用机制,是提高肝癌患者生存率和解决临床用药问题的迫切需求。复方苦参注射液在中国已有超过15年的临床应用历史,用于治疗多种类型的实体肿瘤,尤其是癌肿疼痛和消化系统肿瘤中的肝癌。临床研究表明复方苦参注射液可以改善中晚期肝癌患者的症状,且辅助双介入治疗,联合动脉灌注栓塞术,联合化疗均有显着的疗效。实验药理研究表明复方苦参注射液对H22肝癌荷瘤小鼠模型具有抑瘤作用,可显着抑制肝癌细胞增殖,且调控细胞周期。然而,复方苦参注射液在其它肝癌动物模型中是否具有抑制作用?是否具有抑制肝癌转移的作用?除调控凋亡和周期相关信号通路之外,其抑制肝癌细胞增殖及转移的具体机制还有哪些?其抗肝癌的药效物质基础是什么?这些关键科学问题仍然不清晰,需要进行深入、系统的研究。本研究首先从体内外明确了复方苦参注射液抗肝癌的作用;其次,采用计算系统药理学模型预测了复方苦参注射液抗肝癌的药效成分群;最后,基于定量成分导向的网络药理学方法预测了复方苦参注射液抗肝癌的作用机制并进行了验证。研究结果为复方苦参注射液抗肝癌临床用药提供新的科学依据,为进一步开发组分新药提供物质基础,同时也将为其他中药注射剂防治肿瘤研究提供研究思路。目的:（1）明确复方苦参注射液抗肝癌药理作用。（2）构建计算系统药理学模型,探寻复方苦参注射液抗肝癌的药效成分群。（3）基于定量成分导向的网络药理学方法阐释复方苦参注射液抗肝癌的作用机制。方法:（1）通过肝癌细胞增殖和克隆形成实验,以及对二乙基亚硝胺诱发肝癌大鼠肝脏组织的一般和病理学观察及血清生化指标,明确复方苦参注射液对肝癌细胞和大鼠的抑制作用;通过细胞粘附、伤口愈合细胞划痕、Transwell侵袭以及趋化运动实验,明确复方苦参注射液对肝癌细胞侵袭转移的作用。（2）采用计算系统药理学模型,将代谢组学分析、数据收集、网络算法、生物信息学工具相结合,使用一种称为Dijkstra算法模拟药物靶点对疾病分子网络的传播效应,识别出复方苦参注射液抗肝癌药效成分群。（3）通过对复方苦参注射液中高含量成分进行抗肝癌活性筛选,聚焦含量高且活性强的成分,采用网络药理学方法预测复方苦参注射液抗肝癌作用的关键靶点和通路,采用蛋白质免疫印迹技术对预测关键靶点和Wnt/β-catenin信号通路进行体内外验证,明确复方苦参注射液调节Wnt/β-catenin信号通路抗肝癌的机制。采用代谢组学技术,分析复方苦参注射液对差异代谢物的调节作用,阐明复方苦参注射液调节肝癌代谢紊乱的作用机制。最后,整合分析复方苦参注射液抗肝癌作用机制。结果:（1）2 mg/mL复方苦参注射液能显着抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和克隆形成;1.5和3 mL/kg复方苦参注射液可改善二乙基亚硝胺诱导的肝癌大鼠肝细胞结构的损伤,并不同程度回调肝功能相关指标谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（AKP）和γ-谷酰基转肽酶（γ-GT）的水平,表明复方苦参注射液具有抑制肝癌生长的作用。1和2 mg/mL复方苦参注射液具有显着抑制肝癌细胞迁移、侵袭和趋化运动能力,能显着增加细胞-细胞粘附和抑制细胞-基质粘附,表明复方苦参注射液具有抑制肝癌侵袭转移的作用。（2）基于UPLC-MS鉴定出复方苦参注射液中的21个化学成分,多个数据库预测了复方苦参注射液21个化学成分的作用靶点,构建了复方苦参注射液的成分-靶点网络。随后整合了复方苦参注射液调节肝癌代谢紊乱的277个基因作为疾病基因,基于蛋白-蛋白相互作用数据构建了一个全面的复方苦参注射液成分-靶点-互作蛋白-疾病基因网络,并应用Dijkstra算法计算成分的靶点传播到疾病分子网络的最短距离链17412条,从而根据传播系数识别出11个药效成分群:槐定碱、9β-hydroxylamprolobine、苦参碱、槐醇、异苦参碱、（-）-乙酰鹰靛叶碱、N-甲基金雀花碱、氧化槐定碱、氧化苦参碱、氧化槐醇和（-）-oxylehmannine,并从致病基因和功能通路的覆盖率验证了药效成分群的准确性和可靠性。（3）对复方苦参注射液中含量高的5个化合物进行抗肝癌活性筛选,对具有显着肝癌抑制活性的苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱和N-甲基金雀花碱进行网络药理学分析。通过构建复方苦参注射液抗肝癌靶点-相关蛋白网络,预测出关键靶点,在肝癌细胞和大鼠上验证,结果表明复方苦参注射液可以显着增加肝癌细胞和大鼠中CASP3的表达,抑制MMP2,MYC和REG1A的表达。通过对关键蛋白的深入验证发现复方苦参注射液可通过下调细胞和大鼠中Vimentin的表达,增加E-cadherin的表达来抑制上皮间质转化过程。此外,复方苦参注射液可以显着调节细胞和大鼠中Wnt/β-catenin信号通路的关键蛋白β-catenin和GSK-3β及下游蛋白COX2的表达。同时,复方苦参注射液可显着阻滞Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl所致的肝癌细胞中β-catenin和COX2表达水平的升高和GSK-3β表达水平的降低;可抑制LiCl所致的肝癌细胞中上皮间质转化过程、迁移和侵袭作用,表明复方苦参注射液可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥抗肝癌侵袭转移作用。对网络药理学预测的靶点进行通路富集分析,发现复方苦参注射液发挥抗肝癌作用可能与调节代谢通路相关。肝癌大鼠血清和肝脏代谢组学结果表明复方苦参注射液均能显着调节两种样本中差异代谢物柠檬酸和乳酸的含量,改善肝癌的代谢紊乱,其机制可能涉及糖酵解过程关键代谢物和代谢酶,且Wnt/β-catenin信号通路关键下游靶点c-Myc可能介导复方苦参注射液对糖酵解的抑制作用。对复方苦参注射液抗肝癌作用机制整合分析,表明复方苦参注射液可能通过调节β-catenin/c-Myc信号通路,进而干预肝癌代谢重编程和抑制EMT过程来发挥抗肝癌作用。结论:（1）复方苦参注射液对肝癌细胞和二乙基亚硝胺诱发肝癌大鼠具有抑制作用,具有抑制肝癌细胞侵袭转移的作用。（2）复方苦参注射液抗肝癌的主要药效成分可能为槐定碱、苦参碱、氧化苦参碱、N-甲基金雀花碱,次要药效成分为槐醇、异苦参碱、（-）-乙酰鹰靛叶碱、氧化槐定碱、氧化槐醇、9β-hydroxylamprolobine和（-）-oxylehmannine。（3）复方苦参注射液可能通过调节β-catenin/c-Myc信号通路中关键蛋白,进而干预肝癌代谢重编程和抑制上皮间质转化过程来发挥抗肝癌作用。（4）本研究提出的计算系统药理学模型可用于中药复方物质基础的研究;定量成分导向网络药理学方法可用于预测成分含量明确的中药复方作用机制。
二、中医药研究中动物实验的设计与应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、中医药研究中动物实验的设计与应用（论文提纲范文）
（1）中医药动物模型研究现状及展望（论文提纲范文）
| 1 中医药动物模型发展历史 |
| 2 中医药动物模型的建立 |
| 2.1 西医疾病动物模型 |
| 2.2 西医病因病理造模的证候动物模型 |
| 2.3 中医病因病机造模的证候动物模型 |
| 2.4 病证结合动物模型 |
| 3 中医药动物模型的评价 |
| 4 展望 |
（2）基于筋伤理论探讨退行性腰椎失稳的力学、病理学机制及手法干预研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 退行性腰椎失稳相关定义及发病机制研究进展 |
| 1 中西方对腰椎失稳的认识及沿革 |
| 2 腰椎失稳与腰椎退行性变 |
| 3 DLSI与解剖结构相关的发病机制研究 |
| 4 DLSI与生物和机械交互影响的发病机制研究 |
| 5 中医药“筋伤”理论对DLSI及其发病机制的认识 |
| 6 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 手法治疗退行性腰椎失稳症的研究进展 |
| 1 中西方对手法治疗腰痛类疾病的认识 |
| 2 手法治疗DLSI的理论与机制研究 |
| 3 国内代表性流派及手法 |
| 4 手法治疗DLSI的临床报道 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基础研究 “筋伤”致DLSI的力学与病理学机制研究 |
| 前言 |
| 资料和方法 |
| 结果 |
| 1 “筋伤”致DLSI的影像学评价 |
| 1.1 滑移比例SLIP |
| 1.2 椎间隙高度指数DHI |
| 2 “筋伤”致DLSI的有限元分析 |
| 2.1 椎间盘生物力学表现(平均压力和应力云图) |
| 2.2 关节突关节生物力学表现(平均压力和应力云图) |
| 3 “筋伤”致DLSI的生物力学特性指标 |
| 3.1 FSU椎间盘蠕变位移值 |
| 3.2 FSU椎间盘抗压缩能力和抗拉能力 |
| 4 “筋伤”致DLSI的病理学指标检测 |
| 4.1 HE染色与番红固绿染色 |
| 4.2 Western blot |
| 5 FSU椎间盘蠕变位移值与TJC髓核AGC蛋白相对表达量的相关性分析 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 临床研究 坐位腰椎旋转手法治疗DLSI的临床研究 |
| 资料和方法 |
| 结果 |
| 1 一般资料 |
| 2 评分比较 |
| 3 疗效评价 |
| 4 安全性评价 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（3）补肾健脾法防治结直肠癌辅助化疗所致骨髓抑制的疗效及机制探索（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 一、化疗所致的骨髓抑制的中西医研究进展 |
| 二、肠道菌群与结直肠癌的发生发展的关系研究进展 |
| 参考文献 |
| 第一部分 口服中药改善结直肠癌辅助化疗所致骨髓抑制的系统评价和meta分析 |
| 1 研究背景 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 Ⅱ期（高危）/Ⅲ期期结肠癌根治术后脾肾阳虚证患者肠道菌群分布特征 |
| 1 研究背景 |
| 2 临床资料与研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 基于网络药理学的芪菟二至方防治化疗所致骨髓抑制的机制研究 |
| 1 研究背景 |
| 2 资料与方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 5-Fu/5-Fu+L-OHP诱导骨髓抑制小鼠的模型研究 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 结果和讨论 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第五部分 芪菟二至方防治5-Fu诱导的小鼠骨髓抑制的疗效及机制探索 |
| 实验一 芪菟二至方防治5-Fu诱导的小鼠骨髓抑制的疗效研究 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 2实验方法 |
| 结果和讨论 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 芪菟二至方防治5-Fu诱导的骨髓抑制的疗效机制探索 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 结果和讨论 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 中医药科技查新报告书 |
（4）基于缝隙连接通道的附子心脏毒性早期预警及风险防控研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 图文摘要 |
| 中英文缩略语对照 |
| 前言 |
| 第一部分: 文献研究 |
| 第一章 附子不良反应的文献计量及关键词分析 |
| 1.文献来源及研究方法步骤 |
| 2.结果 |
| 3.分析与讨论 |
| 第二章 基于文献综述的附子心血管毒性研究进展 |
| 1.附子心血管毒性的研究背景 |
| 2.附子心血管毒性的毒性表现 |
| 3.附子的化学成分梳理 |
| 4.附子的心血管毒性的物质基础及作用机制 |
| 5.附子心血管毒性的评价方法 |
| 6.小结 |
| 第三章 附子心脏毒性缝隙连接通道基因生物调控进程研究 |
| 1.材料方法 |
| 2.结果 |
| 3.分析与讨论 |
| 第一部分 结语 |
| 第二部分: 附子生物碱的实验研究 |
| 第一章 细胞毒性验证研究: AC诱导大鼠H9C2心肌细胞损伤及缝隙连接通道的验证研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.本章小结 |
| 第二章 动物毒性验证研究: 附子2种生物碱成分的毒性观察及基于缝隙连接通道机制的验证研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.本章小结 |
| 第三章 毒性代谢特点研究: 基于UPLC-MS/MS的大鼠单次灌胃给药后附2种生物碱的药代动力学动物实验研究 |
| 1.实验试剂与药品 |
| 2.实验仪器与实验器材 |
| 3.实验动物及分组方案 |
| 4.实验方法 |
| 5.UPLC-MS 条件 |
| 6.方法学验证 |
| 7.主要药代动力学结果 |
| 8.讨论 |
| 9.本章小结 |
| 第二部分 结语 |
| 第三部分: 附子药材的实验研究 |
| 第一章 毒性物质基础研究: 基于UPLC-MS/MS的附子不同剂型及煎煮时间下2 种生物碱的定性定量研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验仪器与实验器材 |
| 3.实验方法 |
| 4.结果 |
| 5.讨论 |
| 6.本章小结 |
| 第二章 动物毒性验证研究: 附子不同煎煮时间的毒性观察及基于缝隙连接通道的探索验证研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.本章小结 |
| 第三章 毒性代谢特点研究: 基于UPLC-MS/MS大鼠单次灌胃给药后附子不同煎煮时间的药代动力学 |
| 1.实验试剂与药品 |
| 2.实验仪器与实验器材 |
| 3.实验动物及分组方案 |
| 4.实验方法 |
| 5.UPLC-MS 条件 |
| 6.方法学验证 |
| 7.主要药代动力学结果 |
| 8.讨论 |
| 9.本章小结 |
| 第三部分 结语 |
| 第四部分: 附子复方的临床研究 |
| 含附子制剂在健康受试者中临床安全性观察研究 |
| 1.研究方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.本章小结 |
| 课题小结 |
| 创新点与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附件 |
（5）“治神调形”下头针对缺血性中风痉挛大鼠BDNF/TrkB/CREB及PI3K/Akt/GSK-3β通路影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 文献综述一 中风后肢体痉挛临床研究进展 |
| 1 PSS的流行病学研究 |
| 2 中风的主要致病因素 |
| 3 中风后肢体痉挛的临床评价现状 |
| 4 中风后肢体痉挛的临床康复治疗现状 |
| 文献综述二 头针疗法的源流及作用机制研究进展 |
| 1 头针理论的中医内涵 |
| 2 头针的主要流派 |
| 3 头针穴名标准化方案的建立 |
| 4 头针在PSS治疗机制研究中的进展 |
| 实验研究 |
| 实验一 缺血性PSS大鼠模型的确立和验证 |
| 1 研究内容 |
| 2 研究方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结果讨论 |
| 5 小结 |
| 实验二 缺血性PSS动物研究头针行针频率及时间验证 |
| 1 研究内容 |
| 2 研究方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结果讨论 |
| 5 小结 |
| 实验三 头针对缺血性PSS大鼠行为学改变的影响 |
| 1 研究内容 |
| 2 研究方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结果讨论 |
| 5 小结 |
| 实验四 头针对缺血性PSS大鼠脑组织恢复的影响 |
| 1 研究内容 |
| 2 研究方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结果讨论 |
| 5 小结 |
| 实验五 头针对缺血性PSS大鼠BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响 |
| 1 研究内容 |
| 2 研究方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结果讨论 |
| 5 小结 |
| 实验六 头针对缺血性PSS大鼠PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响 |
| 1 研究内容 |
| 2 研究方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结果讨论 |
| 5 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究成果 |
| 个人简介 |
（6）畅幽悠治疗功能性便秘的实验和临床研究（论文提纲范文）
| 中文详细摘要 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 中医药相关研究 |
| 1.1.1 祖国医学关于便秘的研究 |
| 1.1.2 祖国医学在肠道微生态方面的进展 |
| 1.1.3 畅幽悠的来源以及符林春教授的学术思想 |
| 1.2 西医学相关研究 |
| 1.2.1 功能性便秘概述 |
| 1.2.2 功能性便秘诊断 |
| 1.2.3 功能性便秘形成原因与机制 |
| 1.2.4 便秘的防治 |
| 1.3 功能性便秘动物模型的相关研究 |
| 1.3.1 功能性便秘动物模型效果评价 |
| 1.3.2 功能性便秘动物模型造模方法 |
| 第二章 畅幽悠治疗功能性便秘的实验研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验药品 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 主要试剂耗材 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.1.5 主要实验试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物分组 |
| 2.2.2 模型的建立 |
| 2.2.3 造模评价方法 |
| 2.2.4 给药方案 |
| 2.2.5 一般情况记录 |
| 2.2.6 样本采集及处理 |
| 2.2.7 提取RNA |
| 2.2.8 mRNA逆转录成cDNA |
| 2.2.9 实时定量PCR(RT-PCR) |
| 2.2.10 Western Blot检测 |
| 2.2.11 病理检测 |
| 2.2.12 免疫组化 |
| 2.2.13 粪便菌群16SrDNA测序分析 |
| 2.2.14 ELISA |
| 2.2.15 短链脂肪酸检测 |
| 2.2.16 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 一般情况比较 |
| 2.3.2 粪便含水率比较 |
| 2.3.3 墨汁推进试验时间比较 |
| 2.3.4 血清激素ELISA检测 |
| 2.3.5 粪便16SrDNA检测 |
| 2.3.6 粪便短链脂肪酸(SCFA)含量检测 |
| 2.3.7 结肠组织PCR检测 |
| 2.3.8 结肠组织蛋白印迹 |
| 2.3.9 结肠水通道蛋白免疫组化 |
| 2.3.10 结肠组织病理 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 畅幽悠的成分、组方及用量依据 |
| 2.4.2 功能性便秘大鼠模型的造模及评估 |
| 2.4.3 畅幽悠增加粪便含水率机理的探索 |
| 2.4.4 畅幽悠促进肠蠕动机理的探索 |
| 2.4.5 畅幽悠对肠道菌门及物种多样性的影响 |
| 2.5 小结 |
| 2.6 创新点 |
| 2.7 不足与展望 |
| 第三章 畅幽悠治疗功能性便秘的临床研究 |
| 3.1 研究对象 |
| 3.1.1 病例来源 |
| 3.1.2 诊断标准 |
| 3.1.3 纳入标准 |
| 3.1.4排除标准 |
| 3.1.5 剔除或脱落标准 |
| 3.2 研究方法 |
| 3.2.1 病例分组 |
| 3.2.2 干预方案 |
| 3.2.3 观察项目 |
| 3.2.4 不良反应及处理 |
| 3.2.5 疗效评定 |
| 3.2.6 大便16SrDNA检测 |
| 3.2.7 统计方法 |
| 3.3 研究结果 |
| 3.3.1 失访、脱落情况 |
| 3.3.2 治疗前后疗效指标比较 |
| 3.3.3 患者治疗前后大便16SrDNA检测 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 实验用药药量及依据 |
| 3.4.2 治疗前后患者便秘及伴随症状的变化 |
| 3.4.3 治疗前后患者大便16SrDNA检测的变化 |
| 3.5 小结 |
| 3.6 创新点 |
| 3.7 不足与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（7）妊娠糖尿病SD大鼠模型的构建（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 理论研究 |
| 1 妊娠糖尿病的病因 |
| 1.1 饮食结构与妊娠糖尿病 |
| 1.2 肥胖与妊娠糖尿病 |
| 1.3 活动与妊娠糖尿病 |
| 1.4 压力与妊娠糖尿病 |
| 1.5 遗传与妊娠糖尿病 |
| 2 妊娠糖尿病的发病机制 |
| 2.1 胰岛素抵抗与妊娠糖尿病 |
| 2.2 炎症与妊娠糖尿病 |
| 2.3 胎盘与妊娠糖尿病 |
| 2.4 胰腺与妊娠糖尿病 |
| 研究目的 |
| 1 研究总目的 |
| 1.1 第一部分研究目的 |
| 1.2 第二部分研究目的 |
| 1.3 第二部分研究目的 |
| 第一部分 文献综述研究:不同妊娠糖尿病大鼠建模方法 |
| 1 妊娠糖尿病大鼠建模机制与方法 |
| 1.1 化学药物诱导法 |
| 1.2 饮食诱导法 |
| 1.3 药物联合饮食法 |
| 2 妊娠糖尿病SD大鼠模型成模标准 |
| 3 妊娠糖尿病SD大鼠中医模型造模方法研究现状 |
| 第二部分 文献系统评价与Meta分析研究:妊娠糖尿病SD大鼠成模标准的确立 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献检索 |
| 1.2 文献纳入与排除标准 |
| 1.3 文献筛选与资料提取 |
| 1.4 文献质量评价 |
| 1.5 数据分析方法 |
| 2 研究结果 |
| 2.1 文献检索结果 |
| 2.2 纳入文献基本特征 |
| 2.3 文献质量评价结果 |
| 2.4 系统评价与Meta分析结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 FBG 结果分析 |
| 3.2 不足之处 |
| 第三部分 实验研究:妊娠糖尿病SD大鼠模型的确立 |
| 1 研究对象和分组 |
| 2 主要仪器和试剂 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要试剂 |
| 3 实验步骤与方法 |
| 3.1 妊娠糖尿病 SD 大鼠模型的制作 |
| 3.2 妊娠糖尿病 SD 大鼠模型的评价 |
| 4 统计分析 |
| 5 质量控制 |
| 6 动物伦理 |
| 7 技术路线图 |
| 8 研究结果 |
| 8.1 妊娠糖尿病SD大鼠成模率 |
| 8.2 SD大鼠一般资料情况 |
| 8.3 SD大鼠血液指标检测结果 |
| 8.4 SD大鼠胰腺和胎盘病理组织形态学观察变化 |
| 8.5 SD大鼠胎盘GLUT1和GLUT3的Western Blot分析结果 |
| 8.6 iTRAQ定量蛋白质组学结果 |
| 9 讨论 |
| 9.1 构建妊娠糖尿病SD大鼠模型的关键因素 |
| 9.2 GDM SD 大鼠成模指标 |
| 9.3 妊娠糖尿病SD大鼠形态学结果分析 |
| 9.4 妊娠糖尿病SD大鼠模型的胎盘蛋白结果分析 |
| 结论 |
| 研究局限与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 妊娠糖尿病大鼠造模方法研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（8）产后抑郁症中医证候特点分析及逍遥散的干预作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 产后抑郁症中西医研究进展 |
| 1 产后抑郁症的西医研究进展 |
| 2 产后抑郁症的中医研究进展 |
| 3 逍遥散治疗产后抑郁症的病机及治则分析探讨 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 雌激素受体与产后抑郁症相关性研究进展 |
| 1 雌激素受体 |
| 2 雌激素受体介导的PKA/CREB/BDNF信号通路 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 产后抑郁症影响因素及中医证候特点的临床研究 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 中医治疗产后抑郁症用药规律的现代文献研究 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 逍遥散治疗产后抑郁症作用机制的动物实验研究 |
| 实验一 产后抑郁症大鼠模型的建立与评价 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验二 基于HPG轴探讨产后抑郁症发病机制及逍遥散干预作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验三 产后抑郁症大鼠下丘脑中雌激素受体介导的PKA/CREB/BDNF信号通路变化及逍遥散的干预作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 1 研究总结 |
| 2 创新性 |
| 3 不足之处与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）基于功能磁共振成像电针对肥胖迷你猪肠-脑轴调控的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 中医学对肥胖的认识及治疗 |
| 一、中医学对肥胖病因病机的认识 |
| 二、中医对肥胖患者大脑功能及饮食行为失常的认识 |
| 三、肥胖的中医治疗 |
| 第二节 现代医学对单纯性肥胖的认识及治疗 |
| 一、肥胖的发病机制 |
| 二、肠-脑轴在肥胖的发病及进展过程中的调控作用 |
| (一) 肠-脑轴对饮食行为的影响及调控 |
| (二) 肠-脑轴相关自主神经系统对肥胖的影响及调控 |
| (三) 肠-脑轴相关激素对肥胖的影响及调控 |
| (四) 肠-脑轴对肥胖相关炎症的影响及调控 |
| 三、现代医学的治疗手段 |
| 四、肥胖动物模型及其在针刺研究中的应用 |
| (一)肥胖啮齿类动物模型及其在针刺研究中的应用 |
| (二) 肥胖迷你猪模型及其在针刺研究中的应用 |
| 五、功能磁共振成像的原理及应用 |
| (一) 功能磁共振成像的原理 |
| (二) 功能磁共振在脑功能活动研究中的应用 |
| 六、针刺对肥胖动物和人类肠-脑轴的调控及研究进展 |
| (一) 针刺对肠-脑轴相关炎症的调节 |
| (二) 针刺对肠-脑轴相关激素的调节 |
| (三) 针刺对肠-脑轴相关自主神经系统的调节 |
| (四) 针刺对脑功能区的调节 |
| 第二章 基于功能磁共振急性电针不同穴位对正常迷你猪肠-脑轴的调控 |
| 第一节 材料与方法 |
| 一、实验动物及饲养 |
| 二、迷你猪穴位的定位 |
| (一) 定位规则 |
| (二) 穴位选择的依据 |
| (三) 迷你猪穴位和人类穴位的呼应关系 |
| 三、试验设计及方法 |
| (一) 试验设计 |
| (二) 迷你猪颈静脉置管手术 |
| (三) 急性电针刺激时迷你猪的麻醉方法 |
| (四) 电针刺激方法及针具 |
| (五) 功能磁共振脑成像试验方法 |
| 1. 功能磁共振试验时迷你猪的麻醉方法 |
| 2. 功能磁共振试验设计 |
| 3. 功能磁共振图像采集方法 |
| (1) T1加权解剖图像采集方法 |
| (2) 血氧水平依赖(BOLD)信号采集方法 |
| 4.功能磁共振图像和数据分析方法 |
| (1) 功能磁共振图像分析方法 |
| ① 图像格式处理方法 |
| ② 功能像层面的时间校正方法 |
| ③ 功能像层面的运动校正方法 |
| ④ 频域滤波与空间平滑方法 |
| ⑤ 种子点的选取方法 |
| (2) 功能磁共振数据分析方法 |
| (六) 样本采集方法 |
| (七) 肠-脑轴相关神经生理、代谢参数检测方法 |
| (八) 穴位温度及肛温测量方法 |
| 四、试验数据统计方法 |
| 第二节 试验结果 |
| 一、肠-脑轴相关神经生理、代谢参数分析结果 |
| (一) 激素及代谢参数分析结果 |
| (二) 自主神经稳态指数HRV分析结果 |
| 二、功能磁共振试验结果 |
| 三、穴位温度和肛温测量结果 |
| 第三节 讨论 |
| 第三章 基于功能磁共振慢性电针治疗对肥胖迷你猪肠-脑轴的调控 |
| 第一节 材料与方法 |
| 一、实验动物及饲养 |
| 二、肥胖迷你猪动物模型的制备 |
| 三、试验设计及方法 |
| (一) 试验设计 |
| (二) 肥胖迷你猪颈静脉置管手术 |
| (三) 动物分组及电针治疗方法 |
| (四) 功能磁共振脑成像试验方法 |
| 1. 功能磁共振试验时迷你猪的麻醉方法 |
| 2. 功能磁共振试验设计 |
| 3. 功能磁共振图像采集方法 |
| (1) T1加权解剖图像采集方法 |
| (2) 血氧水平依赖(BOLD)信号采集方法 |
| 4.磁共振图像和数据分析方法 |
| (1)功能磁共振图像处理分析方法 |
| ① 图像格式处理方法 |
| ② 功能像层面的时间校正方法 |
| ③ 功能像层面的运动校正方法 |
| ④ 频域滤波与空间平滑方法 |
| ⑤ 种子点的选取方法 |
| (2) 功能磁共振数据分析方法 |
| (五) 样本采集方法 |
| (六) 生物电阻抗体成分分析方法 |
| (七) 肠-脑轴相关神经生理、代谢参数分析方法 |
| (九) 穴位温度及肛温测量方法 |
| (十) 甜味食物偏好试验方法 |
| 四、试验数据统计方法 |
| 第二节 试验结果 |
| 一、肥胖迷你猪模型制备结果 |
| 二、一个月电针治疗后试验结果 |
| (一) 身体测量指标结果 |
| (二) 肠-脑轴相关神经生理、代谢参数分析结果 |
| (三) 功能磁共振试验结果 |
| (四) 穴位温度和肛温测量结果 |
| (五) 甜味食物偏好试验结果 |
| 第三节 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（10）基于新型网络药理学策略解析复方苦参注射液抗肝癌主要药效成分与作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 引言 |
| 2 肝癌研究现状 |
| 2.1 肝癌的发生机制 |
| 2.2 肝癌的治疗 |
| 2.3 肝癌动物模型研究进展 |
| 2.4 结语 |
| 3 复方苦参注射液应用与研究 |
| 3.1 复方苦参注射液化学成分研究 |
| 3.2 复方苦参注射液抗肿瘤药理作用 |
| 3.3 复方苦参注射液抗肿瘤作用机制 |
| 3.4 结语 |
| 4 网络药理学概述 |
| 4.1 网络药理学的理论基础 |
| 4.2 网络药理学研究方法 |
| 4.3 网络药理学在中药研究中的应用 |
| 4.4 结语 |
| 5 本课题的研究意义、研究思路、技术路线、研究内容及主要创新点 |
| 第二章 复方苦参注射液抗肝癌作用研究 |
| 第一节 复方苦参注射液对人肝癌SMMC-7721 细胞的作用 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 细胞培养 |
| 1.3.2 细胞存活率测定 |
| 1.3.3 克隆形成实验 |
| 1.3.4 细胞粘附实验 |
| 1.3.5 伤口愈合细胞划痕实验 |
| 1.3.6 Transwell细胞侵袭实验 |
| 1.3.7 细胞趋化运动能力实验 |
| 1.3.8 数据处理 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 复方苦参注射液对SMMC-7721 细胞活力的影响 |
| 1.4.2 复方苦参注射液对L02 细胞活力的影响 |
| 1.4.3 复方苦参注射液对SMMC-7721 细胞克隆形成能力的影响 |
| 1.4.4 复方苦参注射液对SMMC-7721 细胞粘附能力的影响 |
| 1.4.5 复方苦参注射液对SMMC-7721 细胞迁移能力的影响 |
| 1.4.6 复方苦参注射液对SMMC-7721 细胞侵袭能力的影响 |
| 1.4.7 复方苦参注射液对SMMC-7721 细胞趋化运动能力的影响 |
| 1.5 讨论与小结 |
| 1.5.1 小结 |
| 1.5.2 讨论 |
| 第二节 复方苦参注射液对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的药理作用研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 动物分组、造模及给药 |
| 2.3.2 样本收集 |
| 2.3.3 病理组织分析 |
| 2.3.4 血清生化测试 |
| 2.3.5 数据处理 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型的动态变化研究 |
| 2.4.2 复方苦参注射液对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的作用研究 |
| 2.5 小结与讨论 |
| 2.5.1 小结 |
| 2.5.2 讨论 |
| 第三章 基于计算系统药理学模型的复方苦参注射液抗肝癌主要药效成分群研究 |
| 第一节 复方苦参注射液中主要化学成分UPLC-MS定性分析 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料和仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.5 小结与讨论 |
| 1.5.1 小结 |
| 1.5.2 讨论 |
| 第二节 基于计算系统药理学模型的复方苦参注射液抗肝癌药效成分群研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞核磁备样方法、检测条件 |
| 2.3.2 细胞液质代谢组学备样方法、液相质谱条件及数据处理 |
| 2.3.3 统计分析 |
| 2.3.4 复方苦参注射液调节肝癌代谢紊乱的代谢酶预测 |
| 2.3.5 复方苦参注射液靶点预测 |
| 2.3.6 复方苦参注射液成分-靶点-互作蛋白-疾病基因网络构建 |
| 2.3.7 传播模型计算 |
| 2.3.8 数据处理 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 复方苦参注射液抗肝癌表型数据的整合及分析 |
| 2.4.2 复方苦参注射液靶向基因型数据的获取与分析 |
| 2.4.3 基于基因型-表型数据传播模型的构建 |
| 2.4.4 复方苦参注射液抗肝癌药效成分群的预测 |
| 2.4.5 复方苦参注射液抗肝癌药效成分群验证 |
| 2.5 小结与讨论 |
| 2.5.1 小结 |
| 2.5.2 讨论 |
| 第四章 基于定量成分导向网络药理学的复方苦参注射液抗肝癌机制研究 |
| 第一节 定量成分导向网络药理学预测复方苦参注射液抗肝癌机制 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料和仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 活性成分筛选和验证 |
| 1.3.2 靶点收集 |
| 1.3.3 网络构建和分析 |
| 1.3.4 通路预测 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 复方苦参注射液抗肝癌活性成分筛选和验证 |
| 1.4.2 复方苦参注射液抗肝癌网络分析 |
| 1.4.3 复方苦参注射液抗肝癌通路分析 |
| 1.5 讨论与小结 |
| 1.5.1 小结 |
| 1.5.2 讨论 |
| 第二节 基于Wnt/β-catenin信号通路的复方苦参注射液抗肝癌机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 Western Blot实验 |
| 2.3.2 免疫荧光测定 |
| 2.3.3 伤口愈合细胞划痕实验 |
| 2.3.4 Transwell细胞侵袭实验 |
| 2.3.5 统计分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 复方苦参注射液对网络药理学预测的关键蛋白表达的影响 |
| 2.4.2 复方苦参注射液对上皮间质转化过程蛋白表达的影响 |
| 2.4.3 复方苦参注射液对Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达的影响 |
| 2.4.4 复方苦参注射液抑制LiCl诱导的SMMC-7721细胞Wnt/β-catenin通路激活 |
| 2.4.5 复方苦参注射液通过Wnt/β-catenin信号通路抑制LiCl诱导的SMMC-7721 细胞上皮间质转化、迁移和侵袭 |
| 2.5 小结与讨论 |
| 2.5.1 小结 |
| 2.5.2 讨论 |
| 第三节 基于代谢组学研究复方苦参注射液调节肝癌代谢紊乱的作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 肝脏核磁备样方法及检测条件 |
| 3.3.2 血清核磁备样方法及检测条件 |
| 3.3.3 数据处理 |
| 3.3.4 代谢物和代谢酶测试 |
| 3.3.5 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 核磁图谱分析 |
| 3.4.2 寻找相关的生物标志物 |
| 3.4.3 复方苦参注射液对肝癌大鼠代谢轮廓的调节作用 |
| 3.4.4 柠檬酸和乳酸含量变化定量分析 |
| 3.4.5 复方苦参注射液对糖酵解中关键酶活性的作用 |
| 3.4.6 c-Myc介导复方苦参注射液对糖酵解的抑制作用 |
| 3.5 小结与讨论 |
| 3.5.1 小结 |
| 3.5.2 讨论 |
| 总结与展望 |
| 1 研究工作总结 |
| 2 不足和展望 |
| 参考文献 |
| 主要缩略词表 |
| 攻读学位期间取得成果 |
| 致谢 |
| 个人情况及联系方式 |
四、中医药研究中动物实验的设计与应用（论文参考文献）
- [1]中医药动物模型研究现状及展望[J]. 李磊,刘建勋,任钧国,付建华. 中国比较医学杂志, 2022
- [2]基于筋伤理论探讨退行性腰椎失稳的力学、病理学机制及手法干预研究[D]. 谢瑞. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]补肾健脾法防治结直肠癌辅助化疗所致骨髓抑制的疗效及机制探索[D]. 闫韶花. 中国中医科学院, 2021(02)
- [4]基于缝隙连接通道的附子心脏毒性早期预警及风险防控研究[D]. 钱真真. 中国中医科学院, 2021(02)
- [5]“治神调形”下头针对缺血性中风痉挛大鼠BDNF/TrkB/CREB及PI3K/Akt/GSK-3β通路影响的研究[D]. 胡冠宇. 长春中医药大学, 2021(01)
- [6]畅幽悠治疗功能性便秘的实验和临床研究[D]. 邓之彤. 广州中医药大学, 2021(02)
- [7]妊娠糖尿病SD大鼠模型的构建[D]. 江心泳. 福建中医药大学, 2021(09)
- [8]产后抑郁症中医证候特点分析及逍遥散的干预作用机制研究[D]. 许梦白. 北京中医药大学, 2021(01)
- [9]基于功能磁共振成像电针对肥胖迷你猪肠-脑轴调控的研究[D]. 张徐雯. 广州中医药大学, 2021(02)
- [10]基于新型网络药理学策略解析复方苦参注射液抗肝癌主要药效成分与作用机制[D]. 王珂欣. 山西大学, 2021(01)